国家高技术研究发展计划(2003AA223030)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：王兆芬蒋秀高李秀文耿排力聂一新更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心青海大学青海医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- flaB-PCR在钩端螺旋体病检测中应用被引量：7
- 2006年
- 目的探讨flaB-PCR对组织标本中钩端螺旋体检测的可行性,为钩端螺旋体流行病学调查提供一种快速、有效的技术手段。方法根据黄疸出血型钩体赖株高度保守序列flaB设计一对引物,用PCR方法对实验动物标本及疫区动物标本中的钩端螺旋体DNA进行flaB基因片断扩增,扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果该引物可特异性扩增钩端螺旋体DNA,而对本实验所用其它细菌均不扩增。肾组织中含10条钩端螺旋体经flaB-PCR扩增后,琼脂糖凝胶电泳可以目测到扩增产物。26份人工感染钩端螺旋体的动物脏器标本,flaB-PCR扩增阳性10份,阳性率38.46%;细菌分离阳性2份,阳性率7.69%,2种方法比较差异有统计学意义(χ2=6.93,P<0.01)。疫区70份蛙肾标本,分离细菌8株,阳性检出率11.43%;flaB-PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳阳性14份,阳性检出率20%。细菌分离阳性的标本flaB-PCR均为阳性。结论flaB-PCR灵敏、特异、快速,是钩端螺旋体检测的有效方法,可用于钩体病疫情监测和流行病学调查。
- 王兆芬蒋秀高李秀文聂一新顾黎莉耿排力
- 关键词：聚合酶链反应钩端螺旋体
- 聚合酶链反应和地高辛标记的核酸杂交技术用于钩端螺旋体的检测被引量：3
- 2006年
- 目的为钩端螺旋体快速诊断和流行病学调查建立一种比较理想的方法。方法根据钩端螺旋体赖株DNA合成一对flaB引物,用PCR技术对钩端螺旋体菌株、疫区现场动物标本等进行flab基因扩增,用地高辛(DIG)标记,flaB基因探针,用琼脂糖凝胶电泳和斑点杂交技术进行检测。结果纯化钩端螺旋体DNA 5 pg经flaB-PCR扩增后,琼脂糖凝胶电泳可以目测。用DIG标记的flaB探针可以检测到5 fg及以下的DNA扩增产物。疫区70份蛙肾标本,分离细菌8株,阳性率11．43％。flab扩增阳性14份,阳性率20％;DIG标记探针斑点杂交检测,阳性19份,阳性率为27．14％。结论PCR-斑点杂交是一种灵敏、特异、快速的钩端螺旋体检测方法,既可用于快速检测和早期诊断,也可用于疫情监测和流行病学调查。
- 王兆芬蒋秀高耿排力聂一新李秀文
- 关键词：钩端螺旋体聚合酶链反应
- 斑点杂交技术用于蛙钩端螺旋体病的流行病学调查研究
- 2009年
- 目的用Dot blotting杂交技术检测蛙类钩端螺旋体(钩体),为动物钩体的流行病学监测和调查提供一种比较理想的方法。方法根据钩体赖株DNA合成1对flaB引物,用PCR技术对钩体菌株、疫区现场蛙肾材料等进行flaB基因扩增,用地高辛(DIG)标记flaB基因探针,用斑点杂交技术进行检测。结果结果表明用DIG标记的flaB探针可以检测到5fg及以下的DNA扩增产物。疫区70份蛙肾标本,斑点杂交检测阳性19份,阳性率为27.14%。而钩体细菌分离阳性者只有8份,阳性率11.43%,PCR扩增阳性者14份,阳性率20.00%。结论Dot blotting杂交是一种灵敏、特异、快速的钩体检测方法,可用于两栖类钩体的流行病学监测和调查。
- 王兆芬蒋秀高李秀文
- 关键词：钩端螺旋体流行病学
