国家自然科学基金(30571658)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学唐都医院更多>>
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- 腺病毒载体RNA干扰抑制结缔组织生长因子表达及其抗纤维化作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默的抗纤维化作用。方法以介导CTGF基因沉默的腺病毒载体Ad.H1-CTGF感染HSC-T6细胞系,利用Real-time PCR及Western印迹在mRNA及蛋白质水平上观察CTGF基因沉默前后,CTGF自身及肝纤维化相关指标金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2及I型胶原(Col-Ⅰ)表达水平的变化。结果腺病毒载体Ad.H1-CTGF感染HSC-T6后,CTGFmRNA转录及蛋白表达分别下调85.32%和76.07%;肝纤维化相关指标TIMP-1、TIMP-2及COL-Ⅰ在mRNA转录(下调82.34%、56.93%和74.21%)及蛋白质表达(下调76.53%、64.02%和70.79%)水平亦显著下调。结论腺病毒载体Ad.H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达,导致肝纤维化相关指标TIMP-1、TIMP-2及COL-Ⅰ的表达明显下调,可能具有潜在的抗纤维化作用。
- 郝春秋彭梅娟谢玉梅周云魏欣马力王九萍张岩白雪帆贾战生
- 关键词：结缔组织生长因子RNA干扰腺病毒载体抗纤维化
- 结缔组织生长因子基因RNA干扰复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:构建能介导结缔组织生长因子(CTGF)基因RNA干扰的复制缺陷型腺病毒表达载体。方法:以大鼠CTGF基因为靶序列,设计并合成含编码短发夹RNA序列的寡核苷酸,构建腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF,酶切及测序分析正确后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染AD-293细胞,进行病毒包装,得到腺病毒载体Ad.H1-CTGF,用该载体感染HSC-T6细胞,观察其对CTGF基因表达抑制的效果。结果:构建的腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF经酶切、测序分析证实正确;包装的病毒载体滴度为4×1010PFU/mL,感染HSC-T6细胞后,Western印迹证实CTGF表达显著减少。结论:构建的腺病毒载体Ad.H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达,为抗纤维化研究提供了有力的工具。
- 郝春秋彭梅娟谢玉梅周云魏欣马力王素娜李瑞娟张岩白雪帆贾战生
- 关键词：结缔组织生长因子RNA干扰腺病毒载体
- 结缔组织生长因子——抗肝纤维化的新靶点被引量：1
- 2007年
- 彭梅娟郝春秋白雪帆
- 关键词：结缔组织生长因子抗肝纤维化新靶点转化生长因子BTGFΒ组织纤维化
- 介导大鼠结缔组织生长因子基因沉默的慢病毒载体转移质粒的构建及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:构建介导大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默的慢病毒载体转移质粒pGCL-CTGF,为进一步包装慢病毒载体奠定基础。方法:以大鼠CTGF基因为靶基因,根据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,设计4对有小发夹结构的RNAi靶点序列,退火形成双链DNA,双酶切后定向克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-GFP中,构建4个含靶基因片段的重组慢病毒载体转移质粒pGCL-CTGF,并对质粒进行PCR及测序鉴定。结果:CTGF的短发夹RNA(shRNA)片段被成功克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-GFP中,4个插入序列与设计的靶基因片段完全一致。结论:构建了能够表达4个含CTGF靶基因片段的慢病毒载体转移质粒,为进一步包装介导CTGF基因沉默的慢病毒载体奠定了基础。
- 彭梅娟郝春秋姜泓谢玉梅张岩李羽陈隆白雪帆
- 关键词：结缔组织生长因子慢病毒载体肝纤维化
- 抑制结缔组织生长因子表达对肝星状细胞增殖和活化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察抑制结缔组织生长因子（CTGF）表达对肝星状细胞系HSC-T6细胞周期、凋亡和增殖的影响。方法构建含有靶向CGTF小干扰RNA的重组慢病毒载体并感染HSC-T6细胞,应用MTT法检测细胞增殖情况;应用PI染色和流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果抑制CTGF基因表达可抑制HSC-T6细胞增殖,同时显著增加HSC-T6细胞凋亡,凋亡细胞的百分比为17.58±5.81%,明显高于空白对照组（5.12±1.21%）和阴性对照组（1.37±0.31%）;抑制CTGF基因表达可显著升高S期细胞百分比（53.24±4.47%）,空白对照组和阴性对照组分别为44.80±4.701%和42.10±1.40%,而处于G2~M期细胞百分比（0.04±0.07%）则较空白对照组（9.03±0.45%）和阴性对照组（12.19±5.62%）显著降低,但抑制CTGF对G0~G1期细胞百分比无影响。结论抑制CTGF可促进HSC-T6细胞凋亡,抑制其活化和增殖。抑制CTGF基因表达有可能作为抗肝纤维化的新靶点。
- 彭梅娟郝春秋张野谢玉梅张岩白雪帆
- 关键词：肝星状细胞结缔组织生长因子细胞周期
- 肝硬化上消化道出血并急性肠系膜上静脉血栓诊治体会被引量：6
- 2013年
- 目的 探讨肝硬化上消化道出血患者常规应用止血及抗纤溶药物的利弊.方法 回顾分析我院2008年1月-2010年12月收治的肝硬化并肠系膜上静脉血栓形成3例的临床资料.结果 3例均因呕血、便血入院,均有乙型病毒性肝炎肝硬化病史,诊断为肝硬化上消化道出血后予止血、抗纤溶等治疗1～2周,出现发热、腹胀、腹痛,B超检查提示门静脉主干血栓伴肠系膜上静脉血栓形成.例1、例2予尿激酶溶栓,例3行经颈静脉肝内门体分流术治疗,均痊愈出院.结论 肝硬化上消化道大出血并急性肠系膜上静脉血栓临床较为少见,分析发生原因可能与过度应用止血及抗纤溶药物有关.
- 谢玉梅贾战生彭梅娟康文臻张颖张素梅郝春秋
- 关键词：肝硬化上消化道出血肠系膜上静脉血栓形成误诊
- 促肝纤维化的关键因子——结缔组织生长因子被引量：2
- 2007年
- 结缔组织生长因子(CTGF)与转化生长因子β(TGF-β)高表达于多种纤维化的组织器官中,被认为是促纤维化发生的主要细胞因子。作为TGF-β生物学作用的下游效应介质,CTGF介导TGF-β促组织纤维化的效应,而与TGF-β抗炎、调节免疫等其他生物学效应无明显相关,因此可能成为抗肝纤维化的更好的靶点。
- 彭梅娟郝春秋白雪帆
- 关键词：结缔组织生长因子肝星状细胞
- 慢病毒载体介导的结缔组织生长因子基因沉默对下游基因的影响
- 2012年
- 目的利用RNA干扰技术,以慢病毒为载体,介导结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默,并观察其对下游基因表达的影响。方法用构建的CTGF小干扰RNA(siRNA)慢病毒转移质粒与包装质粒、包膜蛋白质粒共转染293T细胞,包装成介导CTGF基因沉默的慢病毒载体;感染肝星状细胞系HSC-T6,应用Real-time PCR和Western免疫印迹法筛选基因沉默效率最高的慢病毒载体;再根据绿色荧光蛋白(GFP)表达水平检测感染效率;应用Real-time PCR法检测CTGF基因沉默后HSC-T6中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2和I型胶原mRNA表达水平。结果包装的慢病毒载体感染HSC-T6细胞的效率高于50%;感染HSC-T6细胞后,CTGF的表达在mRNA和蛋白水平均受到明显抑制,其中TS1具有最佳的抑制效率;HSC-T6细胞CTGF基因沉默后,其TIMP-1、TIMP-2和I型胶原mRNA水平也显著降低。结论包装的慢病毒载体在HSC-T6中具有较好的感染效率和CTGF基因沉默效果,基因沉默后可进一步抑制HSC-T6细胞TIMP-1、TIMP-2和I型胶原的基因表达,这在抗纤维化的研究中具有积极的意义。
- 彭梅娟郝春秋张野谢玉梅张岩白雪帆
- 关键词：HSC-T6细胞结缔组织生长因子慢病毒载体
