国家科技支撑计划(2011BAK10B02)
- 作品数：13 被引量：55H指数：5
- 相关作者：曹际娟袁慕云许龙岩汪琳曹冬梅更多>>
- 相关机构：辽宁出入境检验检疫局广东出入境检验检疫局军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划辽宁省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- Gamma-PNA型表面等离子共振基因芯片的构建及性能研究被引量：1
- 2013年
- 建立一种基于Gamma-肽核酸(Gamma-PNA)探针的表面等离子体共振(SPR)基因芯片检测系统,提高检测的灵敏度和特异性。通过自组装分子单层(SAM)技术构建二维结构的表面化学;通过生物信息学方法设计Gamma-PNA,并固定于SAM修饰的SPR芯片表面,优化并确定实验的相关参数。结果表明,Gamma-PNA探针受缓冲液盐离子浓度影响较小,在盐离子浓度为0时仍有良好的杂交反应,并且Gamma-PNA受pH值影响较小,酸性环境更利于杂交。Gamma-PNA探针和传感器技术相结合,既实现了探针的无需标记和实时检测,又提高了杂交的效率和稳定性,为临床应用奠定了基础。
- 欧青叶顾大勇张妮奇何建安邵永红史蕾刘春晓赵纯中徐云庆
- 关键词：表面等离子体共振基因芯片
- 动物粪便中肠道出血性大肠杆菌PCR检测方法的建立被引量：1
- 2012年
- 【目的】建立一种能够快速检测动物源性肠道出血性大肠杆菌的PCR方法。【方法】按照华大基因公布的检测肠道出血性大肠杆菌的方法,应用PCR的方法检测腹泻动物粪便中分离到的大肠杆菌Stx2-2基因和AFF-I-2基因。【结果】在分离到的45株大肠杆菌中,Stx2-2基因阳性菌株有7株,AFF-I-2基因阳性菌株有22株,其中2种基因阳性菌株有2株,其血清型分别为O142和O127:K63。【结论】成功建立了快速检测动物源性肠道出血性大肠杆菌的PCR方法。
- 孙智勇宁保安高志贤
- 关键词：聚合酶链式反应
- 多种真菌毒素同时检测的生物芯片技术研究
- <正>目的真菌毒素是生物毒素中的一大类,大部分是小分子化学物质。由于其无色无味,性质稳定;并且毒性大,不易检测,而饮水与食品成为敌对、恐怖分子投毒的首要目标,一旦被染毒,后果不堪设想,而且监控起来难度较大;即使是对饮水和...
- 刘楠梁文发李晓丽马新华欧国荣王莹高志贤
- 文献传递
- 一种沙门氏菌化学发光酶免疫分析方法的建立被引量：5
- 2014年
- 主要研究沙门氏菌的化学发光酶免疫(CLEIA)快速检测方法。以猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)作为抗原,沙门氏菌多克隆抗体作为一抗,辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG(IgGHRP)作为酶标二抗,选用HRP-鲁米诺-H2O2化学发光体系,通过优化底物中各组分条件,建立了一种可同时检测3种沙门氏菌的间接CLEIA方法,此方法检测限为1×104 cfu/mL,且与其他3种常见肠道致病菌均无交叉反应。对人工添加牛乳样品预增菌后,应用建立的沙门氏菌间接CLEIA快速检测方法进行沙门氏菌检测,检测准确率可达到97.33%。该研究建立的沙门氏菌间接CLEIA快速检测方法简便、快速、准确,具有良好的特异性和重复性。
- 房芳敬思群李锦丰曹际娟徐静曲圣轩金福姝邹明强
- 关键词：沙门氏菌
- 焦磷酸测序检测食品中鼠伤寒沙门氏菌被引量：6
- 2013年
- 根据鼠伤寒沙门氏菌的特异序列,分别设计扩增引物和测序引物,建立焦磷酸测序检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。针对鼠伤寒沙门氏菌设计特异性扩增引物,对目标片段进行PCR扩增,然后制备单链模板,并利用测序引物进行焦磷酸测序。测序结果表明,6株不同来源的鼠伤寒沙门氏菌均可以扩增出碱基序列为TACAACCGGA GTGCACATTA ATCCCGCAGC的基因片段,而30株阴性对照菌株均未得到扩增。进行BLAST比对表明,该序列与GenBank中鼠伤寒沙门氏菌的碱基序列100%匹配。焦磷酸测序法是一种快速、准确的检测方法,可用于食品中鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。
- 曹冬梅徐杨袁慕云刘宇曹际娟
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌焦磷酸测序
- 阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2013年
- 试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D450nm值及P/N值选择1∶20000稀释的5C10作为包被抗体,1∶40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。
- 汪琳李勐伟刑佑尚柏亚铎尹羿蒲静乔彩霞高志强魏学良李朝明李琴
- 关键词：阪崎肠杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞ELISA检测
- 常见食源性致病菌PCR快速检测技术建立被引量：3
- 2014年
- 目的验证常见食源性致病菌聚合酶链式反应（PCR）检测方法特异性,并建立相应的快速简便PCR检测新体系。方法利用166株实验菌株验证4种常见食源性致病菌PCR检测方法的特异性;同时,针对副溶血性弧菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌的toxR、fimY、nuc、hly基因序列设计特异引物,通过统一PCR反应条件和缩短反应时间,实现对4种常见食源性致病菌的快速检测。结果 4种常见食源性致病菌PCR检测方法存在一定问题,不仅相关引物特异性差,而且操作繁琐、反应参数不统一、细菌总体检测周期长;而新建立的相应PCR检测体系具有良好的特异性和灵敏度,不仅能特异性扩增出目的片段,而且特异性达100%,其他干扰菌株均不能获得阳性结果,对致病菌DNA的检测限值为6pg;用该方法对人工污染食品样品进行检测,准确率为100%;完成检测的时间在3~4h以内。结论成功建立常见食源性致病菌的PCR快速检测技术,操作步骤简单、检测时间短,特异性强、灵敏度高。
- 何丽王新为叶桂煊王宇谌志强邱志刚陈照立李秀梅李君文金敏
- 关键词：食源性致病菌
- 建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法被引量：5
- 2014年
- 建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.
- 刘冉赵玉琢孙铭英曹际娟
- 关键词：实时荧光PCR鸡伤寒沙门氏菌
- 食品中副溶血性弧菌toxR和tdh基因双色荧光PCR检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 目的建立对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)特异性检测toxR(跨膜转录激活蛋白)基因和tdh(热稳定性直接溶血素)毒力基因的Taqman探针双色荧光PCR检测方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立Taqman探针双色荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度试验;对副溶血性弧菌分离菌株实施检测,了解其tdh基因和tdh基因分布情况。结果结果表明,副溶血性弧菌标准菌株和3株从食物中毒患者中分离获得的分离株均出现toxR基因和tdh扩增曲线,而溶藻弧菌、单增李斯特菌等31株弧菌属其他菌株和肠杆菌科的菌株未见扩增曲线。从食品中分离的37株副溶血性弧菌分离株均未携带tdh毒力基因。副溶血性弧菌检测灵敏度可达到3.6×102cfu/mL。结论该方法可用于同时检测食品中副溶血性弧菌的特异性和毒力基因。
- 曹冬梅袁慕云许龙岩曹际娟
- 关键词：副溶血性弧菌
- 悬浮芯片技术在典型环境化学污染物多元检测中的应用被引量：1
- 2013年
- 当前，我国化学性污染严重，恶性污染事件层出不穷。工农业生产和生活带来的污染不仅是导致生态环境恶化和环境质量下降的主要原因，也是影响健康的重要因素。饮水与食品安全已成为全球关注的焦点，并且在我国，这是一个严峻而突出的问题。多年的监测数据表明，
- 刘楠
- 关键词：芯片技术化学性污染污染事件环境质量
