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一株新基因型猪圆环病毒Ⅱ型的鉴定被引量：2: 2013年; 为了解新近出现的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的基因变异及其基因型信息。用PCR技术从新近发生断奶后多系统消耗综合征的病猪组织中扩增和克隆出一株PCV2全基因组序列,并进行了遗传变异分析。结果显示:该PCV2毒株基因组全长为1767bp,与部分其他PCV2毒株的核苷酸同源性达94.0%以上,并显示出一定的地域、时间相关性。病毒ORF2基因系统发育进化分析显示:该PCV2毒株与已有PCV2基因型的遗传距离均大于0.035,因而被划入到一个新的PCV2基因型,暂命名为PCV2d,属于在中国新近出现的一种PCV2基因型。研究结果表明,克隆鉴定了一株新基因型PCV2。; 谢俊岭陈晓平孟凡伟王保有周双海王志军; 关键词：猪圆环病毒II型基因变异进化分析基因型

猪圆环病毒Ⅱ型感染性DNA克隆的构建被引量：2: 2012年; 为了构建猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染性DNA克隆,并为PCV2的突变体构建及其致病机理研究建立基础。用PCR方法从PCV2 DNA质粒中扩增出PCV2全基因组片段,将其插入到pBluescript-SK载体中,构建出单拷贝PCV2 DNA克隆,并进一步构建了双拷贝PCV2 DNA克隆,将PCV2 DNA克隆转染PK-15细胞,以获得PCV2拯救病毒,并初步测定了拯救病毒的体外增殖能力。结果显示:成功获得了PCV2拯救病毒,并能够在PK-15细胞中进行稳定传代,其TCID50在连传5代后达到10-6.05/mL,与其亲本病毒相近,显示出较高的感染滴度。研究结果表明,成功构建了具有较高感染性的PCV2感染性克隆,为PCV2的生物学特性及致病机理研究奠定了基础。; 谢俊岭邵小雪孟凡伟周双海; 关键词：增殖能力

猪圆环病毒2型体外感染后猪血管内皮细胞中共刺激分子和细胞因子的mRNA转录动态: 将猪圆环病毒2型(PCV2)体外接种猪血管内皮细胞(VEC),同时设立对照,在接种后不同时间收集细胞,用实时荧光定量PCR技术检测CD80,CD86,IL-1β,IL-8,MCP-1及GM-CSF的mRNA转录动态,分析...; 周双海汤世坤邵小雪; 关键词：猪圆环病毒2型抗原递呈

猪圆环病毒检测技术研究进展被引量：3: 2007年; 猪圆环病毒(PCV)具有PCV1和PCV2两种基因型,PCV1无致病性,而PCV2可引起猪断奶后多系统消耗综合征等多种疾病。PCV2相关疾病已给世界养猪业造成了巨大经济损失。因此,建立一套快速、有效的PCV检测方法非常重要。笔者综述了当前PCV的检测技术。; 汤世坤周双海张广学周志山吴国娟; 关键词：猪圆环病毒

Construction and Comparison of Three Kinds of Infectious DNA Clones of Porcine Circovirus Type 2: Porcine circovirus type 2(PCV2)is the primary causative agent of several swine diseases.The infectious molecul...; Junling XIE

Construction of a Chimeric Porcine Circovirus(PCV1-2)from China Strain: Porcine circovirus type 1(PCV1)and PCV2 share similar genomic organizations,but PCV1 is nonpathogenic and PCV2...; Junling XIE a1

DNA免疫法制备猪圆环病毒Ⅱ型ORF3抗体被引量：1: 2012年; 为了制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)开放阅读框3(ORF3)蛋白的抗体,并为ORF3功能研究奠定基础,用PCR方法扩增PCV2ORF3基因,对其PCR产物用EcoRI与XhoI进行酶切,并对真核表达载体pCDNA3.1(+)进行同样酶切,连接2种目的酶切产物后转化E.coliDH5a感受态,菌落PCR和序列测定结果显示成功构建出重组质粒pCDNA3.1-PCV2ORF3。将该重组质粒接种BALB/c小鼠,用间接免疫荧光(IFA)检测小鼠血清PCV2ORF3抗体的特异性及其效价。IFA结果证实经PCV2ORF3重组质粒接种所制备的小鼠血清是PCV2ORF3的特异性抗体,小鼠血清PCV2ORF3抗体效价在经过4次接种后均达到1:25以上,抗体检测结果表明成功制备了具有较高效价的PCV2ORF3抗体。研究结果提示:可以通过质粒DNA免疫方法来快速、简便地制备PCV2ORF3抗体,为PCV2ORF3抗体制备提供了一种新的有效途径。; 谢俊岭耿美鸽吴迪卻小宁周双海; 关键词：DNA免疫小鼠效价

猪圆环病毒2型实时定量PCR检测方法的建立被引量：2: 2010年; 用PCR技术从一临床病猪组织中扩增出猪圆环病毒2型(PCV2)417 bp片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中,构建成含有PCV2基因片段的重组质粒。应用该重组质粒进行实时荧光定量PCR,建立了PCV2 DNA的实时PCR标准曲线及其直线回归方程。结果显示该方法重复性好,其检测灵敏度达到102拷贝/μL,检测样品时特异性强。此研究表明,所建立的PCV2 DNA实时定量PCR方法具有重复性好、敏感性高与特异性强等特点,能够用于PCV2的定量检测。; 韩玉环汤世坤周双海刘玉洁朱荣昌吴国娟; 关键词：PCV2 实时定量PCR

猪圆环病毒2型感染性克隆构建的比较分析: 危害养猪业的猪圆环病毒2型(PCV2)的致病机制仍不太清楚,而感染性克隆是研究病毒致病机制的有效工具。本研究用基因重组技术构建了pMD-PCV2、pSK-PCV2和pSK-2PCV2三种DNA分子克隆,并比较了其在PK-...; 周双海谢俊岭; 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆转染效率; 文献传递

猪圆环病毒1型天津株全基因组的克隆与序列分析被引量：1: 2010年; 从天津地区分离和克隆出1株猪圆环病毒1型(PCV1),并进行基因组序列分析。参照GenBank上PCV1全基因组序列设计1对引物,用PCR技术从天津一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列,并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示,该株PCV1基因组全长1759bp,与国内外其他各株PCV1的核苷酸同源性达98.2%以上。主要开放阅读框(ORF)序列结果显示,该分离株与国内外其他PCV1毒株间的ORF1与ORF2的核苷酸同源性分别为97.5%～99.8%和92.7%～99.9%。虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高,但还是呈现出一定的地域相关性。; 韩玉环高峰周双海邵小雪王志军王保有刘玉洁; 关键词：猪圆环病毒1型全基因组克隆

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