广东省科技攻关计划(2008A010900002)
- 作品数：2 被引量：37H指数：2
- 相关作者：潘力王斌崔翠李俊星苗小康更多>>
- 相关机构：华南理工大学更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 根癌农杆菌介导酸性蛋白酶在泡盛曲霉中表达的研究被引量：2
- 2011年
- 利用Gateway克隆技术快速构建丝状真菌表达载体,以米曲霉α-淀粉酶A启动子(amyB)、α-糖苷酶终止子(agdA)及黑曲霉酸性蛋白酶基因(pepA)分别构建入门载体,以带有潮霉素抗性标记(hygB)的农杆菌双元载体pHGW为目的载体,通过LR连接反应,构建根癌农杆菌介导丝状真菌重组表达载体pHGW-apA。转化泡盛曲霉宿主菌,筛选的转化子经传代培养确定其遗传稳定性,PCR及测序分析表明,hygB和目的基因pepA整合到了泡盛曲霉基因组。转录水平上的RealTime-PCR定量分析、表达水平上的Western Blotting分析以及培养液酶活分析表明酸性蛋白酶基因pepA在泡盛曲霉中得到正确表达。为丝状真菌表达载体快速构建与外源基因在丝状真菌中快速表达提供了可行的方法。
- 潘力李俊星苗小康
- 关键词：根癌农杆菌PEPA双元载体
- 一种用于PCR扩增的丝状真菌DNA快速提取方法被引量：35
- 2010年
- 丝状真菌在工业、农业、医药以及基础生物学研究中具有重要作用。利用遗传转化技术对丝状真菌进行菌株改良和基因功能分析,也越来越受到重视。然而,丝状真菌DNA提取方法繁琐、费时,难以满足利用PCR技术高通量筛选转化子的需要。本文以曲霉菌为例建立了一种快速提取丝状真菌DNA的实验方法,微波处理置于10×TE buffer中的菌丝即可得到DNA。RAPD试验和PCR扩增证明,该方法提取的DNA能够达到PCR扩增的要求。研究结果为高通量快速筛选丝状真菌转化子奠定了基础。
- 潘力崔翠王斌
- 关键词：丝状真菌DNA提取转化子RAPD
