国家自然科学基金(30300141)
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
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- 正常人骨髓成纤维样基质细胞对HL-60/VCR耐药细胞增殖的影响
- 2004年
- 目的 观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病多药耐药细胞HL-60／VCR增殖和分化的影响。方法 采用四唑氮蓝(MTT)法进行HL-60／VCR细胞药物敏感实验。建立HL-60／VCR细胞和HFCL细胞共培养体系,苔盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。结果 HL-60／VCR细胞对多种药物耐药。与HFCL细胞共培养后,HL-60／VCR细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用>用transwell组。同时发现HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增多,S期细胞减少;同时CD11b和CD14表达增高,CD13和CD33变化不大;且NBT阳性细胞轻度增多。Western blot检测结果显示,PCNA表达下调,以直接接触组为甚。但是P-gp表达无变化。结论 正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病MDR细胞HL-60／VCR的增殖,抑制PCNA的表达,出现G1期阻滞,并部分向单核细胞分化。
- 梁蓉黄高昇王哲冯骥良张伟平杨国嵘郭英王娟红
- 关键词：多药耐药细胞增殖细胞分化
- 拓扑异构酶Ι抑制剂诱导白血病HL60/VCR耐药细胞凋亡的研究被引量：6
- 2004年
- 目的 研究拓扑异构酶I抑制剂 (topotecan ;TPT)对白血病耐药细胞HL6 0 /VCR诱导凋亡的作用。方法 瑞氏 吉姆萨染色和吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)染色进行形态观察 ,采用TUNNEL、流式细胞仪检测细胞周期和AnnexinV观察TPT对HL6 0 /VCR细胞的抑制效应和促凋亡作用。WesternBlot检测bcl 2、活化的caspase 3和P糖蛋白 (Pgp)的表达变化。 结果 经TPT处理后的HL6 0 /VCR细胞 ,在光镜和AO/EB染色中均可见到典型的凋亡细胞形态学改变 ,并具有时间和剂量依赖性 ;AnnexinV染色后能检测到早期凋亡细胞 (2 6 .8% ) ,细胞周期显示 :G1期细胞比例增高 ,S期减低 ,并有 2 1.8%凋亡峰 ;TUNNEL能检测到 (6 2 .2± 3.5 ) %的阳性细胞 ;伴有活化的caspase 3的表达和bcl 2的下调 ,而Pgp的表达在细胞凋亡前后无变化。结论 TPT能诱导白血病耐药细胞凋亡 ,该过程伴有caspase 3的活化和bcl 2的表达下调。
- 梁蓉黄高升王哲冯骥良郭英杨国嵘王娟红张伟平
- 关键词：白血病多药耐药凋亡
- HFCL细胞下调HL-60细胞cxcr4基因的表达及意义
- 2005年
- 目的:研究正常人骨髓成纤维样基质细胞HFCL对 急性髓细胞白血病HL 60细胞cxcr4基因表达的影响及意义. 方法:采用流式细胞仪检测细胞周期,NBT还原实验和 CD11b,CD14,CD13,CD33细胞表面抗原的测定作为细胞分 化的指标;采用半定量RT PCR,Northernblot检测cxcr4基因 的表达.结果:HL 60细胞与HFCL细胞共培养后,NBT阳性 细胞增高,CD11b和CD14的表达增多,并有明显的统计学意 义;而且cxcr4mRNA的表达下调.结论:HFCL细胞能诱导 HL 60细胞部分向单核细胞分化,并使趋化因子受体cxcr4表 达下调.
- 梁蓉黄高昇王哲张永清王娟红王文清张伟平白庆咸陈协群
- 关键词：急性髓细胞性白血病CXCR4
- 氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究被引量：7
- 2005年
- 目的 探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果 0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论 GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。
- 梁蓉王哲黄高乔岩王爱勤董宝侠郭英王娟红
- 关键词：K562细胞凋亡CASPASE-3CASPASE-3BCL-2蛋白表达凋亡诱导作用细胞生长曲线BLOT检测
- HFCL细胞对U937细胞的诱导分化作用
- 2004年
- 为了观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对急性单核细胞白血病U937细胞促分化作用,及其对经典诱导分化剂TPA诱导分化作用的影响,先建立U937细胞和HFCL细胞共培养体系,以细胞形态学改变、硝基四氮唑蓝(NBT)、流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原作为诱导分化指标Western印迹检测P38蛋白的表达变化。结果发现,与HFCL细胞共培养后,U937细胞出现分化成熟的形态学改变,且与HFCL细胞直接接触组的诱导分化作用大于用transwell组。同时发现U937细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增高,S期细胞减少;CD11b、CD13、CD14和CD33表达增高;且NBT阳性细胞增高至46.3％。Western印迹检测结果显示,直接接触组总P38蛋白表达增加。而且HFCL细胞还能增强TPA对U937的诱导分化作用。
- 梁蓉黄高昇王哲杨国嵘郭英张伟平董宝侠王娟红
- 关键词：分化骨髓基质细胞细胞形态学
- 骨髓成纤维样基质细胞系对急性髓细胞白血病细胞系增殖与分化影响的研究被引量：3
- 2007年
- 目的:以急性髓细胞白血病(acute myeloid leukaemia,AML)细胞系为研究对象,观察正常人骨髓成纤维样细胞系(human bone marrow fibro-blastoid stromal cell line,HFCL)对急性单核细胞白血病细胞系U937、急性粒细胞白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60/VCR增殖和分化的影响。方法:建立U937、HL-60和HL-60/VCR细胞与HFCL细胞的共培养模型,实验分对照组、直接接触组和transwell组。采用台盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14和CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;West-ernblot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果:与HFCL细胞共培养96h后,U937、HL-60和HL-60/VCR细胞的生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用tr-answell组,P<0.01。同时发现AML细胞系与HFCL细胞共培养后,G0/G1期细胞比例均增高,而S期细胞均减少,P<0.01;尤其是直接接触组CD11b和CD14表达也均增高(P<0.01),CD13和CD33变化不大,NBT阳性细胞轻度增高,且差异有统计学意义。Western blot检测结果显示,3种AML细胞系PCNA表达下调;以直接接触组为甚。提示介导着白血病细胞和骨髓基质细胞间的相互作用的整合素β1(VLA-4)和β2(LFA-1),在HFCL细胞对AML细胞生长作用影响中起着不可忽视的作用。结论:HFCL对3种具有代表性的AML细胞系U937、HL-60和HL-60/VCR有增殖抑制和诱导分化作用,除了能抑制AML细胞的生长,抑制PCNA的表达,出现G0/G1期阻滞外,还能诱导其部分向单核细胞分化。
- 梁蓉黄高昇陈协群白庆咸王哲张永清朱华锋
- 关键词：白血病粒细胞急性成纤维细胞骨髓细胞细胞分化细胞
- 正常人骨髓基质细胞对HL-60和HL-60/VCR细胞凋亡易感性的影响被引量：4
- 2005年
- 为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60／VCR 凋亡易感性的影响,先建立HL-60或HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养体系;采用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙／ 溴化乙啶(AO／EB)染色,分别在光镜和荧光显微镜下进行形态学观察;TUNEL检测晚期凋亡细胞,流式细胞术检 测细胞周期、凋亡峰和annexin V阳性的早期凋亡细胞;Western blot检测Bcl-2、活化的胱冬蛋白酶(caspase)-3蛋 白和P糖蛋白(Pgp)的表达变化。结果表明,经topotecan(TPT)处理后的HL-60和HL-60／VCR细胞,在光镜和荧光 显微镜下均有典型的凋亡细胞形态学改变,这些改变具有时间和剂量依赖性;annexin V染色后能检测到早期凋亡 细胞;细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期减低,并有明显凋亡峰;TUNEL能检测到许多阳性细胞;同时出现活 化的caspase-3,伴有Bcl-2的表达下调,但与HFCL细胞共培养后,经TPT处理的HL-60和HL-60／VCR细胞中早期 和晚期凋亡细胞有所减少,凋亡峰减低,而且活化的Caspase-3表达减弱,Bcl-2蛋白表达上调,且以直接接触组为 甚。结论:正常骨髓成纤维样基质细胞HFCL能轻度降低白血病HL-60和HL-60／VCR细胞对TPT的凋亡易感性, 并有caspase-3和Bcl-2重要信号传导分子的参与。
- 梁蓉黄高昇王哲陈协群白庆咸张伟平王娟红王文清郭英
- 关键词：骨髓基质细胞HL60细胞细胞凋亡
