河南省教育厅科学技术研究重点项目(14A240003) 作品数:7 被引量:18 H指数:3 相关作者: 宁黔冀 吕艳杰 关建义 王文锋 杨洪 更多>> 相关机构: 河南师范大学 新乡医学院 更多>> 发文基金: 河南省教育厅科学技术研究重点项目 国家自然科学基金 河南省基础与前沿技术研究计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
KK-42对日本沼虾表皮蛋白基因MnCP-1表达的上调效应 被引量:1 2018年 为探讨KK-42显著缩短日本沼虾(Macrobrachium nipponense)蜕皮周期的可能机制,本研究采用RACE技术首次从头胸甲中获得了一个含几丁质结合-4(chitin_bind_4)结构域的表皮蛋白(cuticle proteins,CPs)c DNA基因全长,命名为Mn CP-1。该序列全长604 bp,可编码122个氨基酸。氨基酸序列比对显示,Mn CP-1与普通黄道蟹(Cancer pagurus,P81576.1)相似性最高(61%)。系统进化分析发现,Mn CP-1与地中海实蝇(Ceratitis capitata)聚类为一支。Real-time PCR结果显示,头胸甲中Mn CP-1在蜕皮前期晚期(D3-4期)和蜕皮后期(A期)的表达量较高,而在蜕皮间期(C期)和蜕皮前期早期(D0-2期)的表达量较低。KK-42处理能显著上调C期和D0-2期Mn CP-1的表达,在处理后6、24和48 h,其mRNA表达水平较对照组高3倍以上。结果表明,头胸甲上皮细胞Mn CP-1的表达与蜕皮周期有关,KK-42可显著上调C期和D0-2期Mn CP-1的表达。 苗泽龙 黄亚龙 吕艳杰 宁黔冀关键词:头胸甲 日本沼虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶基因克隆及KK-42对其表达的影响 被引量:4 2018年 为进一步探究KK-42缩短蜕皮周期的分子机制,本研究以日本沼虾幼虾为材料,通过RACE技术克隆了几丁质降解途径中的限速酶基因NAGase c DNA全长序列,定量测定了KK-42处理不同时间对头胸甲表皮组织中NAGase m RNA相对表达量和对应酶活力的影响。序列分析结果显示,NAGase c DNA全长2 536 bp,编码617个氨基酸。同源性分析显示,NAGase基因保守性较低,与凡纳滨对虾的相似度最高,仅为68%。系统进化分析显示,日本沼虾、三疣梭子蟹、凡纳滨对虾、中国明对虾聚为一个大类,凡纳滨对虾和中国明对虾亲缘关系更为接近,日本沼虾单列一个分支。Real-time PCR分析表明,NAGase相对表达量在蜕皮前D_0期达到峰值;KK-42处理后3 h,D_4期的相对表达量是对照组的253%,处理后6 h,C期和D_0期较对照组分别提高了226%和187%。NAGase酶活力从C期到D_4期逐渐提高,KK-42处理能明显提高C和D_0期NAGase酶活力,尤其对C期的影响最为显著,在处理后3、6和12 h分别提高了11.26、5.99、7.15倍。结果提示,KK-42对日本沼虾表皮NAGase的诱导效应可能是其缩短蜕皮周期的分子机制之一。 吕艳杰 关建义 杜娟 宁黔冀关键词:日本沼虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 克隆 咪唑类物质KK-42对日本沼虾头胸甲中MnCP-3表达的影响 被引量:1 2018年 为了分析咪唑类物质KK-42对日本沼虾表皮蛋白(Macrobrachium nipponense cuticle proteins,MnCPs)基因表达的影响,首次在头胸甲中克隆得到一条基因,通过生物信息学分析确定其属于CPs基因,并将其命名为MnCP-3.采用Real-Time PCR(RT-PCR)测定了MnCP-3基因在头胸甲中蜕皮间期(C)、蜕皮前早期(D0-2)、蜕皮前晚期(D3-4)和蜕皮后期(A)4个不同蜕皮时期中的表达水平以及KK-42处理后表达水平的变化.结果显示,MnCP-3在D3-4期和A期表达较高.KK-42处理后,C期MnCP-3的表达水平在处理后3~48h相对于对照组显著升高,在D0-2期MnCP-3的表达水平在3、6、24和48h显著升高.结果提示,MnCP-3可能参与新的外表皮和内表皮形成,KK-42处理可显著诱导C期和D0-2期MnCP-3的表达,提前启动蜕皮过程的进行,加快新表皮的形成. 宁黔冀 吕艳杰 黄亚龙 陈柯关键词:日本沼虾 头胸甲 山药多糖组分分析及其对镉致大鼠肝脏损伤作用的研究 被引量:8 2014年 目的初步探讨山药多糖的单糖组分,并分析其对镉致大鼠肝脏损伤的拮抗作用。方法通过闪式提取法提取山药多糖RDCP,以Sephadex G-50、DEAE-Sepharose CL-6B及TLC法初步探讨山药的单糖组成,并以冷冻干燥法分别获得组分RDCP-A及RDCP-B。选用体重为(110±10.0)g的110只SD大鼠,雌雄各半,将其随机分为11组,即对照组,镉染毒组,灌胃RDCP-A 50、200和500 mg/kg组,灌胃RDCP-B 50、200和500 mg/kg组,灌胃1/2RDCP-A+1/2RDCP-B 50、200和500 mg/kg组,对照组与镉染毒组分别灌胃0.9%生理盐水,2 h后镉染毒组及各糖组腹腔注射氯化镉1.0 mg/kg,对照组腹腔注射0.9%生理盐水,灌胃14 d,末次染毒24 h后处死大鼠,分别测定肝脏丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及血清中丙氨酸转氨酶(ALT)活力。结果山药多糖中的单糖主要以甘露糖及半乳糖或葡萄糖等组成。大鼠镉染毒14 d,肾脏脏器系数增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);但灌胃山药多糖之后染毒镉,随着RDCP-B摄入剂量的增加(500 mg/kg),其肝脏、肾脏脏器系数与镉染毒组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),灌胃500 mg/kg 1/2RDCP-A+1/2 RDCP-B组,其肾脏脏器系数与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠肝脏MDA、SOD及血清ALT在染毒后与对照组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。大鼠先摄入山药多糖,之后染毒镉,其中RDCP-B 200和500 mg/kg组其SOD和ALT与镉染毒组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而灌胃200 mg/kg RDCP-B对肝脏MDA的影响不大(P>0.05),但当升高到500 mg/kg时,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对于500mg/kg 1/2RDCP-A+1/2 RDCP-B组,其MDA、SOD和ALT与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论山药多糖组分中的RDCP-B对镉致大鼠肝脏损伤有明显的拮抗作用。 徐光翠 高启禹 李延兰 王文锋关键词:山药多糖 分离纯化 镉 KK-42对日本沼虾幼虾蜕皮周期的影响及其可能机制 被引量:4 2016年 为了探索KK-42对日本沼虾幼虾蜕皮周期的影响及其可能的机制,以水产基地自行繁殖的2月龄幼虾(体长1.2~2.0 cm)为材料,捕捞后暂养于流水养殖水槽,水温(26±1)°C,每天投喂2次,1周后用于实验研究。用1.95×10–4 mol/L的KK-42溶液(处理组)或不含KK-42溶液(对照组)浸润1 min,取出,一部分用于幼虾生长速率、蜕皮周期的测定;从剩余部分中选择处于蜕皮间期(C)和蜕皮前期(D)的幼虾,Real-time PCR分析表皮几丁质酶1基因(Mnchi-1)的转录水平,同时进行表皮几丁质酶的活力测定。在实验观察期间,KK-42处理组平均体质量均显著高于对照组,体质量增长率的升高出现在处理后的前2周。随着幼虾的生长,蜕皮周期的持续时间均趋于延长,在4个连续测定的蜕皮周期中,KK-42处理能明显缩短前2个周期的时程,分别从(8.70±1.07)、(9.81±0.43)d/周期缩短为(6.93±0.97)、(8.11±1.20)d/周期。KK-42处理可显著上调C期表皮Mnchi-1的表达,在第3、6和9 h,其m RNA水平比对照组高10倍以上,酶活性同比提高2倍以上;KK-42对D期的影响相对较弱,该基因的表达水平及酶活性仅在12 h显著升高。结果表明,KK-42能显著诱导D期、尤其是C期表皮Mnchi-1基因的表达,提高几丁质酶活性,推测幼虾对旧表皮的分解提前至C期,这可能是KK-42缩短幼虾的蜕皮周期、促进其生长的分子机制之一。 关建义 吕艳杰 张宇 宁黔冀关键词:日本沼虾 几丁质酶 日本沼虾表皮蛋白基因的克隆及表皮组织差异性表达分析 被引量:2 2018年 为探究日本沼虾表皮蛋白(Macrobrachium nipponense cuticle proteins,MnCPs)表达模式与表皮组织差异的关系,根据日本沼虾表皮组织转录组测序结果,从头胸甲中克隆到1个含几丁质结合-4(chitin_bind_4)结构域的表皮蛋白(cuticle proteins,CPs)基因,命名为MnCP-2,经BLAST检索,MnCP-2与远海梭子蟹(Portunus pelagicus,ABM54465.1)有50%的相似性.以健康幼虾(体长3.0~4.0cm)的头胸甲、尾扇、游泳足和步足4种厚度存在差异的表皮组织为材料,分别提取C期、D_(0-2)期、D_(3-4)期和A期的RNA,采用Real-time PCR技术,分析了MnCP-2在蜕皮周期不同阶段的相对表达量.结果显示,MnCP-2在头胸甲、尾扇和游泳足中表达水平的峰值出现在D_(3-4)期,而在步足中则出现在D_(0-2)期.提示MnCP-2编码的蛋白可能在新外表皮的形成中发挥重要作用,它在表皮组织不同部位的差异性表达可能是导致表皮结构差异的原因之一. 苗泽龙 吕艳杰 张俊芳 杨洪 宁黔冀关键词:日本沼虾 表皮蛋白 头胸甲 基因克隆 咪唑类物质KK-42提高日本沼虾成活率机制的研究 被引量:1 2014年 目的:探讨KK-42提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾成活率的机制.方法:首先将虾分为两组,分别用1.95×10^-4mol/L的KK-42溶液(处理组)或不含KK-42的溶液(对照组)浸泡1 min后取出,放置养殖水槽中饲养12h后,进行嗜水气单胞菌感染实验,每组又分别分为两个亚组(Challenged和Unchallenged);于感染后的不同时刻,分别测定日本沼虾的成活率、细菌清除率及proPO基因(甲壳动物重要的免疫因子)表达水平和酶活力的变化.结果:KK-42预处理可以提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾的成活率及细菌清除率;KK-42处理后3、12和24 h,proPO基因表达明显提高,PO活力也于6~48 h持续升高,在24 h达到最高值,是对照组的2.3倍.嗜水气单胞菌刺激也可诱导血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力的增加,但对照组分别在菌注射后3h和6 h,mRNA表达突然升高,而KK-42实验组则在整个时期处于缓慢升高趋势;PO活力变化趋势和基因表达相一致.结论:KK-42可以诱导proPO mRNA表达水平及PO活力的升高,并能提高沼虾细菌清除能力,可能是KK-42提高日本沼虾成活率的分子机制之一. 王文锋 关建义 郭爱莲 杨洪 宁黔冀关键词:嗜水气单胞菌