国家教育部博士点基金(20050610094)
- 作品数：11 被引量：30H指数：4
- 相关作者：屈艺母得志张林赵凤艳黄翔更多>>
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- 显性失活缺氧诱导因子-1通过下调VEGF表达促进宫颈癌细胞凋亡
- 2008年
- 将表达野生型缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α,表达抑制型HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dominant negative HIF-1α和空质粒pcDNA3.1稳定转染人宫颈癌SiHa细胞,研究HIF-1α对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响.采用免疫细胞化学法和Western印迹检测HIF-1α与VEGF蛋白的表达;CoCl2化学缺氧法处理细胞,采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况.结果显示,显性失活HIF-1α能下调VEGF蛋白的表达,促进细胞缺氧条件下的凋亡,这提示HIF-1α可能在宫颈癌的发生发展中起作用,利用显性失活HIF-1α转染抑制HIF-1α可望成为宫颈癌治疗基因治疗的又一新途径.
- 赵凤艳唐彬秩欧阳运薇母得志毛萌张林庞秋霞屈艺
- 关键词：缺氧诱导因子-1SIHA细胞
- 尿液中核基质蛋白22联合端粒酶活性检测在膀胱癌诊断中的作用被引量：4
- 2009年
- 目的探讨尿液中核基质蛋白22(NMP22)联合端粒酶活性检测在膀胱癌诊断中的价值。方法收集38例膀胱癌和28例非膀胱癌患者新鲜尿液,用化学发光分析法检测尿NMP22水平,TRAP-PCR-ELISA法检测尿脱落细胞端粒酶活性,并同时行尿脱落细胞学检查。结果尿液中NMP22对膀胱癌诊断的敏感性为79%,特异性为64%;端粒酶敏感性为82%,特异性为71%;细胞学检查敏感性为32%,特异性为97%。NMP22联合端粒酶活性检测,两者均为阳性时诊断为阳性,否则为阴性,则联合检测的敏感性为76%,特异性为89%。结论联合检测可使在维持较高敏感性的前提下,大大提高诊断的特异性,其特异性与细胞学检测相差较小,而敏感性却远高于细胞学检测,因而联合检测较单一指标的检测对膀胱癌具有更高的诊断价值。
- 黄翔邹建华廖勇龚百生符本琪屈艺
- 关键词：膀胱肿瘤
- 反义寡核苷酸在杜氏肌营养不良基因治疗中的应用被引量：1
- 2007年
- 杜氏肌营养不良（DMD）是一种致死性X染色体连锁隐性遗传病，发病率高，患者多在30岁左右因心力衰竭和呼吸衰竭而死亡。近年来，在众多对DMD基因治疗方案中，反义寡核苷酸凭借其在肿瘤治疗和病毒控制中显示出的良好应用前景而受到研究人员的关注，他们利用反义寡核苷酸诱导基因中的特异外显子缺失以调控突变基因的表达，以此达到恢复具有功能的抗肌萎缩蛋白表达，并使DMD得到控制和治愈的目的。
- 韦婷屈艺母得志
- 关键词：肌营养不良寡核苷酸类反义基因疗法
- HIF-1对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在缺氧条件下对宫颈癌SiHa细胞的增殖、生长和凋亡的影响,探讨HIF-1α在宫颈癌的发展过程中所起的作用。方法将表达全长HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α和空质粒pcDNA3.1转染入SiHa细胞中,分别命名为fLHIF-1α组和pcDNA3.1组,未转染细胞组命名为未转染组。应用Western Blotting和免疫细胞化学法对细胞内的HIF-1α和VEGF表达量进行检测。应用MTT方法检测不同浓度的CoCl2处理后细胞的增殖情况;采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡情况。结果免疫细胞化学和Western Blotting结果显示重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α转染成功,转染细胞内HIF-1α及VEGF表达较未转染细胞和质粒pcDNA3.1转染细胞增高(P<0.05),显示在正常或缺氧条件下,fLHIF-1α组细胞的增殖能力均高于pcDNA3.1组和未转染组(P<0.05),凋亡率小于pcDNA3.1组和未转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α在CoCl2诱导的缺氧条件下可以抑制SiHa细胞的凋亡,减少缺氧对细胞的损伤以及促进细胞的增殖,提示HIF-1α在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。
- 韦婷赵凤艳张林傅强毛萌母得志屈艺
- 关键词：缺氧诱导因子1Α宫颈癌SIHAVEGF
- dn HIF-1对宫颈癌细胞生物学行为的影响被引量：6
- 2008年
- 目的研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用。方法将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较。结果重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05)。转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达。提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用。
- 唐彬秩赵凤艳韦婷母得志毛萌傅强张林屈艺
- 关键词：宫颈癌SIHA细胞
- Aurora A表达对人前列腺癌细胞生物学行为的影响被引量：9
- 2007年
- 目的研究Aurora A表达增高对人前列腺癌细胞LNCaP生物学行为的影响,以了解其在人前列腺癌发生发展中的作用。方法克隆Aurora A全长基因,将其转染入LNCaP细胞中表达,采用四唑盐(MTT)法细胞增殖实验检测Aurora A表达升高的阳性细胞生长情况,采用改良的Transwell侵袭小室方法检测细胞侵袭能力;同时与转染空质粒(pcDNA3.1)细胞和未转染细胞进行比较。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Full Length Aurora A。Aurora A高表达的LNCaP细胞增殖速度较空质粒转染细胞和未转染细胞快,培养3d后LNCaP-Aurora A组细胞较pcDNA3.1质粒转染细胞及未转染的LNCaP细胞增多,差异有统计学意义(P<0.05)。在体外细胞移动实验中,LNCaP-Aurora A组细胞也较另两组细胞表现出更强的穿膜能力(P<0.01)。结论Aurora A表达增高与人前列腺癌细胞的恶性表型具有密切相关性,Aurora A在人前列腺癌发生发展中可能发挥重要作用。
- 赵凤艳屈艺张林母得志黄翔魏大鹏
- 关键词：AURORA人前列腺癌增殖
- Aurora A表达与人前列腺癌细胞对紫杉醇敏感性的相关性研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性的相关性,明确Aurora A表达是否影响紫杉醇对前列腺癌的治疗效果。方法以激素非依赖性前列腺癌细胞Du145为研究对象,通过转染Aurora A全长基因得到稳定高表达Aurora A的细胞系Du145-Aurora A,细胞用不同浓度紫杉醇处理,用MTT细胞增殖实验检测细胞生长抑制率,用流式细胞仪分析细胞凋亡情况,比较Aurora A表达上调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化。同时,用核酶技术使细胞Aurora A表达下调,检测Aurora A表达下调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化。结果Aurora A表达上调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均降低(P<0.01),而Aurora A表达下调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均增高(P<0.01)。结论人前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性具有相关性,抑制Aurora A可望提高紫杉醇对前列腺癌的治疗效果。
- 武文屈艺刘小康张林母得志黄翔杨春蕾
- 关键词：AURORA前列腺癌DU145紫杉醇
- 三组四色抗体的流式细胞术监测儿童B系急性淋巴细胞白血病微小残留病被引量：1
- 2008年
- 目的建立一种敏感的三组四色抗体流式细胞术,监测儿童B系急性淋巴细胞白血病(B lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD),并探讨其应用价值。方法采用三组四色荧光抗体组合(CD_(45)/CD_(19)/CD_(10)/CD_(34),CD_(45)/CD_(19)/CD_(10)/CD_(13)和CD_(45)/CD_(19)/CD_(22)/CD_(34))检测18份初诊为B系急性淋巴细胞白血病患儿的骨髓样本(A组)和67份该病治疗后缓解患儿骨髓样本(B组)的白血病相关异常免疫表型(leukemia-associated aberrant immunophenotyping,LAIP)细胞。A,B两组样本来源于2004年6月至2007年12月在四川省人民医院儿科住院和定期随访的42例患儿,年龄为1～12岁;男性患儿为30例,女性为12例。同时,检测12份正常儿童骨髓(C组)作为对照(同期在本院就诊)。结果由于B系急性淋巴细胞白血病患儿骨髓的白血病相关异常免疫表型细胞与正常骨髓B细胞,在流式散点图中分布位置有差异,从而筛选出8个有价值的双参数散点图,以监测临床缓解B系急性淋巴细胞白血病患儿的微小残留病。本方法在B系急性淋巴细胞白血病A组和B组患儿骨髓中的微小残留病阳性检出率分别为89%(16/18)和48%(32/67);白血病相关异常免疫表型细胞在A,B两组样本中分别为(67.8±36.4)%((?)±s)和(0.056±0.083)%((?)±s),A组患儿均明显高于B组患儿(P<0.01)。分析3例复发患儿复发前的跟踪监测结果发现,复发前均检测到微小残留病呈阳性,并且其白血病呈相关异常免疫表型细胞均明显升高。结论本研究建立了一种灵敏、快速、易于标准化操作的监测B系急性淋巴细胞白血病患儿微小残留病的方法。
- 张剑波李戈母得志房俊陈杰景清屈艺
- 关键词：微小残留病白血病B细胞急性流式细胞术
- 一种经济高效的SD大鼠胰岛细胞分离技术被引量：3
- 2008年
- 目的建立一种经济高效的大鼠胰岛细胞分离纯化方法,为胰腺的修复重建奠定实验基础。方法成年雄性SD大鼠25只,体重230～380g,共进行5次实验,每5只大鼠一组进行消化和分离。采用医用复方氯化钠注射液(compound sodium chloride injection,CSCI)经胰总管灌注大鼠胰腺,0.5mg/mLⅤ型胶原酶消化后,分别采用浓度为27.0%、23.0%、20.5%和11.0%的Ficoll 400形成不连续密度梯度介质,离心纯化胰岛细胞。双硫腙(dithizon,DTZ)染色行纯化前后胰岛细胞计数和纯度检测;荧光染料碘化丙啶(propidium iodide,PI)和二乙酸荧光素(fluorescein diacetate,FDA)储存液双染色鉴定胰岛细胞活性;RPMI1640培养基培养3d后,分别用浓度为2.8mmol/L的低糖和25.0mmol/L的高糖行葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛细胞功能。结果5次实验胰岛细胞消化时间为(13.8±1.6)min。DTZ染色鉴定纯化前胰岛细胞数为(5626±422)个,纯化后为(2914±485)个,纯化后的胰岛细胞数较纯化前明显减少(P<0.01),回收率51.6%±6.0%,每个胰腺收获胰岛细胞数为(583±97)个/只。5次分离获得的胰岛细胞纯度为90.2%±3.4%,活性为81.6%±7.0%。培养3d后,葡萄糖刺激胰岛素释放实验显示:低糖环境下胰岛素水平为(39.7±7.5)EU/L,高糖环境为(116.1±17.4)EU/L,比较差异有统计学意义(P<0.01);刺激指数为3.0±0.4。结论采用CSCI作为大鼠胰岛细胞分离纯化的主要液体试剂,并采用低浓度Ⅴ型胶原酶消化,不仅可降低实验成本,同时可获得高质量的胰岛细胞。
- 张剑波杨谦陈杰母得志张林毛萌屈艺
- 关键词：大鼠胰岛细胞分离纯化细胞培养
- K562细胞中Aurora A与端粒酶表达相关性被引量：1
- 2007年
- 目的探讨人白血病细胞K562中Aurora A与端粒酶表达的相关性,阐明Aurora A在人白血病发生发展中的作用机制。方法用RT-PCR方法克隆得到Aurora A全长基因,采用Fugene6转染试剂介导将其转染入K562细胞中表达,Western Blot检测细胞Aurora A和人类端粒酶反转录酶(hTERT)表达水平,端粒酶检测试剂盒Telomerase PCR ELISA检测细胞端粒酶活性,监测Aurora A表达升高的阳性细胞hTERT和端粒酶活性变化。将针对Aurora A mRNA的DNA核酶导入Aurora A高表达的K562细胞以抑制Aurora A表达,检测Aurora A表达下调后细胞hTERT和端粒酶活性变化。结果Aurora A全长基因转染K562细胞后,各阳性克隆Aurora A表达均上调,并伴hTERT及端粒酶活性增加。DNA核酶转染Aurora A高表达的K562后,能显著下调细胞Aurora A表达,hTERT和细胞端粒酶活性也同步下降。结论在人白血病中,Aurora A表达增加可引起细胞端粒酶活性的同步增加,可能是Aurora A导致白血病发生发展的重要原因。
- 屈艺李熙鸿毛萌张林黄翔赵凤艳母得志
- 关键词：AURORA端粒末端转移酶
