国家自然科学基金(30300160)
- 作品数：7 被引量：20H指数：4
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- 血浆白蛋白中胱氨酸和精氨酸是主要的氧化剂攻击基团被引量：5
- 2006年
- 目的探讨自由基攻击对白蛋白结构的影响。方法以正常人为对照组,尿毒症患者为实验组,高级氧化蛋白产物(AOPPs)和羰基为氧化应激指标。先对各组的氧化应激水平进行评价,随后从各组分离、纯化出白蛋白,再对其氨基酸组成进行分析比较。结果尿毒症患者的AOPPs,及羰基水平约为正常人的2倍(P<0．01)。同正常人相比,尿毒症患者水解出的 17种白蛋白氨基酸组成大部分低10％左右,其中胱氨酸和精氨酸在两组间差异有统计学意义 (P<0．05)。结论氨基酸的普遍损失是影响血浆蛋白结构和功能的关键因素,其中胱氨酸和精氨酸是自由基攻击的两个主要靶基团。
- 卢燕雯朱秋毓丁峰顾勇林善锬
- 关键词：氨基酸类羰基高级氧化蛋白产物
- 高级氧化蛋白产物的主要成分分析被引量：12
- 2006年
- 目的研究高级氧化蛋白产物(AOPPs)为何种蛋白氧化产物并进行表征。方法羰基用于评定AOPPs中的氧化蛋白。天然血浆测得其蛋白浓度后,先按定义测定其AOPPs水平。血浆随即经超滤膜超滤、PBS清洗后制得血浆-AOPPs。排阻色谱法用于分析定量单个蛋白中的羰基水平。另用氯仿对血浆进行脱脂。脱脂产生的馏分同样进行羰基水平等的测定。结果无论是天然血浆、脱脂血浆或是氯仿脱脂产生的沉淀中,尿毒症患者的AOPPs和总羰基水平始终明显高于正常人。HPLC分析证明血浆白蛋白不仅具有最高的羰基水平,而且也是唯一一种在正常人和患者间差异具有统计学意义的蛋白。脱脂主要去除的是纤维原蛋白和一种未明大分子蛋白,这2种蛋白的氧化程度均较低。结论白蛋白是AOPPs的主要构成成分,而其它蛋白占 AOPPs的构成比例较小,特别是IgG。
- 丁峰朱秋毓顾勇林善锬
- 关键词：尿毒症氧化应激高级氧化蛋白产物羰基
- 高效液相色谱法测定人血浆3-氯酪氨酸浓度被引量：1
- 2009年
- 目的建立人血浆3-氯酪氨酸（3-CT）浓度的定量分析方法。方法用三氯乙酸沉淀血浆蛋白后，HPLC—ECD定量检测。结果3．氯酪氨酸血浆标准曲线的线性范围为0．0625—2．000μmol·L^-1，r〉0．9966，回收率〉71．8％。日内和日间的精密度（RSD％）分别〈8．8％和11．1％。3-氯酪氨酸的保留时间为（16．57±0．30）min，总分析时间32min。测得健康人和尿毒症患者（各6例）血浆3-CT浓度分别为（0．16±0．13）和（2．47±0．73）μmol·L^-1（P〈0．01）。结论本法所需样本量低，预处理步骤简便，适用于临床进行氧化应激、治疗、预后、诊断等研究工作之需。
- 卢燕雯李海明忻菁朱秋毓丁峰顾勇
- 关键词：高效液相色谱电化学检测
- 尿毒症患者高级蛋白氧化产物与血管钙化的关系及其机制探讨被引量：4
- 2007年
- 目的 研究CKDV期患者血中高级蛋白氧化产物（AOPP）水平及其与动脉钙化的关系，并探讨AOPP可否诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化。方法 50例CKDV期患者为尿毒症组，10例肾功能正常的胸腺瘤患者作为对照组。测定血AOPP、钙、磷、甲状旁腺激素（iPTH）水平，同时分别取桡动脉和同级别的胸廓内动脉做组织学检查。体外用次氯酸处理的人血清白蛋白（AOPP-HSA）作用于主动脉平滑肌细胞（HASMC），以单纯人血清白蛋白（HSA）培养基和常规培养基作为对照，RT—PCR法检测核结合因子α-1（CBFα-1）及骨桥蛋白（OPN）水平。结果CKDV期患者血浆AOPP水平明显高于对照组[（90．22±55．88）μmol／L比（35．79±4．31）μmol／L，P〈0．01]。50例桡动脉标本中44例有OPN沉积于中膜（88％），其中24例有明显的钙化（48％），对照组无一例有OPN沉积及钙化。Pearson相关分析显示血清AOPP水平与桡动脉内膜中层厚度（IMT）（r=0．691，P〈0．01）及管壁／管腔比值（r=0．354，P〈0．05）呈正相关。血管钙化程度与AOPP（r=0．791，P〈0．01）、血清磷（r=0．602，P〈0．01）、iPTH水平（r=0．549，P〈0．05）呈正相关。体外试验显示AOPP-HSA可诱导HASMC表达CBFα-1和OPN，而单纯HSA无此效应。结论 CKDV期患者普遍存在高AOPP血症和血管钙化，血AOPP水平与血管钙化密切相关。这可能与AOPP直接诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化有关。
- 游怀舟杨海春丁峰朱秋毓林善锬顾勇
- 关键词：尿毒症钙质沉着症
- 高级蛋白氧化产物对人脐静脉内皮细胞ECV-304的作用被引量：2
- 2007年
- 目的 观察体外制备的高级蛋白氧化产物修饰蛋白（AOPP-HSA）对人脐静脉内皮细胞（ECV-304细胞株）的作用.方法 在高压液相色谱仪（HPLC）中将人血清白蛋白（HSA）用次氯酸处理制备AOPP-HSA,观测AOPP-HSA对ECV-304细胞增殖和凋亡,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素（E-selectin）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达,以及P50、P65和I-кB的mRNA表达含量的影响.结果 （1）AOPP-HSA与ECV-304细胞共同孵育后,可使其增殖指数下降,约为对照组的70%～80%.凋亡试验结果：AOPP-HSA组细胞早期凋亡较对照组升高17%.（2）ECV-304细胞有ICAM-1和MCP-1的基础表达,与AOPP-HSA共同孵育24 h后,两者的表达均有上调,以VitE预先孵育后,其表达量均较相应浓度AOPP-HSA组有明显下降;ECV-304细胞无E-selectin的基础表达,给予AOPP-HSA后也无改变.（3）ECV-304细胞与AOPP-HSA共同孵育后,其P50、P65的mRNA的相对表达含量均显著上调,在VitE干预组,P50、P65的相对表达含量较相应AOPP-HSA组下降.I-кB mRNA的相对表达含量在AOPP-HSA 100～400 μmol/L各组均明显下降,而在AOPP-HSA 600 μmol/L组中,其I-кB的相对表达含量出现显著的升高,给予VitE干预后,I-кB的相对含量也出现明显升高.结论 AOPP-HSA对ECV-304细胞具有多种生物学效应,可抑制增殖、促进凋亡、上调黏附分子和趋化因子的表达.这些作用可能是通过影响NF-кB而产生的.氧化应激参与了这些作用的发生.
- 范虹丁峰顾勇朱秋毓林善锬
- 关键词：氧化应激
- 三种尿毒素诱导高级氧化蛋白产物的生成
- 2008年
- 目的探讨尿毒症患者体内长期积蓄的高水平尿毒素是否会通过参与高级氧化蛋白产物（AOPP）的生成而介导蛋白质的氧化损伤。方法以丙二醛（10mmol／L）、马尿酸（20mmol／L）和对甲酚（10mmol／L）为尿毒素代表。人血清白蛋白（HSA）、健康人和尿毒症患者血浆用20mmol／L的PBS（pH7．4）统一调整到质量浓度为50g／L，随后分别加入尿毒素至指定浓度。对照组内不加任何尿毒素。37℃分别温育0．5h和24h后，分别测定各组的AOPPs、蛋白巯基及二酪氨酸浓度。高效液相色谱（HPLC）法用于观察蛋白质的交联聚集情况。结果与对照组相比，尿毒素组的AOPP浓度平均增加了121．5％（P〈0．05）。尿毒素尚可降低蛋白巯基浓度，降低幅度平均达14．7％（P〈0．05）；同时蛋白二酪氨酸水平增至119．2％（P〈0．05）。HPLC结果表明尿毒素可以时间依赖性方式显著诱导高分子量AOPP（HMW—AOPPs）的生成，平均增幅为148．4％～333．3％（P〈0．05）。结论小分子类尿毒素可通过时间依赖性方式诱导HMW．AOPPs的生成而介导蛋白质的氧化损伤。除了髓过氧化物酶（MPO）-H2O2-Cl-通路的激活之外，尿毒素的介导损伤也是较为重要的体内AOPP生成机制之一。
- 卢燕雯朱秋毓丁峰顾勇林善锬
- 关键词：高级氧化蛋白产物氧化修饰尿毒素高效液相色谱蛋白氧化
- 次氯酸对人血清白蛋白的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物的关系被引量：5
- 2006年
- 目的研究次氯酸对人血清白蛋白(HSA)的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物(AOPPs)之间的关系。方法有氧条件下在恒定浓度的HSA(60 mg／ml)内加入不同浓度次氯酸(0、1、5、10、20、30、40、50、60 mmol／L,最终浓度),观察氧化剂对HSA的修饰作用。凝胶排阻色谱法检验HSA氧化修饰结果,在线光谱扫描(190 nm～400 nm)分析修饰产物的光谱特性。结果次氯酸可氧化修饰人血清白蛋白,其修饰产物主要为二聚体HSA和六聚体HSA。发现次氯酸对HSA单体和HSA二聚体的氧化修饰为一级反应:对诱导生成的AOPPs为准一级反应:而对诱导生成的HSA六聚体则为二级修饰反应。同时发现白蛋白对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA,光谱分析表明HSA聚集体的最大吸收峰发生红移,提示HSA聚集体是由于蛋白中的酪氨酸残基通过氧化交联方式而聚集形成的。结论HSA经次氯酸处理后主要发生了蛋白聚集。而对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA。
- 卢燕雯朱秋毓丁峰顾勇林善锬
- 关键词：白蛋白次氯酸氧化修饰凝胶色谱高级氧化蛋白产物
