国家自然科学基金(30300176)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
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- 相关机构：中国科学院空军总医院中国科学院研究生院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 完整的供体细胞膜及供体胞质对小鼠体细胞克隆胚发育的影响被引量：7
- 2007年
- 利用显微注射和电融合的方法都可以成功地获得体细胞克隆小鼠,由于电融合法操作耗时,融合率低,因而大多数克隆小鼠是采用注射方法。而注射法需要将供体细胞核从细胞中分离出来,此分离操作有可能导致对DNA的损伤,曾有人使用直径较粗的注射管进行完整的供体细胞注射,这种方法操作相对简单而且对供体核没有损伤。为了研究这种方法在小鼠核移植中是否适用,本实验使用完整的小鼠卵丘细胞作供体,进行显微注射,结果显示,完整的卵丘细胞注入卵母细胞后,无论在1小时或者6小时激活,大部分的重构胚在2细胞期碎裂,而去掉细胞膜的供体体细胞核注入卵母细胞后,重构胚可以卵裂并进一步发育。卵母细胞去核后不注射供体也发生碎裂,大部分的孤雌胚(不去核)在完整的卵丘细胞被注入后同样发生碎裂。在供体卵丘细胞刚破膜后即被注入卵胞质和供核被充分剥离后注入两种情况下获得的重构胚的体外发育中,前者发育各期的比率显著低于后者。这些结果说明完整的卵丘细胞膜阻碍了卵胞质对体细胞核的重编程作用,造成碎裂;注入卵胞质的供体质膜和胞质成分影响了克隆胚的体外发育。
- 王二耀于洋李雪梅焦丽红周琪王柳
- 关键词：核移植小鼠卵丘细胞
- 核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响被引量：3
- 2007年
- 用卵丘细胞为核供体进行小鼠体细胞克隆,成功获得了一批成年体细胞克隆小鼠.为探讨不同核移植方法和重构胚活化方法对小鼠克隆胚发育的影响,用B6D2F1小鼠的卵丘细胞和卵母细胞作为供、受体进行核移植实验,采用电融合和细胞质内直接显微注射的方法进行核移植,并采用电脉冲、乙醇处理、氯化锶处理和电脉冲联合氯化锶4种不同方法对重构胚进行活化,对克隆胚胎的体外及体内发育进行研究.结果显示,利用显微注射法获得重构胚胎的工作效率(90.7%)显著高于融合法获得重构胚胎的工作效率(49.7%).乙醇、电脉冲和氯化锶3种激活方法都可以诱导孤雌胚发育到囊胚,但前二者处理的胚胎的囊胚发育率(52.4%,54.2%)显著低于后者(76.9%).10 mmol/L氯化锶处理6h活化效果最好.融合法获得的重构胚经氯化锶或者电脉冲联合氯化锶激活后,囊胚发育率(9.5%,8.6%)显著高于单纯电脉冲激活(2.6%),而乙醇活化的重构胚没有发育到囊胚阶段.用显微注射法经氯化锶激活获得的重构胚的囊胚发育率最高(16.6%).注射法和融合法获得的重构胚胎经氯化锶激活后进行胚胎移植,都获得了发育到期的体细胞克隆小鼠,发育到期率分别为2.5%和1.4%.结果表明,两种核移植方法对B6D2F1小鼠重构胚胎的早期发育能力有一定影响,用这两种方法都可以获得体细胞克隆小鼠;不同活化方法对重构胚胎的体外发育能力有显著影响,在上述4种激活方式中,氯化锶处理对克隆胚的激活效果最好.
- 王二耀于洋李雪梅焦丽红王柳
- 关键词：体细胞克隆核移植显微操作
- 小鼠四倍体半克隆胚胎发育研究被引量：2
- 2005年
- 半克隆(Semi-Cloned)胚胎是通过注射体细胞核到未去核的卵母细胞中产生的。在半克隆胚胎中,体细胞被用来作为精子的替代物。然而,由于异常的染色体分离,构建的半克隆胚胎在激活后形成了非整倍体而导致胚胎发育受到严重影响,不能发育到期。本研究通过抑制小鼠半克隆胚胎在激活过程中染色体数目减半,避免非整倍体胚胎形成,研究四倍体半克隆(TetraploidSemi-cloned,TSC)胚胎的发育和体细胞核的掺入对胚胎发育的影响。结果显示,TSC胚胎的体外发育率显著高于二倍体半克隆胚胎,与正常受精卵及孤雌激活对照无显著性差异,但TSC胚胎的细胞数在桑椹胚和囊胚期比正常二倍体受精胚胎和孤雌激活胚胎少。通过Oct-4染色发现,TSC胚胎囊胚期内细胞团(InnerCellMass,ICM)细胞很少或者没有。移植63个四倍体半克隆胚胎到3只假孕母鼠体内,得到20个胎盘,但没有得到胎儿。组蛋白乙酰化和DNA甲基化检测显示,部分TSC胚胎在囊胚期没有形成正常受精胚胎在ICM和滋养外胚层(Trophectoderm,TE)之间的差异分布。TSC胚胎的基因表达不依赖于细胞分裂次数而依赖于发育时间。虽然TSC胚胎避免了二倍体半克隆胚胎形成非整倍体现象,但由于TSC胚胎没有ICM细胞或ICM细胞很少,所以只能形成胎盘而不能形成胎儿。本实验第一次较为全面地研究了TSC胚胎的发育,同时也为研究体细胞核再程序化、基因打靶技术提供了一种新的途径。
- 丁晨晖焦丽红陈欣洁王二耀于洋赵春丽侯晓军李雪梅季维智王柳
- 关键词：四倍体胚胎发育非整倍体
- 基因组印记对个体发育及动物克隆的影响被引量：5
- 2005年
- 介绍了印记基因对个体发育及动物克隆的深远影响。通过分析有关印记基因起源的几种不同假说,展现印记基因的作用方式与功能;探讨印记基因特殊的形成机制,有助于深入理解这一表观遗传修饰调节对动物个体发育和动物克隆的影响。印记基因对哺乳动物胎儿的发育具有十分重要的作用,对个体的生长与行为也有一定影响,特别是对胎盘发育极为重要。一旦表达失控就会导致多种疾病发生,大量证据表明许多肿瘤的发生都与其相应基因组印记丢失有关。在当前动物克隆研究中,克隆动物成活率低,具有大量表型异常及不同程度缺陷,而这些异常与许多印记基因表达失调导致的症状非常相似。因此,克隆动物的印记基因表达异常可能正是制约克隆效率提高的关键因素。
- 侯晓军焦丽红陈新王柳
- 关键词：基因组印记表观遗传修饰动物克隆
