国家科技支撑计划(2006BAK02A13)
- 作品数：22 被引量：122H指数：8
- 相关作者：曹际娟郑秋月徐君怡闫平平徐杨更多>>
- 相关机构：辽宁出入境检验检疫局沈阳农业大学辽宁师范大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家教育部博士点基金国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程理学生物学更多>>
- 变性高效液相色谱检测霍乱弧菌被引量：9
- 2008年
- 变性高效液相色谱(DHPLC)是近几年刚发展起来的一种快速检测PCR扩增产物的新技术.应用该技术快速检测O1、O139、非O1、非O139群霍乱弧菌的外膜蛋白基因(ompW).根据霍乱弧菌外膜蛋白基因的特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC进行快速检测.以54株参考菌株做特异性检测.在丹东口岸国境外环境水体采集水样310份,以PCR-DHPLC和常规分离培养进行了比较,对丹东口岸国境外环境水体霍乱弧菌感染状况进行了检测,并对分离株进行了ompW基因测序.试验结果表明该方法有很好的特异性,310份水样中经PCR-DHPLC检测出58株霍乱弧菌的分菌株,阳性率为19%,与常规分离培养比较,符合率为100%.分离株的ompW序列与Genbank中的存在1%～3%的差异.这种检验方法特异性强,简便快捷,为霍乱防治提供了一种有效的检测新手段.
- 曹际娟闫平平于珂于兵麻丽丹高世光黄晓蓉谢明杰
- 关键词：DHPLC外膜蛋白基因
- 食源性致病菌基因组DNA的高效提取方法被引量：8
- 2009年
- 研究高效提取食源性致病菌DNA的方法,以适用于变性高效液相色谱基因分型法的高通量快速检测。试验采用沸水浴法、酚/氯仿—CTAB法、chelex100法和酶解吸附膜法分别提取沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、创伤弧菌中主要的食源性致病菌基因组DNA。并对基因组DNA的纯度和产量进行测定,通过定性、定量分析,确定了适用于食源性致病菌快速检测的DNA提取方法——酶解吸附膜法。
- 徐义刚李苏龙谢晓峰李淑云栾风侠
- 关键词：食源性致病菌基因组DNA
- 水产品中溶藻弧菌PCR-变性高效液相色谱检测方法的建立被引量：7
- 2009年
- 采用DHPLC技术检测溶藻弧菌特异性PCR扩增产物,优化分析条件,探讨其灵敏度特异性,并与传统检测方法进行了比较。试验结果表明,该方法有很好的特异性,灵敏度较高。得到溶藻弧菌PCR-DHPLC特征峰型图,样本检测的峰型图可用于定性或定量监测样本中溶藻弧菌的动态变化。建立的水产品中溶藻弧菌PCR-DHPLC方法具有广泛而良好的适用性。
- 郑秋月曹际娟王秋艳徐君怡徐杨傅俊范
- 关键词：溶藻弧菌聚合酶链式反应变性高效液相色谱
- PCR-DHPLC技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌被引量：6
- 2009年
- 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法.根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以41株参考菌株做特异性试验.试验结果表明该方法具有很好的特异性,经PCR-DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌.该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌,是食品微生物快速检测的新技术.
- 曹际娟王耀王顺芝李天顺李建民赤列加措
- 关键词：食品
- 变性高效液相色谱检测食品中致泻性大肠杆菌被引量：17
- 2008年
- 【目的】应用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中致泻性大肠杆菌的快速检测方法。【方法】分别根据4种致泻性大肠杆菌的特异性毒力因子基因序列设计引物,PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以肠产毒性大肠杆菌等32株试验菌株做特异性检测;4种致泻性大肠杆菌标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。【结果】试验结果表明该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到:肠产毒性大肠杆菌27CFU/mL、肠致病性大肠杆菌33CFU/mL、肠出血性大肠杆菌25CFU/mL、肠侵袭性大肠杆菌42CFU/mL。【结论】该方法可以快速、准确地检测食品中的致泻性大肠杆菌,是食品中病原菌检测的新技术和新方法。
- 徐君怡曹际娟郑秋月赵昕闫平平
- 关键词：致泻性大肠杆菌多聚酶链式反应PCR变性高效液相色谱DHPLC
- 三磷酸腺苷生物发光法快速测定食品中细菌的含量被引量：7
- 2009年
- 建立了测定食品中细菌三磷酸腺苷（—帅）的生物发光分析方法。生物发光原理基于萤光素酶、虫萤光素、氧气、ATP和Mg^2＋的催化氧化反应。产生的光信号强度与ATP含量成一定关系。考察了各种物理化学参数对反应的影响。反应体系最优化条件：pH7．4、牛血清白蛋白（BSA）浓度为1．0g／L和室温反应。方法检出限为1．0×10^12mol／L。线性范围1．0×10^-7-1．0×10^-11mol／L，分析时间30min，批内变异和批间变异分别小于4％和5％。研究了部分食品中细菌检测的样品前处理方法，应用于糕点和饮料样品中细菌的测定，加标回收率范围为82．1％～115％。检测结果与传统培养方法检测结果相关性良好。
- 林玲陈惠郭广生
- 关键词：三磷酸腺苷生物发光细菌萤光素酶
- PCR-变性高效液相色谱技术检测食品中产气荚膜梭菌
- 2009年
- 目的:进行PCR结合DHPLC技术,快速检测食品中污染的产气荚膜梭菌的新方法研究。方法:采用DHPLC技术检测产气荚膜梭菌特异性PCR扩增产物,优化分析条件,并探讨其灵敏度、特异性和精密度。结果:建立产气荚膜梭菌PCR-DHPLC样品吸收特征峰型图,样本检测的峰型图可用于定性或定量监测食品中产气荚膜梭菌的动态变化。结论:研究结果表明,所建立的食品中产气荚膜梭菌PCR-DHPLC方法具有特异性强、灵敏度高、快速等优点。
- 郑秋月傅俊范徐君怡孙哲平马惠蕊曹际娟
- 关键词：聚合酶链式反应变性高效液相色谱法产气荚膜梭菌
- 变性高效液相色谱检测食品中蜡样芽孢杆菌被引量：5
- 2009年
- 目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术对食品中污染的蜡样芽孢杆菌进行快速准确的检测。方法:利用所报道的蜡样芽孢杆菌gyrB基因引物,PCR扩增,DHPLC检测PCR扩增产物。同时进行方法特异性、灵敏度、精密度试验。结果:DHPLC检测蜡样芽孢杆菌出现特异性样品吸收峰,未检测到蜡样芽孢杆菌的近源种及其他细菌的阳性吸收峰,检测灵敏度可达到10 cfu/ml。结论:本研究所建立的PCR结合变性高效液相色谱检测蜡样芽孢杆菌的方法,特异性好,灵敏度高,快速简便。
- 郑秋月傅俊范孙哲平裴轶君齐震玉曹际娟
- 关键词：蜡样芽孢杆菌PCR变性高效液相色谱
- 食品绵羊李斯特菌PCR-DHPLC快速检测被引量：1
- 2009年
- 王耀曹际娟王顺芝李建民赤列加措曹远银
- 关键词：李斯特菌食品
- 变性高效液相色谱高通量检测动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌被引量：18
- 2008年
- 曹际娟徐君怡孙哲平郑慧芳裴轶君赵昕郑秋月摘要应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,通过通用增菌培养,建立动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌的快速高通量检测方法。根据沙门氏菌和志贺氏菌特异基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以49株参考菌株做特异性试验,并开展了精密度检测试验。试验结果表明,该方法具有很好的特异性和精密度,经通用增菌和复合PCR-DHPLC技术可同时检测饲料中的沙门氏菌和志贺氏菌。该方法可以快速、准确、高通量检测,是动物源性饲料中致病菌高通量检测的新技术。
- 曹际娟徐君怡孙哲平郑慧芳裴轶君赵昕郑秋月
- 关键词：DHPLC动物源性饲料沙门氏菌志贺氏菌
