国家自然科学基金(30571336)
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 相关作者：李相运邸科前杨荣荣温晓辉高淑敏更多>>
- 相关机构：河北农业大学北京大学北京维通达生物技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 利用四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠的技术方法被引量：7
- 2006年
- 目的介绍四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠技术的操作环节,加快该技术的推广应用。方法综合分析近几年来国内外在小鼠四倍体胚胎与ES细胞嵌合的研究成果,并结合我们自己的实验结果,分析影响ES小鼠制备的各种因素。结果四倍体胚胎不能正常发育至妊娠期末,通过四倍体胚胎与胚胎干(ES)细胞的嵌合可以得到完全由ES细胞发育而来的小鼠,即ES小鼠。同核移植小鼠相比,ES小鼠具有正常的形态、生理和神经特征。ES细胞和四倍体胚胎的遗传背景、ES细胞的生长状态、嵌合方法、培养基种类、体外培养环境、移植方法、继母母性等是影响ES小鼠生活力的重要因素。结论利用四倍体胚胎补偿法可以简便而快速地从遗传修饰的ES细胞获得突变体小鼠,为研究基因功能和构建人类疾病动物模型提供了一条有效途径。
- 李相运周荣艳
- 关键词：胚胎干细胞四倍体胚胎电融合小鼠
- 遗传背景对小鼠四倍体胚胎发育的影响被引量：2
- 2008年
- 不同遗传背景的小鼠2-细胞期胚胎经过电融合后,胚胎的融合效率和四倍体胚胎的发育能力存在着一定的差异。本试验采用C57(C57×C57)、ICR(ICR×ICR)、BALB/c(BALB/c×BALB/c)、B6D2F2(B6D2F1×B6D2F1)、B6C3D2F2(B6C3F1×B6D2F1)品系的二倍体2-细胞期胚胎在相同的条件下经过电融合处理,结果表明:小鼠四倍体胚胎的获得效率受小鼠遗传背景的影响,远交系小鼠胚胎B6D2F2和B6C3D2F2的融合率显著高于近交系C57,ICR和BALB/c(P<0.05);四倍体胚胎在体外的发育情况也受其遗传背景的影响,在桑椹胚发育率和囊胚发育率上B6D2F2和B6C3D2F2品系的四倍体胚胎都显著高于C57和BALB/c品系的四倍体胚胎(P<0.05);杂合和纯系遗传背景的小鼠四倍体胚胎囊胚细胞数目相比具有显著差异(P<0.05或P<0.01);不同遗传背景的小鼠四倍体胚胎着床率间不存在显著差异(P>0.05);杂合背景的小鼠四倍体胚胎得到5只发育至13.5dpc(dayspostcoitum,dpc)的胎儿,纯合背景的小鼠四倍体胚胎得到0只发育至11dpc的胎儿。
- 温晓辉高淑敏邸科前杨荣荣张鹏赵虎李相运
- 关键词：电融合
- 小鼠附植前胚在子宫内的迁移能力被引量：1
- 2006年
- 目的观察小鼠附植前胚在子宫内的迁移能力。方法将CD-1小鼠受精卵、2-细胞胚、桑椹胚、囊胚、四倍体胚、孤雌活化胚等6种胚共1 042枚单侧(右侧)移植CD-1假孕母鼠的输卵管或者子宫,观察移植胚在两侧子宫角内的附植情况。结果共得到45只妊娠鼠,在这45只鼠的右侧子宫角都有不同数目的着床胚,而仅在6只鼠的左侧子宫角发现了6枚着床胚。结论小鼠胚在子宫内的迁移能力非常有限,单侧移植的多个胚很少的机率迁移到另一侧子宫角内着床,不能进行胚均匀分布。
- 李相运邸科前魏巍雍军
- 关键词：胚胎迁移子宫小鼠
- ES小鼠和ES细胞中H19基因甲基化状态
- 2008年
- 为探讨印迹基因H19的甲基化状态与ES小鼠胚胎发育之间的关系,以遗传背景相同的正常成年对照小鼠、22只成年ES小鼠和8只新生死亡的ES小鼠以及不同传代次数的ES细胞为实验材料,利用甲基化敏感性限制性内切酶-PCR技术分别检测了其印迹基因H19的5′非翻译区两个位点的甲基化状态。结果表明,发育至成年的ES小鼠印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与正常成年对照小鼠之间没有差异,而新生死亡的ES小鼠印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与成年ES小鼠以及正常成年对照小鼠相比则存在明显差异。推测ES细胞中印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与成年ES小鼠以及正常成年对照小鼠之间可能存在差异。
- 杨荣荣周荣艳高淑敏温晓辉李相运
- 关键词：ES细胞DNA甲基化印迹基因H19
- DNA甲基化与克隆动物的发育异常被引量：10
- 2007年
- 通过核移植技术得到的大多数克隆动物在出生前就已经死亡,只有极少数可以发育至妊娠期末或者存活至成年,即使是存活下来的克隆动物也伴有不同程度的发育缺陷和表型异常。DNA甲基化是支配基因正常表达的一种重要的表观遗传修饰方式,是调节基因组功能的重要手段,在胚胎的正常发育过程中具有显著作用。通过对DNA甲基化模式的研究,人们发现克隆动物中存在着异常的DNA甲基化状态,而这些异常的DNA甲基化模式可能就是导致克隆胚早期死亡以及克隆动物发育畸形的主要原因。文章主要论述了DNA甲基化的作用,克隆动物中异常的DNA甲基化模式,以及造成克隆胚胎甲基化异常的原因等问题。
- 杨荣荣李相运
- 关键词：克隆动物发育异常DNA甲基化
- 离子浓度对小鼠2-细胞胚胎电融合的影响被引量：3
- 2006年
- 四倍体胚胎的制备已经成为生物学家研究小鼠以及其它哺乳动物发育生物学的有力工具。目前,制备小鼠四倍体胚胎最常用的方法是电融合法,其中电融合液中的离子种类和离子浓度是影响胚胎电融合成败的关键因素。本文比较了Ca2+、Mg2+、Sr2+、Na+、K+、Li+等阳离子对小鼠2-细胞胚胎电融合的影响。结果发现,在100 V/mm电场强度、50μsec脉冲时程和2次脉冲的电融合条件下,少量二价阳离子的存在是胚胎融合所必须的,当Ca2+为0.1 mM时,可使全部胚胎发生电融合,而一价阳离子的存在不利于胚胎的电融合。随着各种离子浓度的大幅升高,胚胎的融合率急剧下降、胚胎死亡数量增加以及死亡程度加剧。
- 邸科前李相运
- 关键词：小鼠阳离子电融合
- 小鼠附植前胚胎培养基的优化被引量：1
- 2006年
- 从4种常用培养基M16、MTF、CZB、KSOM中筛选适合CD-1小鼠附植前胚胎发育的体外培养基,并分析磷酸二氢钾、乳酸钠、葡萄糖、牛磺酸以及必需与非必需氨基酸对CD-1小鼠胚胎体外培养的影响。发现KSOM的培养效果明显优于其他培养基。在KSOM中添加必需氨基酸对8-细胞以前的胚胎发育有抑制作用,但添加牛磺酸、必需氨基酸与非必需氨基酸都可提高囊胚的细胞数。优化后的分阶段KSOM培养基显著提高了早期胚胎的囊胚发育率和囊胚期细胞数目。
- 高淑敏温晓辉邸科前魏巍李相运
- 关键词：体外培养
