国家自然科学基金(30571340)
- 作品数：10 被引量：32H指数：5
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- 相关机构：吉林大学吉林省生物研究所更多>>
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- 梅花鹿colX基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2008年
- 提取健康梅花鹿鹿茸肥大软骨细胞总RNA,以RT-PCR获得colX基因2 038 bp的完整编码序列,将其克隆入载体pMD18-T中,经限制性内切酶和质粒PCR分析,并测序证实的阳性重组子与表达载体pET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)。以IPTG诱导,经SDS-PAGE及Western-blot分析表明,获得相对分子质量为65 000的colX蛋白表达带,与预期相符,表明成功获得梅花鹿colX基因蛋白。
- 冯海华邓旭明赵丽红宋斯伟岳占碰张国才
- 关键词：基因克隆原核表达梅花鹿
- 梅花鹿生茸干细胞的分离培养
- 鹿茸骨膜由外层的纤维层和内层的细胞层组成,结构类似于胚胎早期的结缔组织。本实验取10-12月龄梅花鹿,茸角处于角柄阶段,形成了高约2cm的额侧嵴。眠乃宁全身麻醉后,用环切方式摘除顶部带有生茸骨膜的组织,置入盛有D-han...
- 赵丽红冯海华范君文吴建英张学明岳占碰邓旭明
- 关键词：梅花鹿
- 文献传递
- 梅花鹿X型胶原基因的克隆及序列分析
- X型胶原(colX)是肥大软骨细胞的标志物,根据GenBank中收录的人、鼠、牛、猪X型胶原基因的序列,进行同源性分析,在同源性高的相对保守区域设计了1对特异性引物。培养鹿茸软骨细胞,提取细胞的总RNA,以总RNA为模板...
- 冯海华范君文赵丽红成军邓旭明岳占碰
- 关键词：梅花鹿X型胶原克隆
- 文献传递
- 不同培养代数鹿茸生长中心细胞对IGF1刺激的反应
- 2008年
- 【研究目的】探讨胰岛素样生长因子(IGF1)对生长60d的梅花鹿鹿茸体外培养不同代数鹿茸生长中心细胞的影响。【方法】分离、培养生长60d的梅花鹿鹿茸生长中心细胞,将培养第2代、5代、8代细胞经含有不同浓度的IGF1(0,1,3和10nM)作用,在培养24h后用3H-胸腺嘧啶核苷掺入测定法检测每分钟衰变数(DPM)值。【结果】全部IGF1处理组都显著高于对照组(p<0.01)。不同浓度IGFⅠ处理组的平均值和最高值都是离体培养2代的细胞的DPM最高(分别为31918和39818DPM/mg蛋白),培养5代的细胞(分别为5455和6815DPM/mg蛋白)已大大地下降;到了第8代的(分别为4030和4838DPM/mg蛋白)又有进一步的下降。【结论】IGF1能够促进鹿茸生长中心细胞分裂增殖,生长60d鹿茸的生长中心细胞在离体培养,不同培养时期的鹿茸生长中心细胞对IGFⅠ刺激的敏感度不同。
- 梅妹邓旭明岳占碰赵丽红李春义冯海华
- 关键词：IGF1鹿茸梅花鹿
- IGF1对生长30d鹿茸的体外培养鹿茸生长中心干细胞的影响被引量：5
- 2008年
- 【研究目的】利用细胞培养技术,探讨胰岛素样生长因子(IGF1)对生长30d的鹿茸体外培养不同代数梅花鹿鹿茸生长中心干细胞(鹿茸干细胞)的影响;【方法】原代分离、培养生长30d的鹿茸的梅花鹿鹿茸干细胞,将第2代、5代、8代鹿茸干细胞经含有不同浓度的IGF1(0,1,3,和10nM)作用后,在培养24h后用3H-胸腺嘧啶核苷测定法检测每分钟衰变数(DPM)值;【结果】取材于生长30d鹿茸的干细胞,全部IGF1处理组(1,3,10nM)都显著高于对照组(0nM)(p<0.01)。3个不同浓度IGFⅠ处理组的平均值和最高值都是离体培养2代的细胞最低(分别为2987和3743DPM/mg蛋白),而培养5代的细胞最高(分别为10320和12180DPM/mg蛋白),第8代的细胞又开始下降(分别为8754和11568DPM/mg蛋白);【结论】IGF1能够促进鹿茸干细胞分裂增殖,生长30d鹿茸的干细胞在离体培养,不同培养时期的鹿茸干细胞对IGFⅠ刺激的敏感度不同。
- 冯海华赵丽红闭兴明李光凤岳占碰李春义邓旭明
- 关键词：IGF1鹿茸干细胞梅花鹿
- 体外定向诱导鹿茸间充质干细胞向软骨细胞的分化被引量：1
- 2008年
- 目的:间充质干细胞的诱导分化的研究多见于骨髓、脐血等组织,而在鹿茸组织中分离的间充质干细胞是否能诱导为软骨细胞目前尚不清楚。实验拟建立梅花鹿鹿茸生长中心间充质干细胞体外培养方法,观察转化生长因子β1体外诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞的可行性。方法:实验于2006-03/2007-06在吉林大学畜牧兽医学院基础兽医研究室完成。①实验材料:4岁龄健康雄性梅花鹿由中国农科院左家特产研究所提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:于生长早期锯取梅花鹿鹿茸,在解剖显微镜下定位和切取间质层(突起部),即为鹿茸间充质干细胞所在的组织层。Ⅰ型胶原酶消化法原代分离培养鹿茸生长中心间充质干细胞,锥虫蓝染色显示细胞活性达90%以上,将活性确定后的细胞液氮冻存。取第3代细胞,用含10%胎牛血清以及10μg/L转化生长因子β1的条件培养基诱导培养。③实验评估:培养12d后于倒置显微镜下观察细胞形态,采用细胞化学及免疫细胞化学鉴定细胞。结果:①鹿茸生长中心间充质干细胞的分离与培养:Ⅰ型胶原酶消化法培养可以获得均一的间充质干细胞,贴壁的间充质干细胞形态均匀,呈长梭形,克隆样生长,增殖迅速。②转化生长因子β1体外定向诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞:转化生长因子β1诱导分化的鹿茸间充质细胞生长迅速,诱导后细胞形态明显改变,呈典型的软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原表达阳性。结论:采用酶消化法可以从鹿茸生长中心间充质层中分离出间充质干细胞,在体外转化生长因子β1具有促进鹿茸生长中心间充质干细胞分化为软骨细胞的能力。
- 冯海华赵丽红宋斯伟李光凤岳占碰张学明邓旭明
- 关键词：转化生长因子Β1间充质干细胞软骨细胞梅花鹿
- 胰岛素样生长因子1对不同生长时期鹿茸生长中心细胞体外增殖的影响被引量：8
- 2007年
- 目的:在整个生长期中鹿茸生长速度的变化,究竟是由鹿茸生长中心细胞本身对生长因子刺激的敏感度引起,还是由激素等外部因素所导致目前尚不清楚。实验利用细胞培养技术观察胰岛素样生长因子1对不同生长期的鹿茸生长中心细胞体外增殖的影响。方法:实验于2005-03/2006-06在吉林大学畜牧兽医学院基础兽医研究室完成。①实验方法:3头4岁龄的健康梅花鹿,分别在鹿茸生长的早期(生长30d)、中期(生长60d)、晚期(生长90d)三期各锯取1头鹿的鹿茸,在解剖显微镜下定位和切取间质层(突起部),即为鹿茸生长中心细胞所在的组织层。原代分离培养不同生长期的鹿茸生长中心细胞,锥虫蓝染色显示细胞活性达90%以上,活性确定后的细胞液氮冻存。取第2代细胞,经1,3,10nmol/L胰岛素样生长因子1处理24h。设立空白对照组,用不含犊牛血清的等量培养液来替换孔中正常培养液。②实验评估:3H-胸腺嘧啶核苷法检测蛋白合成放射性含量,单位为Bq。结果:①不同生长时期鹿茸生长中心细胞的分离与培养:贴壁的鹿茸生长中心细胞形态均匀,呈梭形,克隆样生长,增殖迅速。不同生长期的鹿茸生长中心细胞生长速度不同,60d的鹿茸生长中心细胞生长最快,90d次之,30d最慢。②胰岛素样生长因子1对不同生长期鹿茸生长中心细胞蛋白合成放射性含量的影响:取材于生长30d的鹿茸生长中心细胞,胰岛素样生长因子1各浓度组的蛋白合成放射性含量均值为49.8Bq,是空白对照组(5.2±0.6)Bq的9.64倍,差异有显著性意义(P<0.01)。取材于生长60d的鹿茸生长中心细胞,胰岛素样生长因子1各浓度组的蛋白合成放射性含量均值为532.0Bq,是空白对照组(13.7±5.4)Bq的38.93倍,差异有显著性意义(P<0.01)。取材于生长90d的鹿茸生长中心细胞,胰岛素样生长因子1各浓度组的蛋白合成放射性含量均值为535.8Bq,是空白对照组(109.8±27
- 冯海华闭兴明赵丽红宋宇岳占碰张学明李春义邓旭明
- 关键词：胰岛素样生长因子1鹿茸
- 梅花鹿鹿茸软骨细胞的培养及X型胶原的克隆和序列分析被引量：4
- 2006年
- 型胶原是肥大软骨细胞的标志物,据GenBank中收录的人、鼠、牛、猪型胶原基因的序列,进行同源性分析,在同源性高的相对保守区域设计了1对特异性引物。建立梅花鹿鹿茸软骨细胞的分离培养方法,培养鹿茸软骨细胞。提取细胞的总RNA,以总RNA为模板,用RT-PCR方法克隆了梅花鹿的型胶原基因序列为877的片段,此片段全部位于编码区,与已报道的牛的型胶原基因的序列比较,同源性达到96%。共有35个碱基发生变异。DNAStar软件分析表明,二者推导的氨基酸序列同源性为95.5%。
- 冯海华邓旭明岳占碰宋宇李乾学韩学敏范君文姜峰
- 关键词：梅花鹿软骨细胞克隆
- 梅花鹿鹿茸间充质层细胞的体外培养和冷冻保存被引量：5
- 2008年
- 为了研究梅花鹿鹿茸间充质层细胞的生物学特性,取梅花鹿鹿茸生长顶端间充质层组织,分离间充质层细胞进行体外培养及冷冻保存。结果表明:在含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中,鹿茸间充质层细胞能进行短期体外培养,培养的细胞呈成纤维细胞样,培养7 d可长至汇合。以含5%二甲基亚砜(DMSO)和10%FBS的DMEM为冻存液,经梯度降温后冻存,间充质层细胞复苏后存活率较高。在4℃条件下,间充质层组织在含10%FBS的DMEM中可保存7 d。
- 李光凤冯海华赵丽红张默涵成文革岳占碰
- 关键词：梅花鹿鹿茸体外培养冷冻保存
- 鹿茸角软骨细胞体外培养方法的建立及生长特性分析被引量：5
- 2007年
- 【研究目的】建立梅花鹿鹿茸软骨细胞体外分离培养和扩增方法,观察鹿茸软骨细胞在体外培养的生物学特性,为鹿茸再生机理的研究奠定基础;【方法】体外分离培养鹿茸软骨细胞,采用组织学、MTT比色法、免疫组化等多种手段动态检测细胞生长增殖情况;【结果】核心部分,约150字鹿茸软骨细胞贴壁生长,原代细胞比传代生长速度快,原代及传代4代内的鹿茸软骨细胞均有活跃的增殖能力,软骨细胞呈三角形,多边形等多种形态,II型胶原免疫组化,甲苯胺蓝染色为阳性;【结论】体外分离培养鹿茸软骨细胞具有较强的增殖能力,传代培养4代内细胞生长旺盛并维持其生物学特性,可满足后续实验研究要求。
- 冯海华赵丽红岳占碰宋宇李乾学范君文邓旭明
- 关键词：软骨细胞细胞培养鹿茸
