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洋葱伯克霍尔德氏菌株Lyc2的鉴定及对棉苗的防病促生作用被引量：14: 2007年; 从烟草根际土壤中分离到一株细菌菌株Lyc2,平皿对峙培养显示该菌可显著抑制多种植物病原真菌菌丝体的生长。温室盆栽试验表明,Lyc2对棉花苗期立枯病的防治效果达到48.8%;水培棉花苗试验表明,Lyc2能显著增加棉苗的鲜重和干重,但对株高的影响不显著。该菌经形态、生理生化试验测定及16S rDNA和ITS序列分析,初步确定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia);进一步通过种特异的recA基因序列分析,证明Lyc2菌株属于B. cepacia复合物中基因型IX,B.pyrrocinia。; 于晓庆郗丽君刘永光李光伟兰玉菲竺晓平李向东; 关键词：植物根际促生菌 RDNA 16S-23S RECA基因

鸭圆环病毒FJ0601株Rep蛋白的原核表达及其抗血清制备被引量：9: 2010年; 通过PCR方法扩增鸭圆环病毒(Duck circorirus,DuCV)FJ0601株Rep基因的完整ORF,按正确的阅读框架将其克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒转化BL21宿主菌后,经IPTG诱导表达。诱导菌体裂解物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,将表达产物从凝胶中回收,免疫4周龄小鼠,3次免疫后,采血分离血清。所得抗GST-Rep多克隆抗血清分别与经PCR检验为阳性的病鸭脾脏、胸腺、法氏囊组织的冰冻切片进行间接免疫荧光试验(IFA),结果在感染DuCV的发病鸭3种免疫器官中均可检测到由阳性细胞组成的局部病灶,表明大肠杆菌表达的Rep融合蛋白至少保留了部分天然Rep蛋白的抗原性。; 刘少宁杨金保张兴晓陈智高继明孔义波朱岩丽姜世金; 关键词：鸭圆环病毒 REP 原核表达 IFA

鸭疫里默氏杆菌中国分离株的外膜蛋白A基因的克隆与序列分析被引量：5: 2008年; 为了对鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）中国分离株的外膜蛋白A（OmpA）基因的序列进行分析,根据GenBank中已发表的鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）的外膜蛋白A（Om-pA）基因序列,在其高度保守区设计一对特异性引物,应用PCR技术,分别扩增从中国广东、福建和山东等地分离的8株鸭疫里默氏杆菌中国分离株的OmpA基因,克隆测序后与GenBank中已发表的26株鸭疫里默氏杆菌进行序列比较,结果表明：所有菌株的OmpA基因均为由1164个碱基组成的ORF,编码387个氨基酸组成的蛋白质,起始密码子均为ATG,终止密码子均为TAA,其核苷酸序列非常保守,同源性高达88.2%-100%,氨基酸同源性达到88.9%-100%。试验表明,OmpA基因具有种内相对保守性,其核苷酸与氨基酸同源性与鸭疫里默氏杆菌的血清型、分离时间和地点之间无必然联系。; 魏秀丽孙亚妮姜世金孔义波张兴晓; 关键词：鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清制备被引量：4: 2007年; 高瑞刘金亮兰玉菲王洁李向东; 关键词：黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因抗血清制备原核表达 MOSAIC 复合侵染

我国自然发病鸭群中鸭圆环病毒的流行病学调查被引量：19: 2009年; 为了解鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的感染状态,从我国养鸭业比较集中的山东、江苏、四川、福建、广东5个省份36个鸭群采集临床有发病表现的343只病、死鸭的病理组织样品,以提取的组织DNA为模板通过特异性斑点杂交和PCR方法检测DuCV的感染情况。结果显示上述5个省份的鸭均检出了DuCV,病、死鸭中DuCV的个体阳性率为81.63%(280/343),群体阳性率为94.44%(34/36)。结果表明我国鸭群中已普遍存在DuCV的感染。; 刘少宁张兴晓陈智高继明魏秀丽孔义波朱岩丽姜世金; 关键词：鸭圆环病毒流行病学调查

马铃薯Y病毒属病毒基因功能研究进展被引量：23: 2006年; 马铃薯Y病毒属是植物病毒中最大的属。近年来马铃薯Y病毒属功能基因组学取得了很大进展。本文综述了在病毒系统侵染、蚜虫和种子传毒、症状形成等方面的研究结果。; 李向东于晓庆古勤生刘金亮竺晓平郭兴启; 关键词：马铃薯Y病毒属蚜虫传毒

烟草脉带花叶病毒cp基因的原核表达及抗血清制备被引量：9: 2007年; 利用马铃薯Y病毒属病毒的简并引物,通过RT-PCR技术获得了云南烟草病毒分离物YND的3′端约1.7 kb片段,序列分析证明该分离物为烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV)。将TVBMVcp基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出分子量为35.0 kD的融合蛋白。利用该融合蛋白制备了TVBMV的多克隆抗体,ELISA测定抗血清效价为1/4 096。Western blotting和DIBA分析结果表明,获得的抗血清和原核表达的病毒蛋白及植物病汁液中的病毒均有特异性反应,可用于TVBMV的快速检测。; 兰玉菲刘金亮高瑞王红艳朱天生竺晓平李向东; 关键词：烟草脉带花叶病毒外壳蛋白原核表达抗血清

本生烟组织培养及遗传转化体系的建立被引量：3: 2006年; 本文研究了通过农杆菌侵染获得本生烟（Nicotiana benthamiana）转基因植株的方法。将本生烟中上部叶片消毒后切成5mm×5mm左右的小块作为外植体，在含有6-BA（3mg／L）和NAA（0．2mg／L）的MS培养基中培养2—3d，用含有表达载体的农杆菌侵染后共培养3～4d，转入含有6-BA（3mg／L）、NAA（0．2mg／L）和卡那霉素（100rag／L）的MS培养基中培养2～3周。将外植体边缘产生的愈伤组织和芽点转移到只含有卡那霉素（100mg／L）的MS培养基中继续培养，2周后分化出大量不定芽。继续培养2周，当芽长1-3cm时，将芽转移到含IBA（0．1mg／L）的MS培养基中分化生根，得到苒生植株。当再生植株高8～10cm、根长4～5cm以上时，移栽到经过灭菌的营养土中。通过实时荧光PCR扩增，从获得的植株中检测35S启动子和NOS终止子外源基因片段，判定所得的植株的确为转基因植株。最后对本生烟组织培养中应该注意的问题进行了讨论。; 崔海涛李春霞王红艳陈红运竺晓平时呈奎李向东; 关键词：MS培养基实时荧光PCR

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山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2004BS06002)