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国家高技术研究发展计划(2011AA10A208-4)
作品数:
1
被引量:7
H指数:1
相关作者:
王向鹏
肖书奇
周恩民
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相关机构:
西北农林科技大学
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发文基金:
国家自然科学基金
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
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作者
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周恩民
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肖书奇
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王向鹏
传媒
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畜牧兽医学报
年份
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2013
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慢病毒载体介导稳定表达CD163的PAM细胞系的建立及对PRRSV感染的研究
被引量:7
2013年
本研究旨在通过慢病毒载体系统将猪源CD163转染入永生化的猪肺泡巨噬细胞(PAM)系(CRL-2843),建立稳定表达CD163的PAM细胞系(PAM-CD163)及验证该细胞系对PRRSV的易感性。用PCR方法从pJET1.2-CD163载体上扩增CD163基因编码区,通过酶切连接构建慢病毒表达载体pTrip-CMV-CD163-IRESpur。将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293-T细胞,包装表达CD163的慢病毒。将收获的慢病毒在Polybrene的介导下转导至永生化PAM细胞,采用嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法筛选出稳定表达CD163的PAM细胞系。应用得到的细胞系进行PRRSV感染试验。经过RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western blot和流式细胞术试验证实,筛选出1株能稳定表达CD163的PAM细胞系,命名为PAM-CD163。该株细胞对PRRSV高度易感,PRRSV在PAM-CD163细胞上的毒价可以达到105.0 TCID50·mL-1以上。建立了稳定表达CD163的PAM细胞系,可以用于PRRSV的分离培养和细胞受体的研究。
王向鹏
魏蕊芳
肖书奇
周恩民
关键词:
慢病毒载体
猪繁殖与呼吸综合征病毒
猪肺泡巨噬细胞
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