浙江省医药卫生科学研究基金(2005A108)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：孟哲峰徐巍傅鹰沈波余素飞更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院浙江省台州医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
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- CXCL10基因对乳腺癌细胞株MCF-7肿瘤相关基因表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的构建CXCL10-pcDNA3．1（＋）重组质粒及稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7细胞株，探讨CXCL10对MCF-7细胞株肿瘤相关基因表达的影响。方法从1干扰素（IFN-1）刺激的人外周血单个核细胞中克隆CXCL10基因，构建CXCL10-pcDNA3．1（＋）重组质粒，用CXCL10-pcDNA3．1（＋）和对照质粒pcDNA3．1（＋）分别以脂质体转染MCF-7细胞株，经G418筛选后获得稳定转染细胞株，以逆转录（RT）-PCR鉴定CXCL10基因表达，免疫印迹（WB）及ELISA鉴定CXCL10蛋白表达及分泌。以琼脂克隆形成实验分别计算实验组[转染CXCL10-pcDNA3．1（＋）的MCF-7细胞株]、对照组[pcDNA3．1（＋）的MCF-7细胞株]及未转染组（未转染的MCF-7细胞株）的细胞增殖活性；RT—PCR鉴定肿瘤相关基因基质金属蛋白酶9（MMP9）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）及信号转导和转录激活因子3（STAT3）在各细胞株中的表达。结果重组质粒CXCL10-pcDNA3．1（＋）及质粒pcDNA3．1（＋）稳定转染MCF-7细胞株构建成功；克隆形成率在实验组、对照组及未转染组分别为78．2％、79．9％及87．8％，3组间比较差异无统计学意义（χ2=3．8，P〉0．05）；实验组细胞能高效表达CXCL10mRNA，3组间比较差异有统计学意义（F=50．5，P〈0．01）；ELISA结果显示细胞培养上清液中CXCL10的表达量3组间比较，差异有统计学意义（F=54．8，P〈0．01）；MMP9基因转录水平在实验组、对照组及未转染组分别为0．067±0．003、0．103±0．007及0．085±0．026，均很低，且组间差异无统计学意义（F=4．2，P〉0．05）；VEGF在实验组、对照组及未转染组灰度值分别为0．183±0．003、0．787±0．019及0．789±0．011，3组间比较差异有统计学意义（F=2232，P〈0．01）；STAT3在实验组、对照组及未转染组灰度值分别为0．573±0．016、0．707±0．008及0．711±0．013，3组间比较差异有统计学意义（F=115，P〈0�
- 沈波傅鹰徐巍余素飞朱敏孟哲峰
- 关键词：乳腺肿瘤趋化因子CXCL10基因表达
- CXCL10及其受体参与子宫内膜异位症发病的免疫机制初探
- 目的:通过研究趋化因子配体10(CXCL10)及其受体(CXCR3)的表达,探讨其参与子宫内膜异位症(EM)发病的免疫机制。方法:分别运用ELISA法及化学发光分析法检测EM患者未经手术治疗组(76例)、经手术治疗组(1...
- 傅鹰沈波余素飞郑巧飞徐巍何小帆孟哲峰
- 关键词：子宫内膜异位症CXCL10CXCR3
- 文献传递
- CXCL10及其受体参与子宫内膜异位症发病的免疫机制初探
- 2009年
- 目的:通过研究趋化因子配体10(CXCL10)及其受体(CXCR3)的表达,探讨其参与子宫内膜异位症(EM)发病的免疫机制。方法:分别运用ELISA法及化学发光分析法检测EM患者未经手术治疗组(76例)、经手术治疗组(10例)及正常体检人员组(76例)血清标本中CXCL10及癌胚抗原CA125浓度;分离并体外活化EM患者组(10例)及正常体检人员组(10例)外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法检测活化后PBMC培养上清液中CXCL10的分泌表达水平、流式细胞术检测活化PBMC的表面分化抗原3(CD3)及CXCR3表达、RT-PCR检测CX-CR3基因亚群(CXCR3A及CXCR3B)的表达;对结果进行统计分析。结果:血清CXCL10水平,EM患者未经手术治疗组、经手术治疗组及正常体检人员组间比较均具有显著差异(P<0.05);EM组与正常体检人员组比较:活化PB-MC培养上清液中CXCL10的表达水平无显著差异(P>0.05)、CD3+/CXCR3+PBMC细胞数无显著差异(P>0.05)、EM组高转录表达CXCR3B亚群而正常对照组表达CXCR3A亚群。结论:EM患者的血清CXCL10缺陷表达可能是参与EM发病的免疫机制之一;EM患者PBMC对细胞活化信号具有有效的免疫反应性,但活化后的PBMC细胞表面高表达的是CXCR3B亚群、而非具有趋化效应的CXCR3A亚群,推测EM通过此种免疫逃逸机制而发病。
- 傅鹰沈波余素飞郑巧飞徐巍何小帆孟哲峰
- 关键词：子宫内膜异位症CXCL10CXCR3
- 融合蛋白CXCL10-loop3-EGF的可溶性表达及其抗肿瘤效应研究
- 2009年
- 目的:构建重组趋化因子CXCL10及表皮生长因子受体干扰序列融合蛋白(CXCL10-loop3-EGF),验证其靶向性抗肿瘤效应及抑制血管形成活性。方法:运用RT-PCR从经IFN-γ刺激活化的PBMC中扩增人CXCL10基因,运用重叠延伸PCR法扩增CXCL10-loop3-EGF融合基因,并将其与载体pTG19-T连接、转化大肠杆菌DH5α、筛选阳性克隆,CXCL10-loop3-EGF融合基因与载体pET32a(+)连接、转化大肠杆菌Origami B(DE3),诱导可溶性表达重组his-CXCL10-loop3-EGF融合蛋白,并经镍柱亲和层析、酶切、超滤及透析等方法获得纯化的重组CXCL10-loop3-EGF融合蛋白。通过Transwell细胞趋化实验及HUVEC血管形成抑制实验验证此融合蛋白的抗肿瘤效应。结果:SDS-PAGE和Western blotting证实CXCL10-loop3-EGF融合蛋白构建成功,纯化后的融合蛋白具有显著的趋化活化PBMC活性及抑制HUVEC血管形成活性。结论:成功构建融合蛋白CXCL10-loop3-EGF,该蛋白具有较好的靶向性抗肿瘤活性。
- 沈波傅鹰孟哲峰徐巍何小帆朱敏
- 关键词：可溶性表达抗肿瘤效应
