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干细胞移植在消化道疾病治疗中的应用: 2015年; 干细胞是具有广泛自我更新和分化的细胞群。临床上已逐渐开展应用自体或异体干细胞移植给治疗消化道疾病。目前针对干细胞移植治疗消化道疾病的研究主要集中在炎症性肠病、终末期肝病及消化系统肿瘤等领域,其中部分研究已应用于临床。近年来,干细胞疗法在治疗消化道疾病方面取得了很多进展,并且效果非常突出和显著,具有良好的应用前景。笔者就干细胞的采集、特性、类型的选择以及可以运用干细胞移植进行治疗的消化道疾病类型作一综述。; 牟丽莎; 关键词：干细胞干细胞移植消化道疾病

CRISPR-Cas9敲减猪GGTA1基因的质粒构建: 2015年; 目的:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建靶向猪GGTA1基因的敲减质粒。方法:将Lenti CRISPR-v2质粒转化感受态DH5α进行扩增并提取该质粒,设计并合成靶向猪GGTA1基因的g RNA(guide RNA,g RNA)序列,对Lenti CRISPR-v2质粒进行Bsm BI酶切及电泳和胶回收,并将胶回收产物与g RNA序列进行连接,构建Lenti CRISPR-v2-g RNA重组质粒,将该重组子转化感受态DH5α,培养过夜后,将其涂布于含有氨苄青霉素(Ampicillin,AMP)的LB固体培养基,筛选阳性单克隆DH5α进行培养并提取质粒,对提取的Lenti CRISPR-v2-g RNA敲减质粒进行Kpn I与Eco RI双酶切验证与序列测定。结果:Lenti CRISPR-v2载体酶切结果正确;目的 g RNA序列成功插入酶切后的Lenti CRISPR-v2载体且序列正确。结论:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建靶向猪GGTA1基因的敲减质粒,该研究为后续慢病毒的包装及CRISPR-Cas9系统敲减猪GGTA1基因的效率与功能研究奠定了基础。; 牟丽莎温春圣谢崇伟蔡志明

靶向长链非编码RNA TUC338的人工合成四环素调控系统在膀胱癌细胞中的作用: 2016年; 目的:探讨应用四环素调控长链非编码RNA TUC338在膀胱癌细胞内的表达及抗肿瘤作用。方法:将针对TUC338的sh RNA序列插入到四环素诱导系统的下端,构建四环素诱导的TUC338 sh RNA并转染细胞。应用实时荧光定量PCR检测细胞内TUC338的表达水平,采用CCK8和半胱天冬酶3酶联免疫吸附测定法的方法分别检测细胞的增殖和凋亡。结果:四环素诱导的TUC338 sh RNA可以降低TUC338的表达,抑制膀胱癌细胞增殖和促进膀胱癌细胞的凋亡。结论:通过构建四环素基因表达调控系统,可精确控制TUC338在膀胱癌细胞内表达,并发挥杀伤肿瘤细胞功能,为进一步构建特异、高效的膀胱癌合成生物治疗器件提供理论基础。; 牟丽莎朱书蔡志明; 关键词：长链非编码RNA 膀胱癌

异种器官移植中猪内源性逆转录病毒的检测: 2015年; 猪来源的细胞、组织和器官可用于多种疾病治疗。但存在猪传染性病原体感染人体宿主的风险,包括含有3种亚型的猪内源性逆转录病毒(PERVs):PERV-A,PERV-B和PERV-C。异种器官移植的检测应包含筛选猪群的来源(PERV-A和PERV-B和PERV-C表达水平的检测)和受体的筛选(区分PERV之间的转递性和嵌合性)。这些测有助于降低PERV传播感染的可能性并对提高异种器官移植的安全性具有重大的意义。; 牟丽莎白图雅谢崇伟蔡志明; 关键词：异种器官移植猪内源性逆转录病毒实时RT-PCR

CRISPR敲减猪CMAH基因的质粒构建及慢病毒的包装: 2015年; 目的:构建靶向猪CMAH基因的慢病毒CRISPR-Cas9敲减质粒及进行慢病毒的包装。方法:设计并合成CMAH基因gRNA的靶序列并将其与Lenti CRISPR-v2载体连接;连接后转化大肠杆菌DH5α,筛选出重组子后酶切鉴定与测序;制备VSV-G、Rev、Gag/Pol等质粒用于包装慢病毒。结果:成功构建猪CMAH基因CRISPR-Cas9敲减质粒并包装出相应慢病毒。结论:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术能够构建敲减猪CMAH基因的质粒并能够使用其包装出病毒,为后续感染猪动脉内皮细胞(porcine aorta endothelial cell,PAEC)细胞敲减CMAH基因及功能验证奠定基础。; 牟丽莎王蕾谢崇伟蔡志明

小鼠精子发生过程中雄激素受体对靶基因Septin7的表达调控: 2014年; 目的:探讨雄激素受体(AR)对睾丸Sertoli细胞中Septin 7基因表达的影响。方法:分别采用实时荧光定量PCR及Western blot,检测睾丸Sertoli细胞AR特异性敲除(S-AR-/y)和野生型小鼠(WT)睾丸Sertoli细胞中SEPTIN 7的表达,并观察雄激素对过表达AR的Sertoli细胞系TM4中SEPTIN 7表达的影响。结果:与WT小鼠相比,S-AR-/y中Septin 7 mRNA表达水平升高(P<0.05);雄激素显著降低TM4中SEPTIN 7表达(P<0.05)。结论:Septin 7可能是睾丸Sertoli细胞中AR调控的靶基因。该研究对阐明雄激素及其受体调节精子发生的分子机理具有重要意义。; 牟丽莎刁瑞英张强桂耀庭蔡志明; 关键词：雄激素受体 SEPTIN 支持细胞精子发生雄性不育

β-防御素3在人精子上的表达及功能研究被引量：3: 2014年; 目的:探讨附睾上皮分泌的β-防御素3(HBD-3)在人精子上的表达和功能,以及是否参与弱精子症的发生。方法:采用间接免疫荧光染色和Western blot检测HBD-3在人精子的定位和表达;采用计算机辅助精子分析(CASA)检测HBD-3是否参与精子活力和前向运动能力。结果:HBD-3在弱精子症精子的表达量较正常生育组下调。精子上HBD-3表达水平与精子活力呈正相关性。抗HBD-3抗体将干扰正常精子活力,而rHBD-3可改善弱精子症精子的活力。结论:在男性生殖系统中,精子表面HBD-3参与精子活力和前向运动能力发生。本研究为男性不育症提供新型诊断靶点和治疗策略。; 刁瑞英牟丽莎陈浩蔡学泳; 关键词：精子弱精子症男性不育症

TUC338在膀胱癌中的表达及作用机制研究被引量：1: 2016年; 目的:探讨膀胱癌中长链非编码RNA(lnc RNA)TUC338的表达及作用机制。方法 :收集安徽医科大学一附院收治的30例膀胱癌手术患者的癌变组织和癌旁组织,通过实时定量PCR检测TUC338的表达水平并分析其临床病理特征之间的关联。运用RNA干扰(si-TUC338)的方法检测敲减TUC338,采用CCK8和半胱天冬酶3酶联免疫吸附测定法的方法分别检测TUC338对膀胱癌细胞的增殖、凋亡的影响。结果:相对于膀胱癌旁组织,TUC338 m RNA在膀胱癌组织中高表达。敲减TUC338后,细胞增殖被抑制,细胞凋亡增加。结论:TUC338是一个潜在的治疗膀胱癌的药物作用靶点。; 牟丽莎朱书蔡志明; 关键词：膀胱癌长链非编码RNA

通过CRISPR-Cas9系统敲减PAEC中GGTA1和CMAH基因的效果检测被引量：1: 2015年; 目的:检测由短回文重复序列(CRISPR)-Cas9系统敲减猪动脉内皮细胞(PAEC)中基因α1,3半乳糖基转移酶(GGTA1)和CMP-N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH)的效果。方法:通过CRISPR-Cas9系统,用已设计好的GGTA1和CMAH基因的guide RNA(g RNA)构建质粒,以慢病毒为载体包装病毒和感染PAEC,对成功感染的细胞进行单克隆培养并挑选收集单克隆细胞,提取细胞基因组,进行PCR,琼脂糖凝胶电泳,退火、酶切,测序等方法对GGTA1和CMAH基因敲减的效果进行检测。结果:对单克隆细胞进行选择性测序,选择V2-g-a1、V2-c-b1、V2-c-d4单克隆细胞测序结果分别为:V2-g-a1细胞基因组突变位点在第205位;V2-c-b1细胞基因组突变位点在第240位;V2-c-d4细胞基因组突变位点在第246位。结论:CRISPR-Cas9系统成功构建质粒,完成慢病毒包装和感染细胞,成功敲减目的基因。; 牟丽莎白图雅谢崇伟蔡志明

CRISPR/Cas9系统联合人多能干细胞制备嵌合体猪培育人源化器官的研究进展: 2015年; 异源器官移植是解决人类器官资源短缺的一条可行途径,但可供移植的器官明显不足。然而异种器官移植因器官来源广泛,有着非常广阔的前景。猪无论是在基因组水平还是器官形态上,都与人类极为相似,因此一直被认为是最为理想的人类器官的动物供体来源。为了有效的解决人-猪不同种属间的异源器官引发的排斥反应,结合高效特异的CRISPR/Cas9基因组靶向修饰和诱导多能干细胞技术通过囊胚补偿法制备嵌合体猪为培育人类器官成为可能。如若研究证明改方法可行,不仅可有效解决移植因器官源紧缺的问题,同时为研究人类疾病和后续的药物研发提供理想的研究模型。; 冯万有蔡志明牟丽莎; 关键词：基因修饰异种器官移植

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