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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-06-0818): 作品数：14 被引量：53H指数：5; 相关作者：汪铭书程安春陈孝跃贾仁勇朱德康更多>>; 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室西南民族大学更多>>; 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”四川省重点科学建设项目高等学校科技创新工程重大项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

鸭瘟病毒UL51基因在感染宿主细胞中的定位和转录特征: 2010年; 对鸭瘟病毒(DPV)UL51基因在感染宿主细胞内的定位和转录时相进行分析,为进一步研究该基因的特性和功能提供有用的试验数据和材料。构建pET32a-UL51原核表达载体,将其转化至E.coliBL21(DE3)中进行IPTG诱导表达后,用Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱层析法纯化该表达产物。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备兔抗UL51多克隆抗血清,通过间接免疫荧光和RT-PCR法检测该基因在DPV感染的鸭胚成纤维细胞(DEF)内的定位和转录情况。间接免疫荧光结果显示,最早可在感染后8h的胞浆中检测到特异性荧光点,24～36h有大量绿色荧光团块聚集于近核区域,之后随着细胞病变的增强,胞浆中的绿色荧光开始减弱,且在感染晚期的胞核中也出现了少量弥散的绿色荧光。RT-PCR结果显示,DPVU L51基因从感染后4h开始转录,其后转录量不断增大,从6～48h一直保持在较高水平,之后又降低。DPVU L51蛋白主要定位于感染的宿主细胞的胞浆中特别是近核区域,与其在α-疱疹病毒中的同源物的定位结果一致;并且与其他几种α-疱疹病毒的转录情况对比后,可认为该基因是一个晚期(γ类)基因。; 沈婵娟程安春汪铭书文明招丽婵贾仁勇徐超孙涛葛菡周登春余波陈孝跃; 关键词：鸭瘟病毒原核表达间接免疫荧光 RT-PCR

鸭瘟弱毒疫苗诱导IgA、IgM和IgG产生规律的研究被引量：7: 2008年; 【目的】探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律。【方法】将DPV弱毒苗Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后60d内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、气管和消化道(食道、十二指肠、空肠和直肠)分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG抗体滴度(以lg表示)。【结果】所有免疫鸭检测样品中均可检测到DPV特异性IgG、IgM和IgA抗体。血清中抗体滴度由高到低均为IgG、IgM和IgA,其中IgM检出时间最早,IgG存留时间最长。皮下免疫DPV弱毒苗可更早诱导鸭血清中生成特异性IgG,且抗体滴度最高;气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、IgM和IgG,其中IgA和IgM检出时间最早,IgA存留时间最长。口服和滴鼻途径免疫鸭消化道和气管分泌液中IgA滴度较皮下免疫鸭高。【结论】不同途径免疫鸭瘟弱毒疫苗均可迅速诱导免疫鸭体液免疫介导的黏膜免疫和系统免疫。以DPV特异性IgA为主要抗体的黏膜免疫在预防DPV强毒早期对鸭消化道和呼吸道等局部黏膜的感染中具有十分重要的作用,使DPV弱毒疫苗快速产生免疫保护的机制从黏膜免疫的角度得到一定程度解释。; 齐雪峰程安春汪铭书杨晓燕贾仁勇陈孝跃; 关键词：IGA IGG IGM

疱疹病毒UL31基因及其编码蛋白研究进展: 2009年; 疱疹病毒是一类有囊膜的双链DNA病毒,基因组由长节段(L)和短节段(S)组成。UL31基因是基因组独特UL序列中的一个核心基因,具有典型的开放阅读框架,编码一种磷酸化蛋白。该蛋白与UL34蛋白相互作用,定位于细胞核边缘,与病毒核衣壳初期包膜形成有关,对病毒DNA的合成、包装和释放也有一定的作用。本文就UL31基因及编码蛋白的结构特点和基本功能等研究进展进行总结,以期为疱疹病毒UL31基因的深入研究提供指导。; 谢伟程安春汪铭书; 关键词：疱疹病毒

肠炎沙门菌种特异性PCR及对感染鸭快速检测被引量：12: 2009年; 根据GenBank登录的肠炎沙门菌(SE)种特异性DNA序列,设计合成了1对能特异性扩增293 bp DNA片段的引物,首次建立了SE的种特异性聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法仅需10 h即可获得结果且只能特异性扩增SE,而对照菌株的扩增结果均为阴性;检测SE的最低DNA模板量为50 ng/L,最少检测到的细菌数为19CFU/mL。对10只SE人工感染死亡雏鸭的心、肝和粪便的检测结果与细菌分离的结果符合率为100%,而对脾、脑、法氏囊的检测阳性率极显著(P<0.01)高于细菌分离率;应用该技术对临床送检的228只疑似SE感染死亡鸭病例检测结果也显著高于细菌分离法。研究结果表明,建立的PCR方法检测SE具有较好的特异性和敏感性,比传统的细菌分离鉴定更加快捷、准确,可用于SE感染疑似病例的检测及其分子流行病学调查。; 邓树轩程安春汪铭书曹平朱德康陈孝跃; 关键词：肠炎沙门菌聚合酶链式反应种特异性

鸭肠炎病毒UL6基因B细胞表位的预测及其主要抗原域的原核表达被引量：9: 2008年; 采用DNAStar Protean程序，综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数，对鸭肠炎病毒（DEV）CHv毒株UL6基因（GenBank登录号EF055890）的氨基酸序列进行了B细胞表位预测。结果显示，UL6蛋白羧基端第Thr507～Gln515、Thr521～Met529、Asp531～Phe539、Gly544～Asn562、Thr568～Gln585、Lys592～Val604、A1a681～Ala778和Tyr780～Lys790区域内含有优势B细胞表位。以DEV CHv毒株基因组作为PCR模板，利用Oligo6．0软件设计了1对引物，整体扩增涵盖上述具有优势表位的基因片段，将其亚克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，获得表达载体pET-32a—UL6M，再将其转化至E．coli Rosetta（DE3），经IPTG诱导，外源基因获得了良好表达。以免抗DEV多克隆血清进行Western blot分析，抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应。提示，该氨基酸片段可能含有软件预测的线性表位区。; 孙涛程安春汪铭书郭宇飞贾仁勇沈婵娟; 关键词：鸭肠炎病毒 B细胞表位预测原核表达

沙门氏菌分子检测用靶基因的研究进展: 沙门氏菌是一种对人和动物健康危害十分严重的致病菌,传统的针对沙门氏菌的微生物学检测方法不仅步骤繁琐而且费时费力。随着生命科学的发展和实验技术的革新,一大批针对沙门氏菌的新检测方法相继诞生,其中基于沙门氏菌染色体和特定基因...; 唐田程安春汪铭书李鑫; 关键词：靶基因沙门氏菌; 文献传递

鸭瘟病毒gC基因的克隆及其分子特性分析被引量：7: 2008年; 对已构建的鸭瘟病毒(DPV)DNA文库重组质粒测序后,运用ORF Finder、BLASTN等工具进行全面生物信息学分析,根据分析结果设计引物,以DPV DNA为模板进行PCR扩增和T克隆,获得完整基因,经测序和探针核酸斑点杂交进行验证。结果证实,获得的完整ORF片段(ORF1296)为DPV的gC基因(GenBank登录号EU076811),全长1 296 bp,与已报道的其他疱疹病毒gC基因具有较高的同源性,它编码432个氨基酸,蛋白分子质量为45 ku、等电点(PI)为5.292,具有疱疹病毒典型I型膜蛋白结构特征。gC基因进化树分析表明,DPV与α-疱疹病毒亚科的鸟源疱疹病毒亲缘关系最近,编码的gC蛋白多为柔性区域,富含无规卷曲,含少量α-螺旋和β-折叠,氨基酸序列的第21～24、50～58、67～70、161～171、273～281、387～393位最有可能为抗原表位。此结果为进一步开展DPV gC基因及其编码蛋白的深入研究提供了有用数据。; 徐超李欣然信洪一练蓓程安春汪铭书朱德康贾仁勇罗启慧陈孝跃; 关键词：鸭瘟病毒 GC基因克隆分子特性

鸭致病性大肠杆菌外膜蛋白型研究被引量：8: 2009年; 测定了从我国分离到的130株鸭病原性大肠杆菌外膜蛋白型（Outer membrane protein patterns,OMP型）,其中O93、O92、O78和O76优势血清型53株,O46等30个其他血清型分离株77株,这些分离株共产生了4个OMP型,其中OMP-1型81株,占62.3%（81/130）,覆盖O93、O92、O78和O76等29个血清型,占85.3%（29/34）,为主要的OMP型;根据GenBank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基因（ompA）的核苷酸序列设计引物,从9株优势血清型和1株O46血清型的鸭大肠杆菌中分别扩增得到ompA基因,进行序列测定及分析,发现优势血清型9个菌株的ompA均由1 171个碱基组成,均只有1个大的开放阅读框（ORF）,长1 053 bp,编码由350个氨基酸组成的前外膜蛋白A（pro-OmpA）,前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由329个氨基酸残基组成;O46菌株的ORF全长1 041 bp,在400-411 bp位缺失了12个碱基,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成;10个鸭致病性E.coli的ompA基因核苷酸序列高度同源,相似性达95.8%~100%。; 于学辉程安春汪铭书汤承王远微王英岳华张焕容; 关键词：致病性大肠杆菌外膜蛋白型

不同条件对鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳分析结果的影响被引量：1: 2009年; 本研究以鸭瘟病毒感染鸭胚成纤维细胞为材料,围绕影响二维电泳因素进行全面探讨,以建立和优化鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型。结果表明,样品经过冷丙酮处理,水化液DTT浓度为30 mmol/L都有利于等电聚焦;采用pH5～8 IPG窄胶条和混合两性载体电解质pH3～10/pH5～8为2/1比pH3～10 IPG宽胶条和单一两性载体电解质pH3～10分离蛋白时,各蛋白点间距较大,分辨率高,更有利于显示低丰度蛋白点;1.5 mg的蛋白上样量偏大,2～DE图像出现拖尾和水平条纹,部分相邻高丰度的蛋白重叠,且还掩盖了低丰度蛋白点。PDQuest7.40软件分析显示:17 cmpH5～8 IPG胶条电泳鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组,银染可获得1 253个蛋白点,而考染却检测到388个蛋白点;重复试验仍获得清晰、稳定的2-DE图像,同一样本不同时期,考染可获得约348、331个蛋白点,蛋白点匹配率达88%,表明了鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型稳定、分辨率高、重复性好,为鸭瘟病毒蛋白组的进一步研究和新蛋白的发现提供了重要的研究方法。; 贾仁勇程安春汪铭书郭宇飞徐超齐雪峰袁桂萍朱德康丁轲龚永强杨梅陈孝跃; 关键词：蛋白质组二维电泳鸭瘟病毒成纤维细胞

不同剂量猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗肌肉注射诱导仔猪细胞免疫的研究: 2009年; 将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)分别以200μg、100μg和50μg3种剂量肌肉注射免疫21日龄仔猪,同时设空载体对照和生理盐水空白对照。于免疫后7d、15d、30d、45d、60d和70d采用流式细胞仪(FACS)和淋巴细胞增殖试验(MTT法)分别对免疫猪外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行检测。结果表明3个不同剂量的pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫仔猪后均能诱导产生良好的细胞免疫应答,实验组与对照组比较差异极显著(p<0.01)或显著(p<0.05)。大剂量基因疫苗免疫仔猪的外周血T淋巴细胞的增殖能力及CD4+、CD8+百分含量高于中剂量和小剂量基因疫苗免疫的仔猪,表现出一定的量效关系。; 希尼尼根程安春汪铭书陈希文豆文波李雪梅刘伍梅张平英刘菲陈孝跃; 关键词：细胞免疫 PRRSV 基因疫苗

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