国家自然科学基金(30370569)
- 作品数：15 被引量：175H指数：7
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- p38丝裂素活化蛋白激酶介导低氧预处理诱导的内质网应激相关的心肌细胞保护被引量：24
- 2006年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)和caspase-12是重要的内质网(endoplasmicreticulum,ER)应激分子,本实验在心肌细胞低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型上观察低氧预处理(hypoxicpreconditioning,HPC)对CRT和caspase-12表达及活化的影响,探讨内质网应激(endoplasmicreticulumstress,ERS)在HPC保护机制中的意义及其细胞信号转导机制。原代培养的Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞随机分为6组:H/R组、HPC+H/R组、SB203580+HPC+H/R组、SP600125+HPC+H/R组、HPC组和对照组。以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)活性及流式细胞术检测细胞损伤情况;West-ernblot方法检测CRT和caspase-12表达、活化及p38丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)、c-JunN-terminalkinase(JNK)磷酸化水平。结果表明:(1)HPC具有细胞保护作用,与H/R组比较,HPC+H/R组细胞凋亡率和LDH漏出分别降低6.6%和70.0%,存活率增高6.4%;HPC前以特异性p38MAPK抑制剂SB203580预孵育消除HPC的保护作用,与HPC+H/R组相比,细胞凋亡率和LDH漏出分别增高5.4%和2.1倍,存活率降低5.4%,JNK特异性抑制剂SP600125预孵育对HPC的保护作用无明显影响。(2)H/R明显上调CRT表达(较对照组高8.1倍)和caspase-12活性(较对照组高33.2倍);单独HPC可诱导CRT表达增多(较对照组高2.6倍),但上调程度较H/R组低60%。H/R前进行HPC降低CRT过表达程度(降低72.4%)及caspase-12活化水平(降低59.6%)。(3)HPC前应用p38MAPK抑制剂,抑制CRT表达上调(分别较HPC+H/R组和HPC组低63.9%和71.9%),并消除HPC减轻H/R上调caspase-12活性的作用(较HPC+H/R组高7.1倍);HPC前抑制JNK活性对CRT、caspase-12表达和活化均无明显影响。上述结果提示:HPC可激发适当的ERS,抑制H/R诱导的过度ERS,减少ER凋亡信号介导的细胞凋亡。p38MAPK信号途径在HPC诱导的ER应激分子表达、抑制ER凋亡信号分子活化等机制中发挥重要作用。
- 祝筱梅刘秀华蔡莉蓉徐菲菲
- 关键词：内质网缺氧预处理低氧丝裂素活化蛋白激酶
- 肾上腺髓质素2对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:研究肾上腺髓质素2(AM2)对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响。方法:分离并培养SD大鼠脑微血管内皮细胞,经Ⅷ因子相关抗原的抗体鉴定和常规处理后,随机分为对照、AM2(10-7mol/L1、0-8mol/L和10-9mol/L)、ADM、ADM+AM2、10%胎牛血清和10%胎牛血清+AM210-7mol/L等8组,以[3H]-TdR掺入法测定MEC增殖反应。结果:10-7-10-9mol/L各浓度AM2、ADM以及AM2和ADM合用对于静止状态的脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入与对照组比较均无明显差异(均P>0.05)。10%胎牛血清刺激组脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入比对照组高87.5%(P<0.05),10-7mol/L AM2抑制胎牛血清诱导的脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入增加(P<0.05)。结论:AM2抑制血清诱导的脑微血管内皮细胞增殖。
- 蔡莉蓉李玉珍刘秀华
- 关键词：肾上腺髓质素细胞增殖脑微血管内皮细胞
- 内质网应激与缺血再灌注损伤及其防护被引量：42
- 2006年
- 内质网应激(ERS)是细胞内一种适应性保护机制,但持续存在或过强时则最终诱导细胞凋亡,造成组织损伤。缺血/再灌注(I/R)时ATP耗竭、钙超载及大量自由基生成等因素诱导过度ERS导致组织损伤。缺血预处理可激发适当的ERS,增强细胞耐受后续长时间缺血刺激的能力,延缓或减轻I/R造成的组织损伤。
- 祝筱梅刘秀华
- 关键词：内质网应激缺血预处理
- 串珠素的生理与病理生理作用被引量：10
- 2004年
- 串珠素 (perlecan)是细胞外基质中主要的蛋白聚糖之一 ,由核心蛋白和硫酸肝素侧链组成 ,可以通过调节生长因子的结合和活性影响血管壁细胞的增殖、迁移 ,并影响细胞与基质的粘附 ,在机体心血管和软骨发育。
- 刘秀华
- 关键词：串珠素发育血管生成细胞外基质
- 在低氧预处理延迟心肌保护中钙网蛋白表达升高被引量：7
- 2006年
- 本文分别在整体实验和细胞培养条件下研究钙网蛋白(calreticulin,CRT)在低氧预处理(hypoxicpreconditioning,HPC)延迟心肌保护中的表达及其信号转导机制。(1)整体实验时Wistar大鼠随机分为3组:假手术(sham)组、仅结扎冠状动脉的心肌缺血(myocardialinfarction,MI)组和HPC后再结扎冠状动脉的HPC+MI组,分别于术后24h、14d和28d观察HPC对缺血后心功能和梗死区、危险区面积的影响;采用Westernblot检测CRT表达以及p38丝裂素活化蛋白激酶(p38mitogen-activatedproteinkinase,p38MAPK)、应激活化蛋白激酶(stress-activatedproteinkinase,SAPK)活性。(2)原代培养Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞,随机分为6组:低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)组、HPC组、HPC+H/R组、p38MAPK抑制剂SB203580+HPC+H/R(SB+HPC+H/R)组、SAPK抑制剂SP600125+HPC+H/R(SP+HPC+H/R)组和正常对照组;采用台盼蓝排斥实验、乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)活性检测及流式细胞仪检测各组细胞损伤情况;采用Westernblot检测CRT表达及p38MAPK、SAPK的磷酸化水平。主要结果如下:(1)整体动物实验结果表明,HPC改善缺血对心肌左室压力最大上升/下降速度(±dp/dtmax)的抑制,限制心肌梗死面积;HPC后CRT表达呈动态变化:术后24h时HPC+MI组CRT表达增高106%(P<0.05vsMI组),以危险区最为显著;14d至28d表达逐步降低。相关分析显示,术后24h时CRT表达量与心功能呈正相关(r=0.9867,P<0.05),与梗死面积呈负相关(r=-0.9709,P<0.05)。(2)细胞培养实验结果表明,HPC可减轻H/R诱导的心肌细胞LDH漏出,增加心肌细胞存活率,降低细胞凋亡;单纯HPC可诱导CRT表达轻度增加(222%,P<0.05vs对照组),而损伤性H/R诱导CRT过表达(503%,P<0.05vs对照组),HPC可降低H/R诱导CRT表达升高的幅度;p38MAPK活性与HPC诱导的CRT表达呈正相关(r=0.9021,P<0.05),而SAPK活性与其呈负相关(r=-0.8211,P<0.05)。由此得出结论:(1)整体实验中HPC可明显改善缺血后心脏的收缩与舒张功能,限制�
- 徐菲菲付艳刘凤英祝筱梅刘秀华
- 关键词：钙网蛋白低氧缺血预处理丝裂素活化蛋白激酶
- 串珠素表达下调参与低氧对大鼠心肌微血管内皮细胞增殖的抑制作用被引量：5
- 2007年
- 低氧可以抑制内皮细胞增殖,但是其机理目前尚不清楚。串珠素在调节内皮细胞增殖中发挥着重要作用。为了探讨串珠素是否参与低氧对内皮细胞增殖的抑制,将大鼠心肌微血管内皮细胞在低氧或常氧状态下培养12 h后,用实时定量RT-PCR方法检测串珠素mRNA的表达。结果发现:低氧可以明显抑制串珠素mRNA的表达,与常氧状态下串珠素mRNA表达水平比较,差异显著(P<0．05)。与此同时,低氧状态下或用串珠素抗体中和内源性串珠素,内皮细胞的增殖和对成纤维细胞生长因子的反应明显降低,粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达和细胞外信号调节激酶1／2(extracellular signal- regulated kinase,ERK1／2)活性明显下降。结果提示,串珠素表达下调可能通过抑制FAK介导的ERK1/2依赖的信号转导途径,参与低氧对大鼠心肌微血管内皮细胞增殖的抑制作用。
- 李玉珍刘秀华蔡莉蓉
- 关键词：低氧内皮细胞串珠素
- 串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响被引量：1
- 2006年
- 目的观察串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响。方法分离并培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,经VIII因子相关抗原抗体鉴定和常规处理后,随机分为对照组、bFGF组、缺氧组、缺氧+bFGF组、PD98059组和串珠素阻断组,以[3H]-TdR掺入法测定内皮细胞增殖反应。结果缺氧+bFGF组内皮细胞[3H]-TdR掺入率较对照组和bFGF组明显升高,是对照组的11.12倍(P<0.05),bFGF组的4.05倍(P<0.05),表明串珠素和bFGF联合作用可以明显刺激内皮细胞增殖,这种联合作用较单独的串珠素或bFGF作用明显;PD98059组内皮细胞[3H]-TdR掺入率较缺氧+bF-GF组下降了93.40%(P<0.05),表明PD98059可以抑制串珠素与bFGF对内皮细胞的增殖作用。结论串珠素可以增强bFGF对心肌微血管内皮细胞的增殖作用,ERK介导了串珠素对bFGF的作用。
- 李玉珍刘秀华蔡莉蓉
- 关键词：心肌微血管内皮细胞串珠素BFGF增殖
- 串珠素参与碱性成纤维细胞生长因子对于缺血心肌的保护被引量：5
- 2007年
- 目的观察串珠素参与碱性成纤维细胞生长因子对于缺血心肌的保护。方法大鼠心肌梗死模型建立后,随机分为碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)+心肌缺血(MI)组(bFGF+MI 组,缺血边缘区注射 bFGF)、MI 组(缺血边缘区注射等体积生理盐水)和假手术组(sham 组)。分别于梗后24 h、14 d、28 d 结束实验。检测血流动力学参数,红四氮唑法测定心肌梗死面积,免疫组化法计数微血管数目,实时定量 PCR 检测串珠素 mRNA 表达,Western 印迹检测 FAK、p-p38MAPK 变化。结果缺血区边缘注射 bFGF 后,心肌功能改善,心梗面积较 MI 组减小,微血管数目增加,多于 MI 组,串珠素 mRNA 在缺血边缘区、梗区表达增加,FAK、p-p38表达上调。结论 bFGF 明显改善大鼠急性心肌梗死后心肌功能,缩小梗死面积,促进缺血心肌血管新生,串珠素参与 bFGF 对于缺血心肌的保护,其细胞信号转导机制涉及 FAK 的激活和 p38MAPK 信号转导途径。
- 付艳刘秀华赵秀梅刘凤英李玉珍徐菲菲孙胜蔡莉蓉
- 关键词：心肌梗塞成纤维细胞生长因子心肌缺血串珠素
- 鼠尾胶为贴黏剂的微血管内皮细胞培养被引量：6
- 2005年
- 目的:以鼠尾胶为贴黏剂,建立一种成本低且生长状态良好的微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下制作鼠尾胶,并均匀铺在培养皿中。分离收集脑微血管段,接种于铺有鼠尾胶的培养皿中进行培养。用内皮细胞的两种重要标记物VIII因子相关抗原和γ-谷氨酰转酞酶(-γglutamyl-transpeptidase,γ-GT)鉴定细胞,并以3H-TdR掺入法观察培养细胞对血清刺激的增殖反应性。结果:显微镜观察从脑微血管段生长出的细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征和接触生长抑制;VIII因子免疫组织化学染色呈阳性;培养上清含有大量的γ-谷氨酰转酞酶[(5.01±0.07)IU/L];证实鼠尾胶做为贴黏剂获得的是内皮细胞。10%胎牛血清刺激后3H-TdR掺入率较对照组增加87.5%(P<0.05)。结论:本研究用鼠尾胶做为贴黏剂,降低微血管内皮细胞培养成本,且细胞生长状态良好,表明该方法是一种比较经济可靠的微血管内皮细胞培养体系。
- 蔡莉蓉李玉珍刘秀华
- 关键词：毛细血管细胞培养
- 串珠素对大鼠平滑肌细胞增殖的影响及其机制的研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察串珠素对于大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖反应的影响以及细胞信号转导机制。方法以3H-TdR掺入法测定VSMCs增殖,Westernblot方法检测FAK表达。结果Perlecan加强碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)引起的VSMCs增殖反应,并诱导粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)表达上调。Perlecan抗体消除Perle-can促进bFGF致VSMCs增殖反应,并抑制FAK表达。结论串珠素增强bFGF致大鼠平滑肌细胞的增殖反应,其机制涉及FAK表达上调。
- 付艳刘秀华蔡莉蓉
- 关键词：串珠素血管平滑肌细胞增殖粘着斑激酶
