浙江省医药卫生科学研究基金(2007B225)
- 作品数：4 被引量：21H指数：2
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- 运用蛋白指纹图谱技术筛选类风湿关节炎患者血清特异性标志物被引量：2
- 2010年
- 目的:用纳米磁珠与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测类风湿关节炎(RA)患者血清蛋白质组,筛选候选蛋白标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在RA早期诊断中的临床意义。方法:采用弱阳离子(WCX)纳米磁性微球捕获60例RA患者、35例骨性关节炎(OA)患者和36名健康体检者血清中的蛋白质。所获蛋白经PBSⅡ-C蛋白质芯片阅读仪绘制蛋白指纹图谱。这些蛋白指纹图谱经Ciphergen ProteinChip和Biomarker Wizard软件分析之后,再用Biomarker Patterns软件进行识别,最终筛选出RA的特异性蛋白标志物,并优化组合建立诊断模型。结果:在RA患者和对照组之间共找到33个差异蛋白峰(P<0.05)。其中质荷比(m/z)为15715.5D、7771.4D、8959.4D、8469.8D和8710.8D的蛋白峰用于建立RA诊断模型。经双盲实验验证,该模型对RA诊断的敏感性为86.7%,特异性为90.0%。结论:采用WCX纳米磁性微球联用MALDI-TOF-MS技术可检出RA患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的RA诊断模型。
- 张晓雪袁兆林朱敏刘池波沈波徐巍梁勇王海宝
- 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
- RA患者外周血CD8^+CD28^-和CD4^+CD25^+调节性T细胞的表达及疾病活动性指标相关性分析被引量：8
- 2010年
- 目的:检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血CD8+CD28-、CD4+CD25+调节性T细胞亚群,探讨其与临床活动性指标的关系。方法:采用流式细胞术检测台州医院RA患者外周血CD8+CD28-、CD4+CD25+ T细胞亚群比例,探讨调节性T细胞与RA活动性、类风湿因子(RF)、免疫球蛋白(Ig)、C反应蛋白(CRP)、补体C3、抗CCP抗体、抗核抗体(ANA)、血小板(PLT)及血沉(ESR)的关系。结果:活动期RA患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例显著低于正常对照组(P<0.01),但稳定期RA患者与正常对照组结果差异无统计学意义(P>0.05)。活动期和稳定期RA患者CD8+CD28-与正常对照组相比较,结果无统计学意义(P>0.05);CD4+CD25+与CRP密切相关(r=-0.593,P<0.05),CD8+CD28-与ESR相关系数呈弱相关。CD4+CD25+和CD8+CD28-细胞与RF、IGG、C3、ANA、anti-CCP和PLT未见明显相关性。结论:活动期RA患者外周血CD4+CD25+ T细胞亚群比例减少,CD4+CD25+ T细胞可能与类风湿性关节炎疾病进展有关。
- 徐巍沈波陈葆国陈世勇李俊
- 关键词：类风湿性关节炎CD4+CD25+T细胞
- 人聚角微丝蛋白基因克隆表达及其抗体在类风湿关节炎诊断中的价值被引量：1
- 2010年
- 目的通过克隆人聚角微丝蛋白（filaggrin）基因，构建重组表达质粒，获得具活性的纯化重组蛋白，建立人AFA间接ELISA检测法，以评价AFA在RA诊断中的价值。方法构建重组表达载体，在大肠杆菌Rosetta—gami（DE3）中表达；融合蛋白经Ni—NAT树脂柱进行亲和层析纯化，建立间接ELISA检测AFA方法，并用于检测114例RA患者、56例SLE患者、32例OA患者及40名健康体检者血清中抗人AFA；分析AFA和抗CCP抗体诊断RA的相关性。结果扩增出321bp人filaggrin基因片段，构建了具有正确序列的质粒载体pET-28a（＋）-filaggrin，转化大肠杆菌Rosetta—gami（DE3）中经诱导产生高水平的表达产物。经SDS—PAGE分析，在相对分子质量为14000处出现新生蛋白带。用Ni—NAT树脂纯化后得到具有活性的纯化人filaggrin重组蛋白。间接ELISA检测标本血清结果显示，RA组AFA检测吸光度（A）值为0．473±0．248，与SLE组、OA组及健康对照组的A值（分别为0．160±0．088、0．050±0．018、0．121±0．040）两两组间比较，差异具有统计学意义（t值分别为12．004、14．464、18．078，P均〈0．01）。AFA在RA组、SLE组及OA组阳性率分别为48．2％、5．4％和3．1％。RA组AFA阳性率与SLE组、OA组及健康对照组比较，差异有统计学意义（χ^2=67．088，P〈0．01）。AFA与抗CCP抗体对RA的诊断呈正相关（r=0．42，P〈0．05）。AFA与抗CCP阳性一致率为70．1％，114例患者中有10例患者抗体CCP阴性，而AFA检测结果为阳性。AFA对RA诊断的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为48．2％、96．9％、93．2％和67．9％。结论用纯化filaggrin融合蛋白建立的间接ELISA检测抗人AFA的方法，对RA诊断具有较好敏感度和特异度，AFA与抗CCP抗体共同检测可提高检测阳性率。
- 沈波徐巍李俊张晓雪袁兆林傅鹰朱敏孟哲峰
- 关键词：中间丝蛋白质类酶联免疫吸附测定
- 抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体与类风湿关节炎病情活动度及关节损害的关系探讨被引量：10
- 2010年
- 目的:分析抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断和评估意义,探讨抗CCP抗体与RA的病情活动度、关节侵蚀的关系。方法:用ELISA检测32例RA患者血清和关节液中的抗CCP抗体,并测定类湿因子(RF),记录RA患者的一些临床参数。对检测结果及临床参数进行统计分析。结果:抗CCP抗体阳性组与阴性组相比,年龄、关节肿胀个数、关节疼痛个数、DAS28、血沉及CRP等没有显著性差异(P>0.05);类风湿因子的阳性率在两组间的差异有统计学意义(P<0.05)。抗CCP抗体与年龄、关节肿胀个数、关节疼痛个数、DAS28、ESR和CRP等相关无显著性差异;抗CCP抗体与RF因子呈明显相关(r=0.639,P=0.001)。DAS28评分与关节肿胀个数、关节疼痛个数、DAS28、ESR和CRP显著相关,与年龄因素呈正相关,与类风湿因子的相关无统计学意义。结论:抗CCP抗体对RA的预后有一定的评估作用。
- 徐巍沈波陈世勇李俊袁兆林张晓雪
- 关键词：抗环瓜氨酸肽抗体类风湿关节炎
