国家自然科学基金(30370552)
- 作品数：15 被引量：55H指数：4
- 相关作者：卞修武王清良徐承平陈飞兰张华蓉更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学首都医科大学附属北京天坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 人脐静脉血内皮祖细胞的分离、扩增和生物学特征被引量：2
- 2008年
- 目的:探索人脐静脉血内皮祖细胞的分离和扩增条件,并观测其生物学特性。方法:采集人脐静脉血,应用密度梯度离心法,分离其中单个核细胞,流式细胞术检测CD133+CD34+阳性率;利用差速贴壁法(48h内贴壁和48h后贴壁)联合内皮细胞专用培养基EGM-2培养细胞,接种于预先包埋了明胶培养瓶或培养板,倒置显微镜观察细胞生长形态和形成集落能力,免疫细胞化学法检测其免疫表型,摄取Ac-LDL和连接UEA-1功能,在生长因子培养体系中诱导其向成熟内皮细胞分化。结果:所获单个核细胞中CD133+CD34+百分比为1.06%;在EGM-2培养体系下可获得2种亚型的内皮祖细胞,即早期内皮祖细胞和晚期增殖性内皮祖细胞。其中48h后贴壁细胞属于早期内皮祖细胞,增殖能力较弱,免疫荧光检测,显示CD14和CD34KDR胞浆呈阳性表达,Ac-LDL+UEA-1+功能特征;而48h内贴壁细胞在10～17d时可见由单个细胞增殖形成的克隆,呈铺路石样单层排列,增殖力旺盛形成融合状态,形成次集集落;经免疫荧光检测,显示CD133CD34和CD34KDR细胞质呈阳性表达,Ac-LDL+UEA-1+功能特征,传代后vWF,CD31呈强阳性表达,是晚期增殖性内皮祖细胞。结论:经人脐静脉血可分离培养获得2种亚型的内皮祖细胞,在特定的培养体系中细胞可由祖细胞表型向成熟内皮细胞分化。
- 陈飞兰张华蓉徐承平卞修武
- 关键词：内皮祖细胞CD34CD133KDRCD14
- 诺帝对人恶性胶质瘤裸鼠原位移植瘤FPR、VEGF表达的影响及意义被引量：4
- 2007年
- 目的观察诺帝对人恶性胶质瘤裸鼠原位移植瘤甲酰化肽受体(FPR)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其在抗胶质瘤血管生成的治疗意义。方法脑立体定向注射技术复制人U87胶质母细胞瘤裸鼠脑原位移植瘤模型,接种7d后,随机分为空白对照组,生理盐水对照组和诺帝治疗组,诺帝治疗组按27mg/kg行腹腔注射进行治疗。观察处理前后动物生存、移植瘤生长状态以及移植瘤组织病理学形态变化,分别采用间接免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜技术、免疫组织化学技术观测FPR、VEGF的表达变化。结果空白对照组和生理盐水组、诺帝治疗组肿瘤体积分别为(1.040±0.263)mm3、(0.880±0.212)mm3和(0.195±0.054)mm3,治疗组较对照组明显缩小,抑瘤率为81.25%。三组FPR表达分别为(57.473±3.072)、(54.332±1.298)和(40.499±2.216),三组VEGF定量测定的积分光密度值(IOD)表达分别为(154.763±4.635)、(149.139±1.494)和(133.784±5.143),治疗组FPR、VEGF蛋白表达显著减弱(P<0.05)。结论诺帝能降低FPR和VEGF表达了可能是抗胶质瘤血管生成作用的重要分子机制之一。
- 刘宏卞修武陈代伦赵雯陈剑鸿冯玉慧徐承平
- 关键词：血管内皮生长因子类肿瘤移植
- 计算机辅助的人脑间变性星形细胞瘤微血管构筑三维重建被引量：5
- 2006年
- 目的观测恶性胶质瘤微血管三维构筑的形态学特征。方法采用人脑间变性星形细胞瘤组织连续切片,进行免疫组织化学标记微血管内皮细胞,利用计算机辅助的图片处理和三维重建技术进行微血管构筑的三维重建。结果成功构建了星形胶质细胞瘤部分微血管的三维结构。胶质瘤微血管与正常脑微血管迥然不同,其分布、分枝和走行怪异,在三维构筑上有其自身的特点,不完全遵从由大到小的分级规律,而且某段可向外呈盲管状膨出,部分血管为两端均不通的盲管。结论恶性星形细胞肿瘤的微血管不仅丰富,而且具有形态结构的多样性和异质性。这一特点对于认识恶性肿瘤血管生成三维结构特性、构建数字化肿瘤微血管模型及其在抗血管生成治疗上可能有重要意义。
- 王清良卞修武蒋雪峰张绍祥
- 关键词：胶质瘤血管生成微血管构筑三维重建
- 人脑星形细胞肿瘤IL-8的表达及其与血管生成的关系被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨IL-8,VEGF在脑胶质瘤中的表达及与血管生成的关系。方法:应用由45例人脑星形细胞肿瘤和6例正常脑组织组成的组织芯片,采用免疫组织化学技术分别进行IL-8,VEGF,CD34标记并进行半定量,观测在不同病理分级胶质瘤中的表达及与微血管密度(MVD)之间的关系。结果:6例正常脑组织中不表达IL-8,VEGF。45例脑胶质瘤中,27例IL-8呈阳性表达,32例VEGF呈阳性表达,Ⅲ,Ⅳ级脑胶质瘤中IL-8,VEGF的表达比Ⅰ级、Ⅱ级明显增强,IL-8,VEGF评分为强阳性的胶质瘤内MVD明显高于评分为阴性和阳性的MVD(P<0.01)。IL-8表达与MVD呈正相关(rs=0.64,P<0.01)。VEGF表达与MVD之间呈正相关(rs=0.44,P<0.01)。IL-8表达与VEGF表达之间亦呈正相关(rs=0.56,P<0.01)。结论:IL-8,VEGF的表达与胶质瘤病理分级、MVD密切相关,二者在胶质瘤的血管生成中可能相互关联、共同调节肿瘤血管生成。
- 吴娜王清良卞修武
- 关键词：脑胶质瘤白细胞介素-8血管生成组织芯片
- 人脐血源性内皮祖细胞血管发生活性及其参与人恶性胶质瘤细胞异种移植瘤血管新生的作用被引量：2
- 2008年
- 目的观察人脐血源性内皮祖细胞（EPC）血管发生能力和在恶性胶质瘤血管新生过程中的作用。方法应用密度梯度离心法分离新鲜人脐血的单个核细胞，接种于EGM-2培养液中培养获得EPC。取生长到第7～10天的细胞进行CD34和VEGFR-2免疫荧光双标染色。检测血管内皮生长因子（VEGF）刺激下EPC增殖活性、迁移能力和体外形成小管样结构的能力。采用人恶性胶质瘤细胞系U87在免疫缺陷小鼠进行皮下移植，于接种肿瘤后第7天经尾静脉注射EPC（每只5×10^5），并于接种肿瘤后第28天取材检测肿瘤微血管和EPC组织分布及定位，采用抗人CD31和抗鼠CD31免疫荧光双标记肿瘤微血管，计算人源性EPC来源的血管占肿瘤血管网的比例。结果培养的细胞在第7～10天时可见条索样结构，生长并逐渐融合形成铺路石样排列的单层细胞，表达内皮细胞标记物CD34和VEGFR-2。在VEGF刺激下EPC具有较强的增殖活性、迁移能力和体外形成小管样结构的能力。外源性EPC能特异性归巢到异种移植瘤组织并形成新生血管，占肿瘤血管网的（18．68±1．32）％。结论EPC在体内外具有形成血管能力，并参与异种移植瘤血管新生，提示其在恶性肿瘤血管新生过程中具有重要作用，并可能参与肿瘤微血管构筑表型异质性。
- 张华蓉陈飞兰徐承平卞修武
- 关键词：肿瘤移植
- 内皮祖细胞在胶质瘤新生血管中的募集和整合作用被引量：4
- 2008年
- 目的探讨内皮祖细胞(EPCs)在胶质瘤血管新生化过程中的作用。方法采用密度梯度离心法分离人脐血EPCs。应用人脑胶质瘤细胞系U87细胞建立原位移植动物模型,于瘤细胞接种后第7天将EPCs经尾静脉注入荷瘤鼠,并分别于尾静脉注射后7、14、21d观察EPCs植入后在移植瘤血管新生过程中的募集、整合作用以及对肿瘤生长的影响。结果胶质瘤原位移植模型成瘤率为100%。在EPCs植入后14、21d被募集和整合到肿瘤血管中的EPCs数量显著多于第7天(P<0.05),肿瘤微血管密度和移植瘤体积也显著高于对照组(P<0.05)。结论人脐血EPCs能够被募集并整合到肿瘤血管中促进胶质瘤生长,提示其在胶质瘤血管新生化过程中可能具有重要作用。
- 徐承平张华蓉陈飞兰章容卞修武
- 关键词：内皮祖细胞胶质瘤肿瘤移植
- 恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体表达及其活化后促瘤细胞增殖和血管生成因子产生的作用被引量：1
- 2007年
- 背景与目的:趋化因子受体在多种病理过程中发挥重要作用,通过促进肿瘤细胞增殖、迁移或血管生成过程,进而在肿瘤发生、演进和转移中发挥极为重要的作用。本研究拟探讨甲酰化肽受体(formylpeptide receptor,FPR)在人恶性胶质瘤细胞中的表达和激活后的功能活性。方法:以人恶性胶质瘤细胞U87和FPR-siRNA-U87细胞为研究对象,采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测人恶性胶质瘤细胞FPR的表达和定位;用FPR配体甲酰-甲硫酰-亮氨酰-苯丙氨酰胺(formy-Met-Leu-Phe,fMLF)激活FPR后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双抗夹心酶联免疫(ELISA)吸附法检测细胞分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)水平,RT-PCR法检测细胞IL-8mRNA的水平。结果:恶性胶质瘤细胞U87有FPR表达,定位于细胞膜,FPR-siRNA-U87细胞不表达FPR;FPR激动剂fMLF对人恶性胶质瘤细胞具有明显的促增殖作用,U87细胞fMLF刺激组A值较对照组显著升高(P<0.05),FPR-siRNA-U87细胞fMLF刺激组A值与对照组相比无显著性差异(P>0.05);fMLF作为FPR的激动剂,在12h、24h、36h和48h等各时相点U87细胞的VEGF和IL-8蛋白水平均显著增加,以处理36h为观察时间点,U87细胞VEGF蛋白水平[(3.13±0.23)ng/ml]较对照组显著增加(P<0.05),IL-8蛋白分泌量为(7.54±0.53)ng/ml,较对照组显著增加(P<0.05);FPR-siRNA-U87细胞VEGF和IL-8蛋白分泌量分别为(1.26±0.05)ng/ml和(1.54±0.05)ng/ml,较对照组无明显改变(P>0.05);fMLF能显著上调U87细胞IL-8mRNA的表达,较对照组显著升高(P<0.05),FPR-siRNA-U87细胞IL-8mRNA水平与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:人恶性胶质瘤细胞膜存在功能性FPR受体,其活化后具有促瘤细胞增殖和分泌血管生成因子的作用。
- 姚小红卞修武平轶芳陈剑鸿王清良蒋雪峰
- 关键词：脑肿瘤胶质瘤血管生成因子细胞增殖白细胞介素8
- 诺帝对人恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体表达及其活化后促增殖和血管生成因子产生的影响被引量：2
- 2007年
- 目的观测自行研制的脂氧化酶抑制剂诺帝(Nordy)对人恶性胶质瘤细胞系 U87中甲酰化肽受体(FPR)的表达和激活后功能活性的影响。方法采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测诺帝对 U87系人恶性胶质瘤细胞 FPR 表达的影响;FPR 激动剂 N-甲酰化的甲硫酰-亮氨酸-苯丙氨酰胺(fMLF)激活 FPR 后加入诺帝,实验分为以下3组:①对照组,②fMLF 刺激组,③诺帝处理组,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTY)法、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测诺帝对 FPR 活化后引起的细胞增殖及细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素8(IL-8)的作用。结果诺帝(100 μmol/L)明显抑制 U87细胞 FPR 受体的表达,同时对FPR 激动剂 fMLF(100 nmol/L)诱导的 U87细胞增殖和血管生成因子 VEGF、IL-8 mRNA 表达和蛋白的分泌具有明显的抑制作用。对照组 U87细胞分泌一定量的 VEGF 和 IL-8,分别为(4.14±0.28)ng/ml 和(4.03±0.59)ng/ml;fMLF 作用于 U87细胞36 h 后,VEGF 和 IL-8蛋白水平均显著高于对照组(P<0.05),分别为(6.46±0.33)ng/ml 和(7.54±0.73)ng/ml;诺帝作用于 U87细胞12 h后加入 fMLF 共同处理36 h 后,VEGF 和 IL-8蛋白水平分别为(3.59±0.33)ng/ml 和(3.13±0.48)ng/ml,均显著低于对照组(P<0.05)。结论诺帝对人恶性胶质瘤细胞的 FPR 表达和该受体活化后的促瘤细胞增殖及促血管生成因子 VEGF、IL-8 mRNA 表达和蛋白的分泌具有抑制作用,提示诺帝具有抑制肿瘤生长和抗血管生成的作用。
- 姚小红平轶芳卞修武陈剑鸿王清良蒋雪峰
- 关键词：神经胶质瘤白细胞介素8内皮生长因子
- SDF-1/CXCR4轴活化诱导人内皮祖细胞增殖、迁移及管型形成被引量：15
- 2008年
- 目的观察趋化因子SDF-1促内皮祖细胞增殖、迁移和管型形成的作用。方法用免疫细胞化学检测内皮祖细胞SDF-1和CXCR4表达;用MTT法、Millicell趋化法及Matrigel体外三维成型法分别检测不同浓度的趋化因子SDF-1促内皮祖细胞增殖、迁移和管型形成。并应用CXCR4受体抑制剂AMD3100观察上述指标的变化。结果免疫细胞化学显示内皮祖细胞表达SDF-1和CXCR4蛋白。SDF-1可促进内皮祖细胞的增殖、迁移和体外小管样结构的形成。AMD3100可抑制SDF-1的诱导作用。结论SDF-1/CXCR4轴在内皮祖细胞参与血管新生中可能发挥重要作用。
- 陈飞兰张华蓉徐承平卞修武
- 关键词：内皮祖细胞趋化因子SDF-1
- 诺帝对人恶性胶质瘤细胞U87甲酰化肽受体功能的影响被引量：2
- 2007年
- 探讨手性化合物诺帝对人恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体（formylpeptide receptor，FPR）功能的影响及其意义。以培养的人恶性胶质瘤细胞U87为研究对象，用FPR激动剂fMLF（N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine）刺激细胞，以双室跨膜迁移模型检测细胞的迁移能力、计数法测定细胞的增殖能力、分光光度法测定细胞内钙流、RT-PCR方法测定血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）mRNA表达，以ELISA方法检测VEGF蛋白水平，并测定诺帝（25—100μmol·L^-1）处理瘤细胞后上述功能指标的变化。50μmol·L^-1诺帝能有效抑制fMLF诱导的细胞增殖、迁移（P〈0．05）和细胞内钙流，100μmol·L^-1诺帝能抑制VEGFmRNA表达，降低VEGF水平（P〈0．05）。诺帝能抑制FPR介导的人恶性胶质瘤细胞增殖、迁移和VEGF产生，提示其具有抗肿瘤活性。
- 陈剑鸿卞修武姚小红杨世昕徐长荣周向东平轶芳
- 关键词：诺帝神经胶质瘤血管内皮生长因子
