浙江省重大科技专项基金(2006C12102)
- 作品数：11 被引量：49H指数：5
- 相关作者：张明洲李沐洁奚茜王唯芬陈宗伦更多>>
- 相关机构：中国计量学院杭州迪恩科技有限公司更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金杭州市重大科技创新项目国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成与鉴定被引量：3
- 2009年
- 采用重氮化法将磺胺二甲嘧啶(SM2)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)交联合成人工抗原SM2-BSA与SM2-OVA,并通过紫外扫描、SDS-PAGE电泳、凝胶层析和红外光谱等方法扫描进一步检测合成效果.紫外扫描检测结果显示,SM2与BSA、OVA偶联成功,SM2-BSA与SM2-OVA的特征波长分别为2762、77 nm;经计算SM2-BSA与SM2-OVA的分子结合比例分别为5.3∶1和18.4∶1;SDS-PAGE电泳迁移率、凝胶层析出峰时间和红外光谱曲线特征均显示SM2与BSA、OVA偶联成功.
- 张明洲胡华军华加宁方结红陈宗伦俞晓平
- 关键词：磺胺二甲嘧啶人工抗原重氮化牛血清白蛋白
- 赭曲霉毒素A直接竞争ELISA试剂盒的研制被引量：6
- 2012年
- 在多克隆抗体的基础上研制了赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫检测(cd-ELISA)试剂盒。在0～10 ng/mL范围内,该试剂盒50%抑制率(IC50)为1.09 ng/mL,检测灵敏度(IC15)为0.08 ng/mL;与赭曲霉毒素B、C的交叉反应率分别为6.28%和0.16%,而与黄曲霉毒素B1等生物毒素未见有交叉反应;板内与板间平均变异系数分别为2.21%和2.79%;花生、玉米和玉米粉3种样品中OTA的检测低限分别为1.71,1.26和1.85μg/kg,平均添加回收率在83.80%～91.40%;与HPLC检测方法具有较高的相关性,相关系数(R2)分别为0.940、.88和0.90;检测时间只需20 min,可用于花生、玉米及玉米粉中OTA的批量快速筛查。
- 李沐洁奚茜张明洲陈宗伦王唯芬
- 关键词：赭曲霉毒素A多克隆抗体
- 磺胺二甲嘧啶快速直接竞争ELISA试剂盒的研制及应用被引量：2
- 2011年
- 在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶(SMZ)残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒,并与高效液相色谱(HPLC)分析方法比较和验证。将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中,用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的磺胺二甲嘧啶残留,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。研究结果表明,磺胺二甲嘧啶浓度在0.5～50ng.mL-1,方法的检测灵敏度IC10=0.47ng.mL-1,板内平均变异系数为7.4%,板间平均变异系数为9.27%。猪肝、猪肉与鸡肉组织样品中SMZ最低检测限分别为3.91、4.81与1.59μg.kg-1。在添加10.0～50.0μg.kg-1时,平均回收率在85%～110%。试剂盒的检测时间为12.6min,在4℃至少可以保存6个月。研制的试剂盒可以满足猪肝、猪肉和鸡肉中磺胺二甲嘧啶残留的现场快速检测。
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦李沐洁奚茜
- 关键词：磺胺二甲嘧啶ELISA试剂盒猪肝猪肉鸡肉
- 玉米赤霉烯酮单克隆抗体制备及免疫分析被引量：3
- 2013年
- 采用活泼酯法将玉米赤霉烯酮（Zaralenone，ZEN）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成免疫原ZEN—BSA和包被原ZEN—OVA，经紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后免疫BALB/c小鼠；挑选产生高效价和高敏感性抗体的小鼠进行抗原超强免疫．取脾细胞与SP2／0细胞融合获得1株稳定分泌抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞（3D8）。经鉴定，该抗体亚类为IgG1，轻链为k型。经体内诱生腹水并纯化获得效价为l：2．048x106的单克隆抗体。建立了基于单克隆抗体的ZEN间接竞争ELISA法（ic—ELISA），该方法ic50和检出限分别为22．89pg／mL和10．07pg/mL。与a-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇的交叉反应率分别为95％、8％、12％、6％和5％，而与黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、伏马毒素B1和赭曲霉毒素A未见有交叉反应。在玉米、大麦、小麦和燕麦中加标的回收率在86．4％～104．8％之间。该方法灵敏特异。可作为快速检测谷物中玉米赤霉烯酮的初筛方法。
- 李沐洁张明洲奚茜陈宗伦王唯芬龚云飞
- 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体间接竞争ELISA
- 禽类食品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 试验采用高碘酸钠法合成了磺胺二甲嘧啶的人工SMZ-BSA和SMZ-OVA,紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定证明抗原耦联成功。在此基础上,建立间接竞争ELISA法,将磺胺二甲嘧啶添加到鸡蛋和鸡肉样品中,分别用ELISA和高效液相色谱（HPLC）分析方法检测。结果表明,在0.1~50 ng/mL浓度范围内,方法的检测灵敏度IC10=0.18 ng/mL。鸡蛋实际样品的检出限可达到2.0 ng/g,鸡肉实际样品检出限可达到5.0 ng/g。研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有较高的相符性,可用于鸡蛋与鸡肉样品中磺胺二甲嘧啶残留含量分析的大量样品的筛查。
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦奚茜李沐洁
- 关键词：ELISA鸡蛋鸡肉
- 链霉素残留检测直接竞争ELISA法的建立被引量：8
- 2013年
- 目的：在多克隆抗体的基础上研制1种用于检测牛奶、蜂蜜中链霉素残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法：以兔抗链霉素多抗为包被原,以链霉素-辣根过氧化物连接物为标记物,TMB为显色底物,建立了1种链霉素残留量检测的竞争性直接酶联免疫快速检测方法,并与高效液相色谱（HPLC）分析方法比较和验证。结果：用该检测方法分别检测牛奶、蜂蜜中的链霉素残留情况。结果表明,在0.5~40.5 ng/mL的浓度范围内标准曲线方程为y=-0.4341x＋1.1786（r=0.9708）,半抑制率IC50为3.60 ng/mL,最低检测限IC10为0.43 ng/mL,平均批内与批间变异系数分别为5.78%与8.11%。在牛奶、蜂蜜样品中的检测限分别为2.7 ng/mL、2.8 ng/mL。在添加10.0~400.0 ng/mL范围内,平均回收率在97%~107%。除双氢链霉素外,与其他抗生素药物均无交叉反应。牛奶、蜂蜜样品采用ELISA和HPLC 2种检测方法的相关系数分别为0.99和0.97,说明本研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有很好的相符性。结论：直接竞争ELISA法可以满足牛奶、蜂蜜中链霉素残留的检测要求。
- 奚茜张明洲李沐洁龚云飞王旻子陈宗伦王唯芬
- 关键词：链霉素
- 三聚氰胺人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2011年
- 采用戊二醛法将三聚氰胺(Melamine,MEL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白(MEL-BSA).三聚氰胺甲醛树脂法对三聚氰胺衍生化,再偶联到鸡卵清蛋白(OVA)合成包被原三聚氰胺-鸡卵清蛋白(MEL-OVA).对纯化后的合成抗原进行紫外扫描、红外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定.免疫新西兰大白兔,检测抗体的生成.结果表明,免疫兔血清的效价达到了1∶20 000,从而为进一步建立三聚氰胺的免疫检测方法奠定了基础.
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦彭雪李沐洁奚茜
- 关键词：三聚氰胺人工抗原多克隆抗体
- 食品中苏丹红HPLC检测方法研究被引量：3
- 2009年
- [目的]建立食品中简便、易行检测苏丹红Ⅰ～Ⅳ的高效液相色谱方法。[方法]采用液相萃取样品处理,C18色谱柱,流动相A为1%冰醋酸的水溶液,流动相B为1%冰醋酸、20%丙酮的乙腈溶液,梯度洗脱,检测波长478 nm,对辣椒食品中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ号进行了分离和检测。[结果]苏丹红Ⅰ～Ⅳ的标准曲线呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 9、0.996 6、0.997 4、0.993 7,精密度相对标准偏差分别为4.25%、5.34%、1.99%、7.56%;辣椒粉样品中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ号的加样回收率分别为89.87%、90.90%、87.55%、81.07%;辣椒油样品中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ号的加样回收率分别为94.83%、91.99%、88.83%和86.86%;苏丹红Ⅰ～Ⅳ号的最低检测限分别为5.02、2.46、2.30、5.02μg/kg。[结论]该方法样品处理简单、快速,灵敏度、精密度符合要求,可在基层实验室推广应用。
- 张明洲傅小伟刘炼俞晓平
- 关键词：苏丹红高效液相色谱食品
- 苏丹红Ⅰ直接竞争ELISA检测试剂盒的研制被引量：10
- 2010年
- 直接包被多克隆抗体建立了苏丹红ⅠELISA检测技术,研制苏丹红ⅠELISA检测试剂盒。结果表明,制备的多克隆抗体对苏丹红Ⅰ亲合力强、特异性高,试剂盒标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1.55～100μg/L,50%抑制率(IC50)为13.52μg/L,灵敏度(IC10)为1.95μg/L,平均批内与批间变异系数分别为7.6%与10.6%,与苏丹红Ⅱ、Ⅲ的交叉反应率分别为4.40%和1.70%,与苏丹红Ⅳ及其他违禁食品染色剂交叉反应率低于0.01%;干辣椒、辣椒粉、辣椒油与辣椒酱等4种样品的苏丹红平均添加回收率分别为88.1%、91.4%、78.2%和84.3%,最低检测限分别为1.82、1.71、2.19和2.12μg/kg;与HPLC检测方法具有较高的相符性,4种样品相关系数分别为0.95,0.94,0.86和0.87;该试剂盒在4℃下至少可保存180d,可用于辣椒及其制品中苏丹红Ⅰ的批量快速低成本筛查。
- 张明洲方结红陈宗伦胡华军杨岭刘军俞晓平
- 关键词：多克隆抗体快速检测试剂盒
- 苏丹红Ⅰ号多克隆抗体的制备与特异性鉴定被引量：6
- 2008年
- 采用琥珀酸酐法,分别以BSA、OVA为载体蛋白合成了免疫抗原和包被抗原并通过SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描法鉴定了合成的抗原为载体蛋白和苏丹红I号的复合物.将合成的免疫抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体,经辛酸纯化,间接ELISA法测得有高效价血清抗体;进一步采用琼脂双扩散试验和免疫金试纸法鉴定出血清中含有苏丹红Ⅰ号特异性抗体.
- 张明洲胡华军杨岭傅小伟刘军
- 关键词：人工抗原多克隆抗体
