中国博士后科学基金(2004036300)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：赵勇李景鹏靳迪饶恩于马晓杰更多>>
- 相关机构：东北农业大学中国科学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金中国科学院知识创新工程国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠OCILrP2基因的克隆、原核表达及抗血清的制备被引量：3
- 2007年
- 目的:在原核系统中表达破骨细胞抑制凝集素家族成员之一OCILrP2基因,并制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。方法:应用RT-PCR从小鼠脾细胞中克隆的部分OCILrP2cDNA,构建重组表达载体pET-28a-OCILrP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达His-OCILrP2融合蛋白。以表达产物免疫SD大鼠,制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。采用Westernblot测定其效价和特异性。结果:RT-PCR法扩增出235bp的OCILrP2基因,其cDNA序列与GenBank中登录的序列一致。以构建的重组质粒pET-28a-OCILrP2转化大肠杆菌获得目的蛋白的高表达。以表达的His-OCILrP2融合蛋白免疫大鼠获得抗小鼠OCILrP2的抗血清。Westernblot分析表明,该抗血清均可与原核表达的His-OCILrP2融合蛋白和真核表达的OCILrP2-Ig融合蛋白特异性结合;抗血清的效价为1∶2000。结论:在原核细胞中表达了小鼠的OCILrP2蛋白,制备了大鼠抗小鼠OCILrP2的抗血清,为进一步研究OCIL-rP2的生物学功能奠定了基础。
- 靳迪饶恩于李景鹏赵勇
- 关键词：原核表达
- 转录因子Foxo3a高表达对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞周期和凋亡的影响
- 2006年
- 为了研究转录因子Foxo3a高表达对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞周期和凋亡的影响,采用电穿孔法将真核表达载体pEGFP-N1/Foxo3a转染小鼠T淋巴瘤细胞系EL-4细胞,并通过聚合酶链式反应和免疫印迹法分别检测Foxo3a mRNA及蛋白表达。转录因子Foxo3a高表达后,采用细胞计数法绘制其细胞生长曲线;采用荧光显微镜法及流式细胞仪定性和定量观察典型EL-4细胞凋亡形态特征、细胞凋亡百分率及细胞周期变化情况。结果表明,转录因子Foxo3a真核表达质粒pEGFP-N1/Foxo3a经酶切鉴定及测序检测序列正确。转染pEGFP-N1/Foxo3a的小鼠EL-4细胞表达Foxo3a mRNA和蛋白水平显著升高。Foxo3a高表达明显抑制EL-4细胞的增殖能力,并使EL-4细胞发生明显G2期阻滞(P<0.001)。Foxo3a基因高表达后,荧光显微镜可以观察到典型凋亡的细胞形态。同时,EL-4细胞凋亡百分率显著升高(P<0.01)。结果提示,Foxo3a高表达可以有效抑制小鼠T淋巴瘤细胞体外细胞增殖,使细胞周期G2时相阻滞,并具有诱导细胞凋亡的作用。
- 马晓杰刘光伟王娜崔旻李景鹏赵勇
- 关键词：FOXO3AEL-4细胞基因高表达细胞周期
