浙江省自然科学基金(Y-204317)
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 相关作者：马志原董爱强孔敏坚钱建芳范军强更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院上海市第一人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰沉默IGF-Ⅰ R表达对非小细胞肺癌细胞生物学特性及化疗敏感性的影响被引量：7
- 2008年
- 目的:评价RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子类受体(IGF-Ⅰ R)表达的阻断效应,和IGF-Ⅰ R基因沉默后细胞增殖、凋亡等生物学特性及肿瘤细胞对化疗药物敏感性的改变。方法:应用U6启动子,介导DNA模板转录生成短发夹样RNA(shRNA),并转染人肺癌A549细胞株,从而产生IGF-Ⅰ R特异性小干扰RNA(siRNA),经RT-PCR和Western blot检测IGF-Ⅰ R表达的改变;联合应用化疗药物顺铂(DDP),通过MTT法和流式细胞技术等,观察细胞生长、细胞周期、细胞凋亡及DDP半数致死量(IC50)的变化。结果:IGF-Ⅰ R表达水平明显下降(抑制率高达89.8%),肿瘤细胞增殖能力明显减弱,细胞滞留于G0期的比例上升;DDP对肿瘤细胞24h、48h、72h的IC50均明显减少,IGF-Ⅰ R siRNA1组DDP作用72h的IC50为0.92 mg/L,明显低于control-siRNA组的3.77mg/L,0.5mg/L DDP联合IGF-Ⅰ R siRNA1作用48h后,A549细胞的生长抑制率达32.1%,明显高于control-siRNA组的18.9%,细胞凋亡率从27.8%上升至44.2%。结论:运用RNAi技术能有效抑制A549细胞IGF-Ⅰ R的表达,使细胞增殖能力减弱,化疗敏感性增加。
- 孔敏坚董爱强马志原程海峰钱建芳范军强
- 关键词：RNA干扰化疗敏感性
- 靶向IGF-1R的siRNA表达载体的构建及其对肺癌细胞的促凋亡作用被引量：1
- 2007年
- 目的构建 IGF-1R 的 siRNA 表达载体,并观察其在人肺腺癌 A549中对 IGF-1R 表达抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法设计并构建了 pENTR/U6-shRNA-1和 pENTR/U6-shRNA-2,同时设计并构建了 pENTR/U6-shRNA-luc 作为对照,转染 A549细胞,48h 后检测 IGF-1R 表达及分析细胞凋亡情况。结果相对于对照组,pENTR/U6-shRNA-1和 pENTR/U6-shRNA-2转染组 IGF-IR mRNA 的表达量分别为(22.1±2.5)%和(80.1±3.9)%,蛋白的表达分别为(15.2±3.1)%和(47.1±4.1)%,组问差异具有统计学意义(P<0.05)。pENTR/U6-shRNA-1转染组抑制了 Akt 的磷酸化,增加了3%乙醇诱导的细胞凋亡作用,并使77.5%细胞停留在 G0/G1期。结论 IGF-1R 的 siRNA 表达载体能有效地抑制 IGF-1R 的表达和诱导细胞凋亡。
- 董爱强马志原孔敏坚
- 关键词：胰岛素样生长因子-1受体RNA干扰
- shRNA介导胰岛素样生长因子Ⅰ类受体基因沉默诱导人肺癌A549细胞凋亡的体内外研究被引量：9
- 2007年
- 目的评价 RNA 干扰(RNA interference,RNAi)技术对人肺癌 A549细胞系中胰岛素样生长因子Ⅰ类受体(IGF-IR)表达的抑制作用及其体内外抑瘤效应。方法将 IGF-IR 特异 shRNA转染人肺癌 A549细胞株,检测 IGF-IR 表达水平和 bcl-2及 caspase-3的表达变化;MTT 法检测体外培养细胞的生长抑制率;流式细胞技术检测细胞增殖周期;Western 印迹法分析 Akt 和 ERK 磷酸化程度;荷瘤裸鼠肺癌模型中观察瘤内注射的抑瘤效应及凋亡情况。结果 IGF-IR 表达抑制率达89.8%,bcl-2表达为对照组的46%±6%,caspase-3激活为对照组的156%±8%,Akt、ERK 磷酸化分别为对照组的20%和36%±3%;肿瘤细胞活力明显下降;直接瘤内注射后肿瘤体积减少至对照组的40%～50%,并促进肿瘤细胞凋亡。结论运用 RNAi 技术能有效抑制 A549细胞 IGF-IR 的表达,使细胞增殖能力减弱,凋亡增加,瘤体生长受抑。
- 董爱强孔敏坚马志原钱建芳范军强徐小红
- 关键词：RNA干扰
