国家海洋公益性行业科研专项(201205022-3)
- 作品数：12 被引量：47H指数：6
- 相关作者：石贤爱刘震朱秋享陈倩叶小军更多>>
- 相关机构：福州大学福建省医疗器械和医药技术重点实验室福建省淡水水产研究所更多>>
- 发文基金：国家海洋公益性行业科研专项福建省科技重大专项福建省海洋与渔业局重点项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程理学化学工程更多>>
- 枯草芽孢杆菌β-糖苷酶的克隆表达、体外定向进化及结构模拟被引量：1
- 2015年
- 【目的】从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出bgl C基因并在大肠杆菌中表达,分析表达产物的酶学性质并进行结构模拟,为进一步研究其生理功能及结构解析奠定基础。【方法】将bgl C基因克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,通过定向进化获取水解效率提高的突变株,经Ni-NTA镍离子层析柱纯化后,测定野生枯草芽孢杆菌β-糖苷酶与突变酶的性质。利用CD光谱,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及三维结构建模,分析野生酶与突变酶的高级结构。【结果】野生酶的比活力为9.7 U/mg,最适催化温度为60℃,最适p H值是7.0。经过突变和筛选,我们得到一个突变体BS-GLY_M1(A242T/T385A/S425L),其比活力达到17.1 U/mg,最适温度为55℃,最适p H值是7.0,在55℃下的半衰期为3.5 h,比野生酶增加2 h。突变酶对4-硝基苯基-β-半乳糖苷、乳糖和熊果苷的催化效率(Km/Kcat)有所提高。酶在天然条件下以二聚体、四聚体状态存在,推测它以二聚体为基本功能单位。结构模拟结果表明突变后酶的三维结构有轻微地变化,这可能是酶热稳定性和催化效率提高的原因。【结论】枯草芽孢杆菌β-糖苷酶可以在大肠杆菌中高效表达并可以通过定向进化提高其水解效率。
- 刘震陈倩陈荫楠王祖鑫朱秋享石贤爱
- 关键词：易错PCR底物特异性CD光谱寡聚体
- 基于单链抗体的呋喃唑酮酶联免疫检测方法的建立被引量：6
- 2017年
- 目的:为快速检测呋喃唑酮(furazolidone,FZD)在动物性食品中的残留量。方法:基于单链抗体的间接竞争酶联免疫吸附实验法建立了FZD检测方法。结果:最佳抗原工作质量浓度为2μg/m L,最佳抗体稀释倍数为1∶500,一抗最佳反应时间为60 min,二抗最佳反应时间为45 min,四甲基联苯胺最佳显色时间为20 min。FZD检测试剂盒在10~100 ng/m L范围具有较好的线性关系,IC50值为13.01 ng/m L,检出限为1.28 ng/m L,回收率为73.38%~84.52%。结论:与抗FZD单克隆抗体相比,所建立的检测试剂盒检测范围更广,且具有很高的灵敏度以及很好的特异性和稳定性。
- 陈倩陈荫楠陈东海林海虹石贤爱
- 关键词：呋喃唑酮单链抗体酶联免疫检测
- 磁性交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及性质被引量：2
- 2013年
- 采用磁性固定化酶技术制备磁性交联β-葡萄糖苷酶聚集体,优化了制备条件,并对其酶学性质进行了研究。正交试验结果表明,最优制备条件为:β-葡萄糖苷酶2 mg、沉降剂体积1 ml、磁性铁氧化物颗粒质量6 mg、戊二醛浓度15 mmol/L、交联时间2 h。在该条件下制备的磁性交联β-葡萄糖苷酶聚集体比活力可达6.44 U/mg,酶活回收率达80.5%。电镜观察显示磁性交联β-葡萄糖苷酶聚集体呈球状颗粒,单分散性好,直径约为50μm。与游离酶相比,磁性交联β-葡萄糖苷酶聚集体热稳定性及酸碱稳定性均有所提高,K m增大,操作稳定性良好,对磁场有较强的耐受性。
- 吴星涛薛原楷石贤爱
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶固定化酶学性质
- 醇脱氢酶同工酶基因表达与酿酒酵母催化2-辛酮不对称还原的关系
- 2017年
- 以Ⅱ型酿酒酵母为催化剂、2-辛酮为底物、水/正十二烷两相体系为反应体系,考察了有机介质处理对酿酒酵母ADH 1~3同工酶基因表达水平的影响及其与催化2-辛酮不对称还原反应特性的关联性.结果表明,酿酒酵母细胞经不同有机介质分别处理后,部分醇脱氢酶(ADH)同工酶基因的表达水平发生明显变化,酵母细胞催化2-辛酮不对称还原反应的特性也不同.甲苯和2-辛醇处理严重抑制ADH 1基因的表达,而正十二烷、正辛烷和正己烷处理对ADH 1基因表达影响不大,但2-辛酮处理使ADH1基因的表达水平大幅度提高;甲苯和2-辛醇处理使ADH 2基因的表达水平大幅提高,但正十二烷、正辛烷、正己烷和2-辛酮处理抑制ADH 2基因的表达.抑制ADH 1的基因表达可能使催化2-辛酮不对称还原反应催化活性降低,而抑制ADH 2的表达则可提高细胞催化不对称还原的选择性.未发现ADH 3基因表达与酵母催化活性和反应选择性之间的关联,表明ADH 1是催化底物2-辛酮不对称还原的主要同工酶,且具有良好的对映选择性,而ADH 2对2-辛酮的不对称还原的对映选择性不佳.
- 石贤爱林海虹王晓萍方世银
- 关键词：酿酒酵母醇脱氢酶同工酶基因表达水平
- 抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用被引量：13
- 2016年
- 为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10~500 ng/m L范围具有较好的线性,IC50值为0.06μg/m L,最低检测限为6.92 ng/m L,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%~88.31%。
- 陈荫楠陈华石贤爱叶小军樊海平
- 关键词：呋喃唑酮单克隆抗体酶联免疫检测
- β-葡萄糖苷酶体外分子改造研究进展被引量：6
- 2015年
- β-葡萄糖苷酶是纤维素酶的重要成分之一,负责纤维素的最终降解,在畜牧生产、食品行业、能源和医疗卫生等领域都有重要应用.天然来源的β-葡萄糖苷酶表达水平低、分离纯化困难,阻碍了β-葡萄糖苷酶的进一步应用.利用蛋白质工程技术对β-葡萄糖苷酶进行体外改造,提高其糖苷水解或者低聚糖苷合成活性,是β-葡萄糖苷酶研究及应用的趋势.就β-葡萄糖苷酶体外分子改造的研究进展及成果进行综述,比较不同分子改造策略的特点,总结β-葡萄糖苷酶分子改造过程中的一般规律,展望β-葡萄糖苷酶分子改造的研究及发展方向,为微生物来源的β-葡萄糖苷酶的体外分子改造研究提供参考.
- 刘震朱秋享石贤爱彭永辉陈荫楠
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶定点突变定向进化
- 特殊反应体系中交联β-葡萄糖苷酶聚集体催化合成红景天苷被引量：5
- 2015年
- 采用具有较高操作稳定性的交联β-葡萄糖苷酶聚集体,在离子液体-混合有机溶剂-缓冲溶液的非常规反应体系中酶催化直接糖基化合成红景天苷,筛选反应体系的组成和各成分的比例.结果表明,反应体系的组成为(%,φ):1,4-二氧六环42.5,离子液体C4MIm·PF6 8.5,乙酸乙酯34,p H 6.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液15.0.该体系在水含量高达15%(φ)的条件下水活度为0.66,适合直接糖基化反应.底物β-D-葡萄糖100 g/L、对羟基苯乙醇200 g/L时,在50℃及250 r/min下反应120 h达到平衡,红景天苷最大浓度可达25.32 g/L.
- 何丽妃薛原楷石贤爱
- 关键词：酶催化红景天苷
- 密码子优化提高多粘类芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶异源表达量被引量：6
- 2017年
- 多粘类芽孢杆菌BN1株β-葡萄糖苷酶A的基因中含有很多大肠杆菌的稀有密码子,这限制了其在大肠杆菌中的表达。本研究选择部分稀有密码子同义替换为大肠杆菌的偏爱密码子,结果得到了表达量显著提高的基因型。经过对β-葡萄糖苷酶A基因各密码子使用频率的分析,选出2种密码子:大肠杆菌使用频率极低的密码子(Ⅰ型)、大肠杆菌使用频率一般但酶基因中频繁出现的密码子(Ⅱ型)。通过定点突变,这些密码子均被替换为宿主细胞使用频率最高的同义密码子。研究结果表明,I型单密码子替换可以使酶的表达量提高3~6倍,II型单密码子替换可以使酶的表达量提高3~4倍。最终,通过组合对提高该酶表达量贡献较大的突变,得到一个表达量提高13倍的基因型(WT-13)。本研究显著提高了β-葡萄糖苷酶A在大肠杆菌宿主中的异源表达水平,为酶的工业化应用奠定了基础。本研究将Escherichia coli BL21(DE3)本源表达的β-半乳糖苷酶选为内参蛋白质,提出相对表达量指数的概念,为同类酶在E.coli BL21(DE3)表达水平的表征提供了参考。
- 陈荫楠刘震石贤爱王祖鑫
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶密码子偏性定点突变
- 鲍鱼内脏β-葡萄糖苷酶中试规模制备研究
- 2017年
- 采用胶体磨匀浆、高速管式离心、陶瓷复合膜过滤、超滤、DEAE-琼脂糖离子交换层析和CM-琼脂糖离子交换层析的中试制备工艺,从鲍鱼内脏中分离纯化得到β-葡萄糖苷酶.研究发现:胶体磨匀浆所得匀浆液总酶活为12 174.21 U,比活力为0.158 U·mg^(-1);高速管式离心两次后得到粗酶液,酶比活力为0.247 U·mg^(-1);陶瓷复合膜过滤后所得清液的酶比活力为0.133 U·mg^(-1);超滤浓缩脱盐后所得浓缩液的酶比活力为0.249U·mg^(-1);DEAE-琼脂糖阴离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为7.5,CM-琼脂糖阳离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为6.0;DEAE-琼脂糖阴离子交换层析后收集酶活性组分的酶比活力为0.492 U·mg^(-1),CM-琼脂糖阳离子交换层析收集酶活性组分的酶比活力为1.709 U·mg^(-1),纯化倍数为10.78,收率为5.0%.
- 陈胜男张利石贤爱陈金梅蔡振辉
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶中试纯化
- 尼古丁降解微生物的研究进展及潜在价值被引量：3
- 2017年
- 综述了尼古丁降解菌的研究进展,认为目前最为深入的尼古丁降解菌株主要有假单胞菌属、节杆菌属、苍白杆菌属这几类.研究方向集中在尼古丁的代谢机理及其应用,已发现的微生物降解尼古丁的代谢途径主要有三个:吡啶途径、吡咯途径、脱甲基途径.而且代谢过程中产生的中间产物具有很高的再利用价值,可作为工业合成的前体物质.
- 王晓萍石贤爱王毓虹魏增陈倩陈东海
- 关键词：尼古丁微生物降解代谢途径
