广东省科技计划工业攻关项目(2006A20101006)
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 相关作者：李君武黄清华刘艳宋东王珊珊更多>>
- 相关机构：暨南大学广东省农业科学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 携带结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体的构建及鉴定
- 2010年
- 构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。重组质粒双酶切可见0.8bp和10kb的两条特异性条带,与预期大小相一致。重组质粒测序表明克隆的Ag85B基因序列与Genbank上相一致,酶切从农杆菌中所抽提的质粒,片段大小与预期相一致。成功构建与转化了携带结核Ag85B基因的植物双元表达载体,为利用植物反应器生产口服结核疫苗奠定基础。
- 李君武刘艳黄清华叶秋萍
- 关键词：结核分枝杆菌
- 玉米特异表达启动子驱动下结核esat-6抗原基因植物表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Esat-6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,将globulin-1-Esat6联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中,构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GEsat-6,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。通过对pC1300GEsat-6质粒酶切鉴定和测序分析表明克隆的Esat-6与预期相符,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。
- 李君武宋东王珊珊胡建广刘艳黄清华
- 关键词：结核分支杆菌ESAT-6
- 携带乙肝大包膜蛋白L基因与结核Esat6融合基因植物表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一致。成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础。
- 李君武宫君原刘鑫叶秋萍黄清华
- 关键词：结核分枝杆菌乙肝病毒
- 玉米特异启动子驱动下结核Hsp65与Esat-6融合基因表达载体的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 利用转基因玉米研制新型结核口服疫苗。构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GHLE,并转化农杆菌LBA4404。以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-HLE联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。成功构建了pC1300GHLE质粒,酶切鉴定得到3.3 kb和8.6 kb 2条带,测序分析表明克隆的Hsp65和Esat6序列与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。成功构建和转化了pC1300GHLE表达载体,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。
- 李君武王珊珊宋东刘艳黄清华
- 关键词：结核分支杆菌热休克蛋白65ESAT-6
- 乙肝病毒大包膜蛋白基因植物表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 构建包含编码乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物表达载体,并转化根癌农杆菌,为进一步制备转基因植物口服乙肝疫苗奠定基础。通过聚合酶链反应(PCR),以质粒pVAX1-L为模板扩增出L基因片段,插入到含有玉米特异性启动子的pCR2.1载体上;再用PCR技术扩增globulin-1-L融合片段,定向克隆到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。HindⅢ和XbaⅠ双酶切证实,globulin-1-L融合片段已经插入到pCAMBIA1300上,测序结果说明克隆的靶基因序列与GenBank上公布的序列完全吻合。
- 李君武叶秋萍刘艳黄清华王珊珊宋东
- 关键词：乙肝病毒疫苗
- 玉米特异启动子驱动下结核hsp65基因植物表达载体构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。结果表明:成功构建了pC1300GHsp65质粒,酶切鉴定得到3Kb和8.6Kb两条带,测序分析表明,克隆的Hsp65与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒条带大小与预期结果相符合。结果显示,已成功构建和转化了pC1300GHsp65质粒,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。
- 李君武黄清华王珊刘艳黄泽棋宋东
- 关键词：玉米特异启动子
