湖北省卫生厅科研基金(Jx2B07)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：田学愎安珂徐颖田玉科杨辉更多>>
- 相关机构：华中科技大学中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：湖北省卫生厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 四环素调控系统修饰永生化大鼠星形胶质细胞株的构建及鉴定
- 2006年
- 目的构建四环素及其衍生物强力霉素诱导表达目的基因的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法用脂质体法将逆转录病毒载体四环素调控系统中的质粒pRevTet-On转染病毒包装细胞 PT67,经筛选培养后获得病毒载体RevTet-On,采用RT-PCR进行鉴定,并应用NIH313细胞测定病毒滴度。将RevTet-On感染永生化大鼠星形胶质细胞,用有限稀释法挑选阳性细胞单克隆后扩大培养,每个克隆瞬时转染含萤光素酶报告基因的质粒pRevTRE-Lue,加入强力霉素48h后分别检测其萤光素酶活性值,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低的细胞株并检测其诱导表达的时效、量效关系。结果 RT-PCR结果显示逆转录病毒包装成功,病毒最高滴度为7．4×105CFU／ml。RevTet-On转染永生化大鼠星形胶质细胞后挑选出48个单克隆,瞬时转染pRevTER-Luc后筛选出1株高表达低背景细胞株, 其诱导表达值为876．1 RLU,背景表达值为42．5 RLU,诱导倍数为20．6。该细胞株在加入诱导因子强力霉素1 h后目的基因即开始表达,在24 h时达到高峰,在强力霉素浓度100-2 000 ng/ml的范围内, 其诱导表达活性与药物浓度呈剂量依赖性。结论含四环素调控系统的永生化大鼠星形胶质细胞株诱导活性可靠,可用于调控表达外源基因的研究。
- 田学愎田玉科徐颖高峰杨辉安珂
- 关键词：四环素基因表达调控星形细胞
- 强力霉素调控表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株的构建
- 2006年
- 目的构建受强力霉素(Dox)调控表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST)。方法采用脂质体介导法将重组质粒pRevTREhPPE和调节质粒pRevTet-On分别转染逆转录病毒包装细胞PT67；将含有RevTet-On和RevTRE/hPPE病毒上清感染LAST,得到稳定表达脑啡肽的IAST/Tet-On/ hPPE细胞株,实时定量PCR检测Dox定量调控该细胞株前脑啡肽原(hPPE)基因的表达,免疫细胞化学及放射免疫分析法检测Dox定量调控该细胞株中脑啡肽的表达。结果IAST/Tet-On/hPPE细胞株中,hPPE基因的表达和脑啡肽的分泌受Dox调控,Dox浓度为100～5000 ng/ml时,随着Dox浓度增高,hPPE基因的表达和脑啡肽的分泌增加,Dox浓度为5000 ng/ml时达峰值。结论成功构建了受四环素及其衍生物强力霉素定量调控表达脑啡肽的IAST。
- 徐颖田玉科田学愎梅伟安珂杨辉
- 关键词：脑啡肽类星形细胞
