广东省自然科学基金(200332842)
- 作品数：3 被引量：22H指数：3
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- 高糖对肾小管上皮细胞表达CTGF的影响及P38MAPK通路在其中的作用被引量：14
- 2009年
- 目的探讨高糖对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及蛋白表达的影响,以及p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号途径在其中的作用。方法以高糖刺激体外培养的人肾小管上皮细胞株HKC,应用RT-PCR,免疫组化、间接免疫荧光、Western blotting等分析技术,检测高糖刺激24、48、72、96h,以及20d时HKC表达CTGFmRNA及蛋白的影响,并观察以SB203580特异性阻断p38MAPK信号传导途径后上述过程的变化。结果体外培养HKC的CTGFmRNA与蛋白含量极低,高糖刺激48h后HKC表达CTGFmRNA水平达峰值,以后逐渐下降,96h时接近正常水平,但长期(20d)高糖刺激的HKC,其表达CTGFmRNA水平稳定高于正常对照组2倍。而随高糖刺激时间的延长,HKC细胞表达CTGF蛋白水平进行性升高,长期(20d)持续高糖刺激可使CTGF蛋白表达水平达到正常组的5倍左右。SB203580能显著抑制高糖引起的CTGFmRNA及蛋白的高表达。结论持续高糖刺激可以引起体外培养的人肾小管上皮细胞表达CTGF显著升高,提示CTGF高表达是糖尿病肾病肾小管间质纤维化发生的重要环节,而p38MAPK信号途径可能参与了这一过程。
- 汤珣章俊蔡德鸿曾莉
- 关键词：人肾小管上皮细胞高糖P38丝裂原激活蛋白激酶
- siRNA沉默CTGF表达对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响被引量：6
- 2010年
- 目的探讨针对结缔组织生长因子(CTGF)基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为6组:(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siR-NA表达质粒后于高糖培养基中培养。应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白水平。结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平。而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-SMA蛋白表达水平降低。结论CTGF是高糖诱导HK-2细胞EMT的重要介质。针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据。
- 汤珣蔡德鸿曾莉章俊
- 关键词：小分子干扰RNA肾小管上皮细胞转分化
- 针对结缔组织生长因子的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞肥大的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观测人肾小管上皮细胞转染针对结缔组织生长因子(CTGF)的siRNA后对高糖诱导细胞肥大的影响。方法细胞分6组培养:正常对照组(培养基含D-葡萄糖1g/L),等渗对照组(培养基含D-葡萄糖1g/L、甘露醇3.5g/L),高糖组(培养基含D-葡萄糖4.5g/L),高糖+空白对照组(细胞转染空质粒后培养于高糖培养基中),高糖+阴性对照组(细胞转染含无关序列的质粒后培养于高糖培养基中),高糖+干扰组(细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后培养于高糖培养基中)。收集各组培养至24、48、96h的细胞,以实时PCR检测CTGF mRNA水平;Western blotting检测CTGF蛋白水平;MTT法测定细胞增殖活力;流式细胞仪测定细胞周期分布;考马氏亮蓝法测定细胞总蛋白含量。结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGF mRNA及蛋白水平,使停留于G1期的细胞比例升高,增殖活力受抑制,细胞肥大指标胞内总蛋白含量增加;而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,细胞增殖活力增强,更多的细胞由G1期进入S期,细胞内总蛋白含量降低。结论证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞肥大的重要介质。针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞肥大,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据。
- 章俊杜庆生蔡德鸿曾莉汤珣
- 关键词：结缔组织生长因子小分子干扰RNA
