海军总医院创新培育基金(CX201101)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 比较不同诱导体系体外诱导华通胶间充质干细胞分化为内皮细胞的研究
- 2013年
- 目的比较诱导因子和非接触共同培养2种方法诱导人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's jelly-mesenchymal stem cells,HUW-MSCs)分化为内皮细胞的优劣。方法剖宫产取脐带用酶消化和组织块贴壁2种方法获得HUW-MSCs。实验分诱导因子组、共同培养组和单纯培养组。诱导因子组用血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子联合诱导培养;共同培养组HUWMSCs与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)非接触共同培养;单纯培养组只加培养液培养。培养周期为14 d。第7天检测CD309,第10天进行Dil标记乙酰化低密度脂蛋白(Dil-labeled acetylated low density lipoprotein,Dil-Ac-LDL)吞噬实验;第14天检测CD31、血管假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和一氧化氮(nitric oxide,NO)。结果各组细胞形态较实验前有显著变化,但均未见典型铺路石样改变。3组细胞表达CD309上调;诱导因子组和单纯培养组表达CD31下降,而共同培养组CD31明显上调。NO及ET-1含量检测均较HUVECs低,但差异无统计学意义(P>0.05),3组之间比较差异同样无统计学意义(P>0.05)。vWF及Dil-Ac-LDL各组反应呈弱阳性。结论 HUW-MSCs在诱导因子和内皮细胞旁分泌作用下均具有向内皮细胞分化倾向,使用诱导因子较非接触共同培养方法诱导HUW-MSCs向内皮分化的效果更好。
- 曹芳英张宁坤高连如朱智明
- 关键词：间充质干细胞血管内皮细胞
- 体外诱导人脐带华通胶间充质干细胞向内皮细胞分化过程中APJ表达变化
- 2014年
- 目的研究人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-mesenchymal stem cells,HUW-MSCs)体外诱导向内皮细胞分化过程中表面APJ受体表达的变化,探讨APJ是否可作为鉴定内皮细胞的早期细胞表面标志物。方法剖宫产取脐带后分别用酶消化和组织贴壁法培养获得脐带华通胶间充质干细胞,用酶消化法获得人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。取2×10~7第2代HUW-MSCs用单克隆APJ-APC荧光抗体标志后行流式分选,测定HUW-MSCs实验前细胞表面表达APJ的水平。实验分3组:诱导组MSCs用含血管内皮细胞生长因子5μg/L、碱性成纤维细胞生长因子10μg/L、表皮生长因子10μg/L和10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)M199培养基培养;共同培养组MSCs先与HUVECs在Transwell 6孔培养板中,用含10%FBS的M199培养5-7 d后转入25 cm^2培养瓶中继续培养,培养液为含10%FBS的M199和培养1 d内皮细胞的M199(2:1)混合培养基:单纯培养组细胞培养基为含10%FBS的M199。培养周期为14 d。分别于第7、10、14天流式检测各组细胞APJ表达水平,同时检测内皮细胞表面APJ水平作为阳性对照。另外于第7、14天检测3个实验组、内皮细胞组、HUW-MSCs组内皮细胞早期标志物CD309表达变化情况,比较各实验组之间APJ与CD309变化趋势。结果HUW-MSCs流式分选出5×10~3APJ^+-HUW-MSCs,表面表达APJ基本呈阴性。诱导组、共同培养组和单纯培养组细胞形态均较HUWMSCs有显著改变,诱导组呈圆形、线性、网状,共同培养、单纯培养组细胞呈卵圆形、长梭形。另外,诱导组生长最快,增殖能力最强;单纯培养组次之;共同培养组细胞生长缓慢,增殖能力最弱。第7、10、14天,3组细胞CD309表达分别为诱导组1.8%、2.6%和8.8%,共培养组0.5%、2.5%和4.7%,单纯培养组0.3%、2.1%和2.7%。第7、10、14天各组APJ阳性表达率分别为诱导组0.5%、0.9%和5.2%,共培养组0.4%、0.8%和3.0%,单纯�
- 曹芳英张宁坤高连如朱智明
- 关键词：血管内皮细胞细胞标志物
