重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ090321)
- 作品数：4 被引量：44H指数：3
- 相关作者：李升锦何子纯牛红雷易敏周向东更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 结核杆菌eis基因的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达被引量：7
- 2010年
- 目的:构建结核分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物活性。方法:采用PCR技术克隆结核分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMVe-is,经酶切和测序鉴定其正确性,用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中,采用SDS-PAGE和Western blot检测eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达。结果:成功构建结核杆菌eis基因穿梭表达载体pMV-eis;生长曲线说明重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;SDS-PAGE和Western blot检测证实eis在耻垢分枝杆菌中可表达出相对分子量约42kDa的Eis蛋白。结论:成功构建了eis基因穿梭表达质粒pMV-eis,且该重组质粒在耻垢分枝杆菌中具有生物活性,为下一步研究表达产物Eis的功能奠定了一定基础。
- 何子纯李升锦
- 关键词：耻垢分枝杆菌
- 结核分枝杆菌eis基因表达对人THP-1细胞细胞因子分泌的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究结核分枝杆菌eis基因表达对人单核巨噬细胞Thp-1细胞的影响,筛选出差异性表达细胞因子,探讨结核分枝杆菌eis基因在单核巨噬细胞致持留的免疫机制。方法 eis基因重组耻垢分枝杆菌MS-pmv261-eis及对照组细菌MSpmv261感染经PMA诱导分化的人单核巨噬细胞Thp-1细胞;细胞信号传导通路抑制剂用于分析作用机制;ELISA方法检测细胞上清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、INF-γ表达水平;筛选差异性表达的细胞因子,RT-PCR进一步确定该细胞因子的基因表达。结果结核分枝杆菌eis基因可引起IL-10表达增加(P<0.05),而对细胞因子IL-4、IL-6、IL-12、INF-γ的表达无显著影响(P>0.05),RT-PCR结果也进一步确证了IL-10基因的高表达。2-AP和U0126能明显抑制MS-pmv261-eis(MS-eis)感染引起的IL-10的释放(P<0.05)。结论结核分枝杆菌eis基因可上调Thp-1细胞IL-10在蛋白水平和基因水平的表达,可能通过MEK1/2或PKR信号通路刺激IL-10的释放来增强机体的免疫功能,其作用可能与结核分枝杆菌持留性有关。
- 朱坤生易敏周向东李升锦
- 关键词：结核分枝杆菌单核巨噬细胞白介素-10
- 流式细胞术检测胞内重组耻垢分枝杆菌的活力研究被引量：4
- 2011年
- 目的建立一种快速检测胞内分枝杆菌活力的方法。方法将一定量培养至对数生长期的含pMV-eis的重组耻垢分枝杆菌感染U937巨噬细胞,以含空质粒的耻垢分枝杆菌为对照,吞噬作用2 h后洗去胞外细菌,再分别培养4、12、24和48 h后收集细胞并裂解之。获得的胞内细菌用FDA荧光染料染色后用流式细胞仪检测死亡率,并与平板菌落计数法进行比较。结果流式细胞仪检测出感染12 h后重组耻垢分枝杆菌胞内死亡率较对照组均有显著下降(P<0.05),流式细胞仪检测法与平板菌落计数法相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术与传统的平板计数法相比具有快速、敏感、方便的特点,可用于分枝杆菌活菌快速检测。
- 何子纯李升锦
- 关键词：重组耻垢分枝杆菌流式细胞仪
- 肺结核合并糖尿病的发病机制被引量：32
- 2011年
- 目前肺结核合并糖尿病患者人数逐年增加。在此就肺结核合并糖尿病患者的相关因素物质代谢、瘦素、转化生长因子β1(TGFβ-1)与自杀相关因子/自杀相关因子配体、氧化应激、药物影响等5个方面进行阐述,目的在于加深对肺结核合并糖尿病发病机制的认知,从而对于这类患者的早期诊断及治疗、提高治愈率以及控制传染病起到积极的作用。
- 牛红雷李升锦
- 关键词：肺结核糖尿病发病机制
