河南省科技攻关计划(2007320040)
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 相关作者：臧卫东任秀花曹靖徐玉英赵青赞更多>>
- 相关机构：郑州大学河南科技大学河南省人民医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表达载体pEGFP—C3一PENK的构建以及在NIH3T3细胞中的表达
- 2010年
- 目的：构建质粒pEGFP-C3-PENK,并观察其在真核细胞中表达的时效.方法：构建质粒pEGFP-C3-PENK;低浓度裸质粒、高浓度裸质粒、脂质体介导分别转染NIH3T3细胞,观察转染率、绿色荧光蛋白表达情况;放射免疫法和免疫细胞化学法检测脑啡肽的表达情况.结果：质粒pEGFP-C3-PENK成功构建;低浓度裸质粒转染率5%;高浓度裸质粒转染率8%,脂质体介导转染率为20%;转染5周后仍有绿色荧光蛋白表达.结论：成功构建质粒pEGFP-C3-PENK,可在NIH3T3细胞中表达超过5周.
- 曹靖胡伊乐任秀花臧卫东
- 关键词：转基因增强型绿色荧光蛋白真核表达
- 硫酸氨基葡萄糖对佐剂关节炎大鼠镇痛作用及其脊髓NR2B蛋白表达影响被引量：1
- 2010年
- 目的:研究硫酸氨基葡萄糖对佐剂性关节炎大鼠镇痛及脊髓NR2B蛋白表达的影响,以探讨硫酸氨基葡萄糖在临床对类风湿关节炎的治疗作用。方法:30只SD大鼠分为三组。阳性对照组:通过给大鼠左后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)建立类风湿性关节炎的动物模型(AA)。治疗组:左后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)后第2d开始每日灌胃剂量2ml生理盐水含硫酸氨基葡萄糖100mg/kg连续28d,阴性对照组:左足跖部皮下注射0.1ml生理盐水。阴性对照组与阳性对照组每日灌胃2ml生理盐水。于造模后10、12、15、17、19、21、28d检测大鼠右足热痛阈。28d后处死大鼠检测脊髓NR2B表达情况。结果:与模型组相比,治疗组大鼠右足热痛阈升高,脊髓NR2B蛋白表达降低。结论:硫酸氨基葡萄糖对类风湿性关节炎的治疗具有一定的作用。
- 茹靖涛曹靖任秀花徐玉英臧卫东
- 关键词：氨基葡萄糖关节炎
- pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白在大鼠鞘内注射的表达被引量：3
- 2009年
- 目的：构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）并观察其存大鼠体内的转染部位及表达时间。方法：构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白后直接注射到正常大鼠的蛛网膜下腔，观察其存大鼠体内转染后的时空效应。结果：双酶切结果符合真核表达载体pcDNA3.1（＋）约5.4kb，EGFP约750bp，另外测序分析与文献报道结果完全一致；动物实验结果表明，鞘内注射24h后存大鼠的脑脊膜和脊神经的外膜上有EGFP表达，在14d达到高峰，4周后明显下降，第7周消失；在实验组大鼠的心、肝、脾、肺、肾及股四头肌均没有绿色荧光。对照组所有取材部位均没有绿色荧光。结论：重组质粒pcDNA3.1（＋）-EGFP通过直接注射法被成功转染至大鼠的蛛网膜下腔，且外源基因得到了表达。
- 徐玉英曹靖任秀花赵青赞臧卫东
- 关键词：鞘内注射增强型绿色荧光蛋白真核表达PCDNA3.1
- 鞘内移植微囊化转前脑啡肽原基因细胞对大鼠痛行为及脊髓背角相关蛋白表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的：观察海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠（APA）微囊化转鼠前脑啡肽原基因NIH3T3细胞（APA-NIH3T3/rPENK）移植对大鼠神经痛的影响及相关机制.方法：制作SD大鼠坐骨神经慢性压迫模型（CCI）,随机分为APA空囊组、NIH3T3/rPENK组和APA-NIH3T3/rPENK组.测定移植后各组CCI术侧热痛阈,大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）蛋白的表达情况.结果：移植后NIH3T3/rPENK组和APA-NIH3T3/rPENK组热痛阈明显高于APA空囊组.移植15d后APA-NIH3T3/rPENK组热痛阈显著高于NIH3T3/rPEN组.NIH3T3/rPENK组、 APA-NIH3T3/rPENK组结扎侧背角NR2B蛋白表达低于APA组;APA-NIH3T3/rPENK组背角NR2B蛋白表达低于NIH3T3/rPENK组.结论：NIH3T3/RPENK或APA-NIH3T3/rPENK植入大鼠的蛛网膜下腔可以明显减轻神经痛大鼠的热痛敏感行为,并降低脊髓背角NR2B蛋白的表达.
- 曹靖王振全任秀花臧卫东
- 关键词：脑啡肽N-甲基-D-天冬氨酸受体
- 蛛网膜下腔注射pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经病理性痛的镇痛效应被引量：13
- 2009年
- 目的:观察蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经痛的镇痛作用。方法:SD大鼠随机分为坐骨神经慢性压迫(CCI)组、CCI假手术组、实验组和空质粒组。CCI组和CCI假手术组,用于观察疼痛持续时间;实验组和空质粒组分别于CCI术后第15天蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE和空质粒pcDNA3.1(+)。测定各组注射质粒前后CCI模型鼠双后肢热痛阈(PWTL),观察纳洛酮对镇痛效应的影响,用放射免疫法检测脑脊液灌流液中脑啡肽(L-ENK)的含量,同时采用免疫组织化学方法测定两组大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的变化。结果:CCI术后7～33d,术侧PWTL明显低于对照侧。空质粒组注射前后热痛阈未见明显变化;与空质粒组相比,实验组大鼠蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE后的第3天产生明显的抗伤害效应(PTWL升高),持续镇痛长达18d,且镇痛效应能被纳洛酮翻转。实验组脑脊液灌流液L-ENK含量显著高于空质粒组。与空质粒组比较,实验组大鼠脊髓背角NR2B阳性蛋白表达明显受到抑制。结论:蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE能够减轻大鼠神经病理性疼痛的热痛敏行为。
- 徐玉英张宏伟赵青赞任秀花臧卫东
- 关键词：蛛网膜下腔注射脑啡肽
- pEGFP-C3-PENK载体的构建及在体内外的表达
- 2010年
- 目的：观察载体介导的外源性脑啡肽在细胞以及大鼠体内的表达与生物学作用.方法：将从大鼠脑组织中扩增的前脑啡肽原基因与真核绿色荧光载体连接构建新载体pEGFP-C3-PENK,体外转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜及免疫细胞化学观察新建载体在NIH3T3细胞内表达绿色荧光及脑啡肽;制备神经性疼痛大鼠模型并在蛛网膜下腔注射新建载体,通过大鼠疼痛阈值变化检测新合成脑啡肽的生物学作用.结果：在NIH3T3细胞与大鼠蛛网膜下腔均有大量的脑啡肽表达,大鼠的热敏阈明显提高.结论：新建载体介导的脑啡肽在生物体内能持续稳定表达并发挥生物学功能.
- 胡伊乐曹靖臧卫东徐玉英涂心明
- 关键词：脑啡肽基因治疗
