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工程菌酯酶B1的纯化及性质研究被引量：5: 2005年; 工程菌酯酶B1降解酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseCL 6B离子交换柱层析、SephadexG 1 5 0凝胶过滤 ,得到了分离纯化 ,SDS PAGE鉴定为单一组分。经 1 2 .5 %SDS PAGE法测得分子量约为 5 6KD ,提纯倍数为33.3,收率为 1 7.9%,比活力为 74 .7U/mg。该酶的最佳作用条件是 37℃ ,pH =7.0 ,该酶作用于α 乙酸萘酯的Km为1 .35× 1 0 -3 mM ,Vmax为 2 .7× 1 0 4μ/ml。酶在pH6～ 9范围内较稳定 ,重金属Cu2 + 对该酶具有明显的促进作用 ,而SDS对酶具有抑制作用 ,对有机磷农药对硫磷 (1 6 0 5 )的降解率在 90min内达 91 .5 %。; 薛庆节闫艳春姜红霞刘萍萍解秀萍张洁; 关键词：KD 有机磷农药酯酶降解率

蚊虫抗药性及酯酶基因扩增研究进展被引量：5: 2001年; 本文综述了蚊虫抗药性及酯酶基因扩增的研究进展。包括蚊虫抗药性产生的原因、酯酶的类型及分布、酯酶基因扩增和酯酶的多态性及迁移假说。; 孙中涛闫艳春; 关键词：库蚊抗药性酯酶基因扩增

解毒酶基因在蓝藻中的克隆与表达被引量：19: 2000年; 用抗性库蚊酯酶基因B1的cDNA片段插入质粒pRL439中的强启动子之后,再与穿梭表达载体pDC8相连构建成大肠杆菌蓝藻穿梭表达载体pDCB1,然后通过三亲接合转移法将pDCB1转入蓝藻Synechococcussp.PCC7942中,经新霉素筛选获遗传稳定的转基因藻株;纯化单藻落在液体中扩大培养,提取蓝藻质粒,Southern杂交确证B1cDNA已转入受体细胞;用酯酶的特异性底物β乙酸萘酯(βNA)检测B1的表达,转基因藻对βNA的降解明显高于野生藻,证明酯酶B1基因在转基因藻中得到表达。; 闫艳春乔传令张媛; 关键词：蓝藻基因表达克隆

抗性库蚊酯酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达被引量：16: 2000年; 用抗性库蚊酯酶基因,引入原核表达载体pRL439,转化大肠杆菌HB101细胞,获得表达。通过酶切、Southern杂交鉴定重组质粒。研究了重组菌酯酶的活性,重组质粒pRLB1表达的酯酶具有高酶活并能高效降解酯酶的特异性底物α乙酸萘酯(αNA)和β乙酸萘酯(βNA);经对重组菌进行细胞固定化后降解农药三氯杀虫酯(7504),反应时间短。; 闫艳春乔传令尚宏宇钱传范; 关键词：酯酶基因基因表达农药污染水体净化

工程菌表达融合型酯酶B1发酵条件的优化: 2009年; 目的提高酯酶B1融合蛋白的表达量,研究pThioHisA-B1/DH5α工程菌株的最优发酵条件。方法依次在不同的培养基(LB,SOB,YT,TB)、诱导时间(1～8h)、诱导剂浓度(0.3～1mmol/L)、诱导温度(25～37℃)等因素变化下,研究融合蛋白的表达量;目的产物经SDS-PAGE电泳和薄层凝胶扫描,以获得最佳表达条件。结果工程菌优化的发酵条件为,最适宜的培养基为TB,诱导剂IPTG的最佳浓度为0.4mmol/L,最佳诱导时间为6h,最佳诱导温度为28℃。工程菌在最佳条件下表达时,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40.3%,其中66.2%为可溶性蛋白。结论本实验筛选出了工程菌的最优化发酵条件,利用本实验的优化条件可获得高产量、可溶性的酯酶B1融合蛋白,为酯酶B1的进一步放大生产和实际应用奠定了基础。; 张丽青姜红霞闫艳春; 关键词：环境微生物学融合蛋白

R-工程菌表达产物酯酶B1的纯化及其特性被引量：7: 2003年; 为将酯酶B1应用于果蔬农药残留的降解,对其进行分离纯化,并对其酶学特性进行研究。R-工程菌在LB液体培养基中37℃震荡培养14 h,细胞经石英砂冰浴研磨破壁,粗提酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-50分子筛柱层析脱盐、DEAE-Sepharose FastFlow离子交换层析、Sephadex G-75分子筛柱层析得到凝胶电泳均一的酯酶B1。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量为67 kDa。酯酶B1的纯化倍数为43.4,收率为2.94％。该酶的最佳作用条件是37℃、pH=7.O,常温(25℃)下,酯酶B1的半衰期为62 h,42℃时该酶仍然十分稳定。酶促反应动力学曲线采用双倒数法,37℃时最大酶促反应速度Vm=0.73 mg/(mL·min),米氏常数Km=3.89 mg/mL。酯酶B1活力强、在常温下反应速度快、稳定高,说明其用于果蔬农残降解在技术上是可行的。本文将酯酶B1纯化至电泳纯,因而工艺复杂、收率较低,但在实际应用中,只需进行粗分离,工艺简单,收率高达70％,因此,该酶的开发应用在经济上也是可行的。; 孙中涛闫艳春姚良同田林茂; 关键词：酶工程纯化酶学特性半衰期农药残留

工程菌及其固定化细胞对有机磷农药的降解被引量：51: 2001年; 用抗性库蚊酯酶基因,引入原核表达载体pRL439,转化大肠杆菌HB101细胞,获得表达.通过酶切、Southern杂交鉴定重组质粒.研究了重组菌酯酶的活性,重组质粒pRL-B1表达的酯酶具有高酶活并能高效降解酯酶的特异性底物a-乙酸萘酯(a-NA)和β-乙酸萘酯(β-NA);经对重组菌进行细胞固定化后降解有机磷农药对硫磷(1605),反应时间短,降解效率高.; 闫艳春姚良同宋晓妍贾乐周波李风华; 关键词：对硫磷工程菌降解农药细胞固定化有机磷农药

R-工程菌表达产物酯酶B1的固定化及其降解特性被引量：12: 2005年; 将抗性库蚊的解毒酶基因克隆到大肠杆菌中,得到R-工程菌,该工程菌的表达产物酯酶B1能高效降解有机磷、有机氯、氨基甲酸酯、菊酯等4大类农药。本研究将重组质粒pR L-B1转入大肠杆菌D H5α,以5%的接种量转接到LB液体培养基中,37℃振荡培养13h。超声波破碎工程菌,20%～80%的硫酸铵沉淀粗提后,采用海藻酸钙将R-工程菌表达产物酯酶B1进行固定化,并测定了固定化酶对其特异性底物α-乙酸萘酯的降解特性。结果表明,酶的最佳固定化浓度为0.15g·L-1,最佳固定化时间为12h,固定化酶最佳反应pH为7.0～7.5,最适温度为40℃,固定化酶显示出很高的热稳定性和重复使用稳定性,在常温下其半衰期为12d,利用双倒数法确定固定化酶的Km为1.8×10-3m m ol·L-1,Vm ax为1.45×104U·g-1,固定化酶的K m是液态酶(1.35×10-3m m ol·L-1)的1.33倍,V m ax只有液态酶(2.7×104U·m L-1)的近1/2。利用气相色谱测得其对有机磷农药对硫磷(1605)的降解率在30m in内达53.8%。; 薛庆节闫艳春张杰; 关键词：固定化酶降解

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山东省自然科学基金(Y98D16064)