国家自然科学基金(30571275)
- 作品数：9 被引量：29H指数：4
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- 相关机构：云南农业大学云南省农业生物技术重点实验室云南省农业科学院更多>>
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- 甘蓝短散布元件对转基因表达效果的研究被引量：1
- 2008年
- 为检验甘蓝短散布元件(SINE)对植物转基因表达的影响,采用PCR方法,从甘蓝基因组中克隆了一段短散布元件序列(Short Interspersed Nuclear Element,SINE),该SINE具有核基质结合区(matrix attachmentregion,MAR)的结构特征,将其构建到β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(uidA)的两侧翼,形成SINE调控的植物表达载体,采用农杆菌介导法,将含SINE序列和不含SINE序列的植物表达载体导入烟草中。对转基因植株进行GUS活性定量测定,结果表明,SINE表现出类似MAR的功能,可以提高外源uidA基因的表达水平,与不含SINE的转化植株相比,外源基因的平均表达水平提高了2倍,但转基因植株个体间表达水平存在较大的差异。
- 杨正安曹晖王小佳张应华
- 关键词：甘蓝核基质结合区转基因表达
- 一种利用植物病毒载体表达外源蛋白的新平台——Magnifection被引量：1
- 2007年
- 本文介绍国内外在利用植物病毒表达载体生产药物蛋白的研究现状,并对这一领域取得的最新突破进行重点阐述,包括Magnifection的原理、技术流程及利用其生产重组药用蛋白的优势、存在的问题等。最后,结合相关经验介绍利用植物病毒表达载体生产药物蛋白的应用前景及对该技术改进的建议。
- 杨正安丁玉梅张应华刘飞虎
- 关键词：植物病毒载体
- AGPase反义基因转化番茄研究被引量：1
- 2008年
- 将含有魔芋AGPase反义基因的质粒pBAGP通过冻融法转化到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404中,再采用叶盘法将其转化进番茄(Lycopersicon esculentumMill.)栽培品种"合作908"中,获得含AGPase基因的番茄抗性植株。最后,经卡那抗性鉴定、NPTⅡ基因和AGPase基因PCR扩增和PCR-Southern杂交检测表明,反义AGPase基因成功整合到番茄基因组,为番茄改良品质育种奠定了材料基础。
- 杨正安张应华丁玉梅许彬张兴国
- 关键词：腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶番茄
- 农杆菌介导的Bt基因转化马铃薯的研究被引量：3
- 2008年
- 马铃薯块茎蛾的危害极为严重,通过植物基因工程将Bt基因的Cry1Ab类型导入马铃薯,以期获得抗虫性提高的马铃薯基因工程植株.以马铃薯品种‘会-2’为受体材料,对影响转化效率的因素进行了优化,结果表明:3号(1/2MSO+50μLAs+2 mL农杆菌悬浮液)浸染液有利于抗性芽的分化,乙酰丁香酮可以提高叶片的转化率,共培养3 d的分化率较高.共获得经过卡那霉素筛选的114个转化植株,对初筛株系进行PCR分子鉴定,结果有55%的植株扩增出目的条带,初步证明Cry1Ab基因已整合到马铃薯的基因组中.转化植株的抗虫性鉴定正在进行中.
- 丁玉梅包文梅周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：农杆菌CRY1AB基因基因转化马铃薯
- Bt基因转入烟草叶绿体获得转化植株的研究被引量：4
- 2007年
- 构建了苏云金杆菌晶体毒蛋白基因Cry1Ab的烟草叶绿体表达载体pCTBt,该载体以烟草叶绿体基因组trnI-trnA为同源重组片段,含有壮观霉素抗性筛选标记基因aadA、质体特异性启动子Prrn和终止子TpsbA.利用基因枪转化法,将pCTBt导入栽培烟草红花大金元叶绿体,经过4次继代筛选,获得9个抗壮观霉素的转化株系,转化频率为0.3～0.6株/枪,其中有5个株系PCR检测结果为阳性,初步确定Cry1Ab基因已整合到烟草叶绿体中.转基因烟草抗斜纹夜蛾试验表明,幼虫死亡率为10%～75%,转基因烟草植株具有较好的杀虫活性.
- 丁玉梅杨正安周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：CRY1AB基因烟草叶绿体转化
- gfP基因甘蓝质体表达载体构建及原核表达分析被引量：4
- 2008年
- 以甘蓝自交系‘03097’为试材,PCR扩增并克隆了甘蓝质体的trnI-trnA基因区段,利用该基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了甘蓝质体定点转化载体,并进行了原核表达分析。结果表明,所扩增的基因区段大小为2.7 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下高水平表达,表达量约占总可溶性蛋白的41.0%,包涵体占菌体蛋白的38.0%。该载体的构建为后期甘蓝质体转化体系的建立和其它功能基因导入甘蓝质体进行性状改良奠定了基础。
- 杨正安丁玉梅许彬张应华
- 关键词：甘蓝质体GFP基因
- 农杆菌介导的甜菜碱醛脱氢酶基因转化甘蓝的研究被引量：6
- 2009年
- 为获得抗旱和耐盐性提高的甘蓝植株,通过农杆菌介导法将来自菠菜的甜菜碱醛脱氢酶(Betaine Aldehyde Dehydrogenase,BADH)基因导入甘蓝品系03079,并采用正交设计优化影响转化效率的参数,建立了甘蓝高效转化体系,即以侵染液为AA液体培养基、乙酰丁香酮200μmolL-1、侵染时间20min、共培养天数2d为最佳转化参数,在该条件下转化率可达54.26%。转基因甘蓝植株经PCR检测初步说明BADH基因已导入甘蓝中,Southern杂交证明BADH基因已稳定整合到甘蓝基因组中。甜菜碱脱氢酶活性测定结果表明,经过聚乙二醇(PEG)、NaCl和干旱处理的转基因甘蓝植株的BADH酶的平均比活力范围在2.1Umg-1～3.6Umg-1之间,不同处理的转基因株系酶比活力显著高于相应的未转基因株系。膜的相对电导率测定结果说明,经过PEG、NaCl和干旱处理的转基因植株平均相对电导率在16.2%～32.6%之间,耐逆境胁迫处理后的绝大多数转基因株系相对电导率显著低于相应对照。多数转BADH基因甘蓝植株在干旱、盐胁迫和PEG胁迫条件下生长势强于未转基因植株,表现为大多数转基因株系株高增幅显著高于对照,说明BADH基因的导入能提高转基因甘蓝植株的抗旱和耐盐性。我们获得的抗旱和耐盐能力明显提高的转基因甘蓝植株,可作为培育耐盐、抗旱甘蓝品种的种质材料。
- 周国雁杨正安张应华郭凤根周晓罡张绍松孙茂林伍少云丁玉梅
- 关键词：甘蓝农杆菌介导法BADH基因
- 胰岛素样生长因子1转化番茄的研究被引量：5
- 2007年
- 以MS为基本培养基,附加不同浓度BA与IAA激素组合,对番茄子叶和下胚轴进行离体培养,结果子叶芽诱导的效果明显好于下胚轴,最佳分化培养基为MS+BA 3.0 mg/L+IAA 0.15 mg/L。采用根癌农杆菌介导法,将胰岛素样生长因子1(Insulin-like Growth Factor-1,IGF-1)基因导入番茄中,通过多批次转化及筛选,最终获得15株抗性植株,PCR检测全部呈阳性,初步表明IGF-1基因已整合到番茄基因组中。
- 许彬杨正安张应华
- 关键词：胰岛素样生长因子-1番茄
- Bt基因转入烟草叶绿体获得转化植株的研究
- 构建了苏云金杆菌晶体毒蛋白基因 Cry1A6的烟草叶绿体表达载体 pCTBt,该载体以烟草叶绿体基因组 trnI-trnA 为同源重组片段,含有壮观霉素抗性筛选标记基因 aadA、质体特异性启动子 Prrn 和终止子 T...
- 丁玉梅杨正安周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：烟草叶绿体转化转基因植株
- 文献传递
- 马铃薯质体表达载体构建及GFP基因在块茎中的瞬时表达被引量：7
- 2008年
- 利用高等植物质体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草质体基因组全序列设计合成引物,PCR扩增并克隆了马铃薯质体的trnI-trnA基因片段。将测序正确的trnI基因和trnA基因作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建成包含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的马铃薯质体定点转化载体pBMLSIA-GFP,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计。采用该载体对马铃薯块茎进行基因枪法转化,结果表明,GFP基因可在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下在马铃薯块茎中瞬时高量表达,经基因枪轰击后马铃薯块茎在紫外投射仪下产生很强的绿色荧光,在距离为6cm,压力1100psi轰击2枪的条件下产生的绿色荧光最强。马铃薯块茎可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析表明,GFP蛋白表达量约占总可溶性蛋白的15.4%-30.2%,均达到了较高的表达水平。该载体对后期马铃薯质体转化体系的建立和其他功能基因导入马铃薯质体进行性状改良具有重要应用价值。
- 丁玉梅杨正安周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：马铃薯质体GFP基因
