云南省应用基础研究基金(2011FZ124)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：张小文邹浩魏东王琳吴雪松更多>>
- 相关机构：昆明医科大学昆明医学院第二附属医院昆明医学院更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金云南省科技厅-昆明医学院应用基础研究联合专项资金项目博士研究生创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抑癌基因WWOX在消化道肿瘤中的研究进展被引量：1
- 2012年
- WWOX基因定位于染色体16q23.3～24.1,位于染色体普通脆性位点FDR16D,包含9个外显子,编码414个氨基酸,WWOX可能与p53、Bmi1、survivin、p73、Ap2α/γ、c-Jun、ErbB4、Runx2等相互作用而发挥凋亡作用。在多种消化道肿瘤中均发现WWOX基因杂合子缺失,WWOX mRNA表达低下或缺失,WWOX蛋白表达水平低。
- 杨珮邹浩张小文
- 关键词：WWOX基因抑癌基因凋亡
- E-cadherin和Vimentin在肝内胆管癌的表达及临床意义被引量：5
- 2016年
- 目的探讨E-cadherin和Vimentin在肝内胆管癌的表达与临床病理特征和预后关系.方法采用免疫组化检测E-cadherin和Vimentin在50例肝内胆管癌及其癌旁肝内胆管组织中的表达,并分析与其临床病理特征和预后的关系.结果在肝内胆管癌中E-cadherin的高表达率(42%)明显低于癌旁肝内胆管(68%),肝内胆管癌中Vimentin高表达率(50%)明显高于与癌旁肝内胆管(30%),差异有统计学意义(P<0.05).肝内胆管癌中E-cadherin的表达下降和Vimentin的表达上升均与TNM分期、肿瘤的分化、淋巴结转移及不良预后相关(P<0.05).结论肝内胆管癌E-cadherin降低和Vimentin增加,与侵袭、转移以及不良预后密切相关,对判断病人预后有指导意义.
- 康强邹浩刘立鑫王连敏吕炎张小文
- 关键词：肝内胆管癌E-钙黏蛋白波形蛋白上皮-间充质转化
- shRNA-Bmi1重组载体构建及其对胆囊癌裸鼠移植瘤hTERT表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的体外构建及鉴定sh RNA-Bmi1重组载体,探讨靶向沉默原癌基因Bmi1对人胆囊癌细胞Bmi1m RNA表达、蛋白表达及对裸鼠皮下移植瘤h TERT表达的影响.方法针对Bmi1不同位点构建4个sh RNABmi1重组质粒,采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和Western blot检测各组Bmi1m RNA和蛋白表达,选择有效干扰组进行体内实验.构建GBC-SD裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为sh RNA-Bmi-4组(实验组)、sh RNA-Scramble(错配组),Lipofectamine(阴性对照组),GBC-SD(空白对照组).成瘤后进行移植瘤治疗,治疗6周后处死裸鼠,免疫组化检测裸鼠移植瘤h TERT蛋白表达水平.结果成功构建了sh RNA-Bmi1重组载体.转染胆囊癌48 h后倒置荧光显微镜观察发现sh RNA-Bmi1-4组GBC-SD绿色荧光强度增强、转染效率最高,RT-PCR及Western blot结果显示sh RNA-Bmi1-4组m RNA及蛋白表达量均明显低于各对照组(P<0.05),对照组间表达量差异无统计学意义(P>0.05).选取sh RNA-Bmi1-4组作为有效干扰序列作后续体内实验.免疫组化检测sh RNA-Bmi-4组裸鼠移植瘤h TERT蛋白表达水平明显低于各对照组(P<0.05),对照组间蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05).结论体外成功构建了sh RNA-Bmi1重组载体,顺利进行重组载体的转化和转染实验。靶向沉默Bmi1基因可有效促进胆囊癌细胞Bmi1m RNA降解、抑制其蛋白的表达,同时有效抑制GBC-SD裸鼠移植瘤h TERT蛋白表达.
- 王琨魏东邹浩戈佳云李晓王琳张小文
- 关键词：GBC-SD皮下移植瘤
- 重组pcDNA 3.0-WWOX构建对胆囊癌细胞表达及△Ψm的影响被引量：1
- 2016年
- 目的体外构建及鉴定Pc DNA3.0-WWOX真核表达载体,探讨过表达WWOX对人胆囊癌细胞WWOXm RNA表达、蛋白表达及跨膜电位(△Ψm)的影响.方法提取人胆囊癌细胞总RNA,RT-PCR反应合成WWOX的c DNA,PCR产物回收纯化.目的基因WWOX和pc DNA3.0载体经限制性内切酶ECORⅠ和XhoⅠ酶切,将双酶切WWOX片段与pc DNA 3.0载体在T4 DNA连接酶的作用下进行连接重组.pc DNA 3.0-WWOX重组质粒转化后,提取质粒经双酶切鉴定及测序鉴定.将pc DNA 3.0-WWOX重组质粒转染人胆囊癌GBC-SD细胞,应用RT-PCR、Western Blot检测WWOX基因的表达水平、JC-1染色检测胆囊癌细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)变化.结果成功构建了pc DNA3.0-WWOX重组载体,经测序DNA序列与Gene Bank中WWOX序列一致.成功转染pc DNA3.0-WWOX重组质粒至胆囊癌GBC-SD细胞中.RT-PCR及Western blot结果显示:胆囊癌GBC-SD细胞转染pc DNA3.0-WWOX重组质粒48 h后pc DNA-3.0-WWOX组灰度比值明显高于各对照组(P<0.05),对照组间m RNA表达量差异无统计学意义(P>0.05).pc DNA3.0-WWOX组蛋白表达灰度比值均明显高于各对照组(P<0.05),对照组间蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05).pc DNA3.0-WWOX组细胞线粒体内绿色荧光信号较对照组增高(P<0.05),而对照组间细胞线粒体内绿色荧光信号差异无统计学意义(P>0.05).结论体外成功构建了Pc DNA3.0-WWOX重组载体,顺利进行了重组载体的转化和转染实验.靶向Pc DNA3.0-WWOX重组载体可有效抑制胆囊癌细胞WWOXm RNA降解,促进其蛋白的表达,同时有效促进细胞的早期凋亡.WWOX可能参与线粒体依赖的凋亡途径调控胆囊癌细胞的生长.
- 魏东杨珮吴雪松戈佳云施智甜王琳邹浩张小文
- 关键词：胆囊癌细胞跨膜电位
- 脆性位点基因WWOX调控人胆囊癌细胞的体外增殖效应被引量：3
- 2016年
- 目的探讨脆性基因WWOX调控胆囊癌细胞的增殖效应及其机制.方法将前期成功构建的pc DNA3.0-WWOX重组质粒按脂质体介导转染GBC-SD细胞,同时转染空载体、脂质体为阴性对照及GBC-SD为空白对照.转染48 h后采用倒置显微镜观察各组胆囊癌细胞形态学变化,MTT、Brd U检测胆囊癌细胞增殖水平,流式细胞仪检测细胞增值周期的变化.结果倒置显微镜观察pc DNA3.0-WWOX组GBC-SD细胞数量明显减少,悬浮细胞及细胞碎片增加,而Vector control、NC、Mock组细胞呈正常增殖状态.MTT检测显示pc DNA3.0-WWOX组GBC-SD细胞增殖于24 h、48 h、72 h、96 h、120 h低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),并随时间推移,pc DNA3.0-WWOX组细胞增殖活性抑制明显.Brd U检测显示pc DNA3.0-WWOX组细胞增殖率为(0.44±0.03),对照组分别为(0.78±0.02),(0.81±0.01),(0.85±0.01),表明pc DNA3.0-WWOX组细胞增殖活性较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05).细胞周期检测发现pc DNA3.0-WWOX组G0/G1期细胞增多,G2/M期和S期细胞减少,细胞凋亡率较对照组(Vector control,NC,Mock)明显增高、增殖指数下降(P<0.05),而对照组间差异无统计学意义(P>0.05).结论过表达WWOX基因体外可有效抑制胆囊癌细胞增殖活性,WWOX可能参与胆囊癌细胞恶性生物学行为的发展过程,有望成为胆囊癌基因治疗新的潜在靶点.
- 魏东张小文李越华施智甜王琳吴雪松邹浩
- 关键词：GBC-SD重组质粒增殖
