国家自然科学基金(31160186) 作品数:10 被引量:138 H指数:5 相关作者: 曾幼玲 杨瑞瑞 易小娅 赵丽娟 张玉芳 更多>> 相关机构: 新疆大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 新疆维吾尔自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
盐爪爪液泡膜H^+-ATPase B亚基基因克隆及盐胁迫液泡膜相关基因的表达 2015年 【目的】研究藜科盐生植物盐爪爪(Kalidium foliatum)V-H+-ATPase B亚基基因的克隆与液泡膜相关基因的表达分析。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆盐爪爪V-H+-ATPase B亚基基因(VHAB),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析液泡膜相关基因Kf VHA-B、Na+/H+逆向转运蛋白基因Kf NHX的表达情况。【结果】Kf VHA-B全长1 881 bp,含1 467 bp的ORF阅读框,命名为Kf VHA-B(Gen Bank登录号:EF114316),编码488个氨基酸,推测的蛋白分子量大小为54.01 k D,理论等电点为4.68,含一个保守的ATP结合位点‘323-SGSIT-327’和两个推测的多聚腺苷酸化的信号保守序列;基因编码蛋白的系统进化树分析表明,盐爪爪VHA-B与盐穗木的VHA-B聚类关系最近;qRT-PCR检测了液泡膜相关基因Kf VHA-B、Na+/H+逆向转运蛋白基因Kf NHX的表达,100、500 mmol/L Na Cl处理下,Kf VHA-B在转录水平表达量始终保持较稳定,Kf NHX基因在转录水平随盐浓度的增加其表达量呈现递增趋势,而且100 mmol/L Na Cl处理下72 h时其表达量达到最大。【结论】Kf VHA-B可能在盐爪爪应对盐胁迫中起着重要的作用。 易小娅 杨瑞瑞 曾幼玲关键词:盐爪爪 液泡膜H^+-ATPASE B亚基 盐胁迫 克隆 植物miRNA的生物学特性及在环境胁迫中的作用 被引量:14 2016年 MicroRNA(miRNA)是一类在生物体内普遍存在的非编码、长度约为21 nt的小RNA分子,一般由内源基因编码,RNA聚合酶Ⅱ转录后,经过Dicer-Like酶等一系列的蛋白复合物将pre-miRNA(precursor miRNA)剪切成成熟miRNA,在转录及转录后水平介导靶mRNA转录沉默、降解或翻译抑制来调控基因的表达,是真核细胞基因表达的重要调控因子。第一个miRNA是在秀丽隐杆线虫(C.elegans)中发现的lin-4,与lin-14 mRNA 3′UTR的碱基序列部分互补,降解lin-14,从而抑制lin-14的表达。lin-4对靶基因lin-14的调控与线虫的生长发育密切相关。而第一个发现的植物miRNA是拟南芥mi R171,它靶向剪切编码基因Scarecrow-Like(SCL)家族的mRNA,调控其基因的表达,进而影响植物的生长发育。植物部分miRNA,如mi R156—mi R408在各植物物种中相对保守,而mi R408以后的miRNA具有物种特异性。植物在生长过程中会遭遇诸多不可预知(如同盐碱、干旱、重金属以及害虫和病原菌的侵扰等)的环境胁迫。固着生长的特性使得植物不能像动物那样通过移动来避免不利环境的影响,因此,需要自身特殊机制来应对这些环境胁迫。植物在长期逆境中已进化出极为精细复杂的生理和分子机制。miRNA与它作用的靶基因是响应环境胁迫的主要调控因子。miRNA参与了植物的生长发育、信号转导、蛋白质降解、营养胁迫、抗病原菌的入侵以及适应高盐和干旱等逆境胁迫过程,对于调节内源抗性基因表达具有一定意义。目前通过高通量测序、实时定量PCR检测和转基因等技术已经发现了很多与环境胁迫相关的miRNA,它们在逆境胁迫下的表达呈现显著差异性;miRNA的过表达植株经逆境胁迫处理可能表现出一定的抗逆或敏感性。同一家族的miRNA不同成员在响应环境胁迫时具有物种特异性。新疆地区是典型的大陆性干旱气候,降水量少,盐碱荒漠化地区多。在这样严酷的环� 曾幼玲 杨瑞瑞关键词:植物MICRORNA 生物合成 植物NAC转录因子的生物学功能 被引量:24 2019年 在长期进化过程中,植物体内形成精密的调控机制来抵御环境胁迫,转录因子在转录水平调控胁迫相关基因的表达进而参与调控植物的抗逆反应。NAC (NAM、ATAF1/2、CUC2)是植物特有的最大的转录因子家族之一,具有独特的结构特征,由保守的N端结构域和多变的C端转录激活域组成。很多物种的NAC转录因子已经被发现并进行了功能鉴定。一般而言,同源进化关系上属于同一家族的NAC转录因子具有相似的生物学功能。近年来,对NAC转录因子生物学功能的研究不断深入,表明NAC转录因子可以通过植物激素信号通路广泛调控植物的生长发育,如器官边界的建成、次生壁和根的生长、衰老过程等植物生命历程,并响应多种非生物和生物胁迫。本文综述了植物NAC转录因子参与生长发育、响应胁迫等生物学过程的研究进展,为深入探讨其调控机理及更好地将NAC基因应用于农业生产提供参考。 张慧珍 白雪芹 曾幼玲关键词:NAC 生物学功能 盐生植物盐爪爪液泡膜钠氢反向运输载体基因(KfNHX1)遗传转化拟南芥的耐盐性鉴定 被引量:3 2021年 【目的】研究盐爪爪液泡膜Na^(+)/H^(+)反向运输载体KfNHX1(AY825250)基因的耐盐功能,为耐盐育种提供候选基因。【方法】采用农杆菌介导花序浸染的方法,将KfNHX1转入拟南芥中,结合基因组PCR和RT-PCR方法鉴定符合3∶1分离比的转基因株系;利用在盐胁迫下的萌发率、根长和表型分析,结合原子吸收分光光度计法测定叶片的Na^(+)、K^(+)含量,推断其耐盐性。【结果】对抗生素筛选符合3∶1的转基因纯合株系进行基因组PCR和RT-PCR分析,证实KfNHX1基因在拟南芥基因组中整合和表达。盐胁迫下转基因株系的拟南芥种子的萌发率和根长明显高于野生型。200 mM NaCl胁迫处理15 d的拟南芥成苗,相较野生型叶片萎黄和死亡,转基因植株的生长表型较好,且积累了较高的Na^(+)和K^(+)。外源ABA的处理下,转基因植株的发芽率和生长表型也好于野生型。【结论】盐爪爪(Kalidium foliatum)是一种藜科(Chenopodiaceae)盐生灌木,对盐的耐受性很强。液泡膜Na^(+)/H^(+)反向运输体(NHX)是在离子稳态中起重要作用的膜蛋白,通过调节胞间离子的跨膜转运来维持细胞内离子和pH平衡。盐生植物盐爪爪KfNHX1能够提高转基因拟南芥的耐盐性,具有提高植物耐盐性的潜力。 银芳柳 毛晓菲 曾幼玲关键词:盐生植物 盐爪爪 耐盐性 拟南芥 基因表达研究中内参基因的选择与应用 被引量:77 2014年 管家基因是一类无组织特异性的,在物种的所有组织细胞中都表达的基因,被广泛用作内参基因来检测目标基因在不同的组织器官、一定的发育阶段或胁迫的环境条件下的表达规律变化。这些管家基因并不是在所有生理条件下都能作为理想内参基因稳定表达。在基因表达转录分析中,大多数普遍使用的内参基因已不能满足准确定量的要求。基于统计学分析软件,如geNorm、BestKeeper和NormFinder三种分析软件,可以筛选出稳定性较好的内参基因。本文综述了内参基因的选择条件、方法及应用。 张玉芳 赵丽娟 曾幼玲关键词:基因表达 内参基因 盐穗木HcmiR172e和预测的靶基因HcTOE3的克隆及盐胁迫下的靶向关系分析 2016年 盐穗木(Halostachys caspica)广泛分布于新疆干旱盐碱地区,属于藜科极端耐盐的盐生灌木。从600 mmol?L-1 Na Cl处理48 h的盐穗木根的小RNA文库中筛选到差异极显著的HcmiR172e做为研究对象,利用盐穗木转录组数据预测其靶基因为HcTOE3,开展HcmiR172e-HcTOE3的分子克隆和胁迫表达相关性工作。通过同源克隆和RACE技术获得盐穗木HcmiR172e前体和HcTOE3全长序列;使用生物信息软件分析前体和靶基因信息及相关性;采用q RT-PCR技术检测了不同盐浓度(200、400和600 mmol?L-1 Na Cl)处理48 h的盐穗木HcmiR172e及预测的靶基因HcTOE3的表达变化。结果显示,克隆得到的HcmiR172e前体序列可形成颈环结构,各项指标符合前体要求。其靶基因HcTOE3 c DNA全长为1 744 bp,开放阅读框1 329 bp,在编码区有一个高度匹配HcmiR172e的结合位点(CTGCAGCATCATCAGGATTC);q RT-PCR分析结果表明HcmiR172e与其预测的靶基因HcTOE3均响应盐的处理,二者呈现一定的负相关性。后续将通过实验逐步阐明盐穗木HcmiR172e对HcTOE3在逆境中的靶向调控作用。 张玉芳 杨瑞瑞 曾幼玲关键词:盐穗木 盐胁迫 克隆 QRT-PCR 盐胁迫下盐穗木miR393b与预测靶基因Hc TIR1的表达及相关性 2019年 【目的】研究盐胁迫下盐穗木生长素通路中miR393b和预测的靶基因 TIR1 的表达模式和相关性。【方法】采用生物信息学方法预测盐穗木miR393b的靶基因;通过qRT-PCR方法检测盐胁迫下盐穗木miR393b及预测靶基因 HcTIR1 ( transport inhibitor response1 )的相对表达模式,并分析其相关性。【结果】 miR393b成熟体在不同植物种中高度保守;盐穗木miR393b预测的靶基因为 TIR1;盐胁迫处理,盐穗木同化枝中两基因响应高盐胁迫,并具有一定的负相关性。【结论】盐穗木miR393b和预测的靶基因响应高盐胁迫,二者具有一定的负相关。该结果为进一步探讨盐穗木miR393b与预测靶基因 TIR1 的生物学功能奠定基础。 王鹏举 黄世平 杨瑞瑞 曾幼玲关键词:盐穗木 盐胁迫 植物miRNA的研究方法概述 被引量:5 2015年 microRNA(miRNA)是动植物中广泛存在的内源性非编码小RNA分子,通过与靶基因mRNA的特定位点结合,在转录后水平负调控靶标基因的表达。植物miRNA几乎调控所有的生物学和代谢过程,包括生长发育、细胞维持和分化、信号转导以及对逆境胁迫的响应。随着第二代深度测序技术和生物信息学的快速发展,miRNA的相关研究已从模式植物扩展到非模式植物,发现了大量新的miRNA,并确定了小部分miRNA的生物学功能。由于miRNA序列短小,与靶标基因作用的不确定以及调控网络的复杂性,研究难度较大。本文从研究方法的角度对miRNA的鉴定、靶基因的验证和miRNA功能研究等方面所涉及的方法进行总结,试图为植物miRNA的研究提供一些思路和启发。 易小娅 杨瑞瑞 曾幼玲关键词:植物MIRNA 靶基因 研究方法 植物逆境相关C2H2型锌指蛋白的研究进展 被引量:15 2016年 锌指蛋白是转录因子的一种,因其具有指状结构特征且能结合Zn2+而得名。植物C2H2型锌指蛋白是研究较多、较为明确的一种,大多包含特有的QALGGH保守结构。该蛋白广泛参与到植物的生长发育和逆境胁迫信号转导过程中。本研究主要综述了植物C2H2型锌指蛋白的结构、功能、分类及逆境相关的作用机制,概括了C2H2型锌指蛋白在参与植物非生物和生物胁迫耐受性的研究成果,并对其进一步的深入研究进行了展望,为将来利用锌指蛋白基因提高作物抗逆性提供较为全面的资料。 赵丽娟 易小娅 曾幼玲关键词:逆境胁迫 真盐生植物盐穗木HcWD-40蛋白的亚细胞定位 2013年 【目的】WD-repeat蛋白是一类结构高度保守的蛋白质家族,常分布于细胞质或细胞核内,具信号转导、染色体组装,转录调控等多种功能。实验对极端耐盐的藜科真盐生植物盐穗木的WD-40蛋白进行亚细胞定位,初步探讨该基因参与盐穗木耐盐抗旱的机制。采用绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,对真盐生植物盐穗木HcWD-40基因的表达产物进行亚细胞水平定位。【方法】PCR扩增获得序列正确的HcWD-40,构建pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP融合基因表达载体,采用伯乐(Bio-RAD)基因枪介导的方法转化到洋葱表皮细胞中,28℃暗培养16~24 h后,以仅表达GFP的洋葱细胞作为对照,利用激光共聚焦显微镜观察GFP在洋葱表皮细胞中的分布。【结果】重组载体pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP可成功转入洋葱表皮细胞且HcWD-40蛋白正确表达。激光共聚焦显微镜检测结果表明该基因表达产物分布于细胞质与细胞核中。【结论】目的蛋白HcWD-40定位于细胞质和细胞核内,可能间接或直接参与多种细胞过程的调控。 李玲 杨瑞瑞 易小娅 曾幼玲关键词:盐穗木 亚细胞定位