国家教育部博士点基金(20115317110001)
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 相关作者：李彦林王慧建王鑫曹树海陈建明更多>>
- 相关机构：昆明医科大学湖南省第二人民医院永州市中心医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金云南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ad-BMP-2、Ad-TGF-β3转染BMSCs复合DBM构建软骨修复猪关节软骨缺损的研究被引量：4
- 2014年
- 目的:观察腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2(Ad-BMP-2)和转化生长因子-β3(Ad-TGF-β3)双基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs),复合脱钙骨基质(DBM)构建新型组织工程软骨修复猪关节软骨缺损的效果。方法:成年滇南小耳猪8头,16膝,制作32个全层软骨缺损模型。A组植入双基因转染的BMSCs+DBM,B组植入未经转染的BMSCs+DBM,C组单纯植入DBM,D组为空白对照;术后2、4、8、12周取材进行形态学和组织学观察。结果:术后12周,A组缺损区被软骨样组织修复,HE染色显示有典型的透明软骨结构,D组软骨缺损主要由纤维组织充填。O′driscoll评分A、B、C、D组组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3双基因转染的猪BMSCs复合DBM构建的组织工程软骨可有效修复关节软骨缺损。
- 王鑫李彦林金耀峰陈建明王慧建何川曹树海赵沣凯
- 关键词：脱钙骨基质软骨缺损
- 关节镜下前交叉韧带保残重建治疗新进展被引量：8
- 2015年
- 膝关节前交叉韧带（anterior cruciate ligament,ACL）保残重建术是近几年发展起来的治疗ACL断裂最常用的外科手术。可以尽可能的恢复它的解剖结构,恢复膝关节稳定性,并可能防止膝关节骨关节炎的提前发生。本文对前交叉韧带残端的分型、保残重建的优越性、方法及现状进行了综述,并对研究中不明确的问题及研究方向进行了展望。在过去的15年中,对于ACL的认识有了长足的发展。
- 尤志敏李彦林黄赞李建
- 关键词：膝关节前交叉韧带关节镜膝关节骨关节炎膝关节稳定性ACL
- TGF-β_3基因转染诱导滇南小耳猪BMSCs向软骨分化的初步研究被引量：6
- 2014年
- 目的观察TGF-β3基因转染滇南小耳猪BMSCs后目的基因的表达和向软骨细胞分化的作用。方法以血清5型重组腺病毒（recombinantadenovirus5，rAd5）构建系统为基因载体，包装为重组腺病毒rAd5．TGF-β3，行双酶切及PCR鉴定。采集2月龄滇南小耳猪（体重12～15kg）骨髓分离培养制备BMSCs，取第2代细胞用于实验。将实验分为3组，实验组和对照组分别用rAd5-TGF-β3人腺病毒阴性空病毒载体转染BMSCs，以未转染的BMSCs为空白对照组。流式细胞仪检测转染效率，免疫荧光染色、Westernblot检测各组TGF-β3蛋白表达情况；培养后各时间点倒置相差显微镜观察细胞形态变化，Westernblot检测各组II型胶原蛋白表达情况。结果rAd5-TGF．瞰重组腺病毒成功构建并转染BMSCs，在细胞内表达并迅速扩增，免疫荧光显微镜下可观察到强绿色荧光。流式细胞仪检测示转染72h时病毒达最佳转染效果（转染效率为84．86％）。免疫荧光染色示，rAd5．TGF-β3转染BMSCs72h，细胞质内有明显TGF-β3蛋白表达；转染后7、21dWesternblot检测示，实验组在相对分子质量为30×10^3处有TGF-β3阳性条带，而对照组和空白对照组均呈阴性。转染后体外培养，倒置相差显微镜下示实验组向软骨细胞分化明显。培养21d时Westernblot检测示，实验组在相对分子质量为130×10^3处有II型胶原阳性条带，对照组和空白对照组均呈阴性。结论重组腺病毒tAd5．TGF-β3可成功转染BMSCs,TGF-β3蛋白可稳定表达，并促使BMSCs向软骨细胞方向分化，为软骨缺损修复的局部基因治疗奠定了实验基础。
- 王慧建李彦林陈建明王鑫赵沣凯曹树海
- 关键词：BMSCS软骨分化基因转染
- BMP-2、TGF-β_3重组腺病毒载体的构建及其在滇南小耳猪BMSCs中的表达被引量：3
- 2014年
- 目的构建含BMP-2和TGF-β3基因的重组腺病毒载体,双基因共转染滇南小耳猪BMSCs并检测其表达,为组织工程软骨支架提供改良的种子细胞。方法用PCR方法扩增人BMP-2和TGF-β3目的基因,将2个基因亚克隆至穿梭载体pEC3.1(+)中,构建pEC-GIE3.1-BMP-2和pEC-GIE3.1-TGF-β3重组质粒,通过体外同源重组反应将pEC-GIE3.1-BMP-2、pEC-GIE3.1-TGF-β3重组至腺病毒骨架质粒pGSadeno中,构建重组腺病毒表达质粒pGSadenoBMP-2、pGSadeno-TGF-β3,线性化后转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3。取成年滇南小耳猪的骨髓,采用离心加贴壁法分离BMSCs,分别用基因Ad-BMP-2(A组)、Ad-TGF-β3(B组)和Ad-BMP-2+AdTGF-β3(C组)转染,以未转染细胞作为对照(D组)。采用免疫荧光、Western blot、PCR检测目的基因和蛋白表达,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察成软骨分化情况。结果 Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3经PCR及测序鉴定正确,带BMP-2、TGF-β3基因的载体在HEK293细胞中包装成功,病毒滴度分别为5.6×108、1.6×108 pfu/mL。双基因共转染滇南小耳猪BMSCs 72 h后,PCR示A组在310 bp处可见条带,B组在114 bp处可见条带,C组在310、114 bp处同时可见条带,D组未见目的条带表达;免疫荧光示A、B组细胞质内有分别有红色、绿色荧光表达,C组同时表达红色及绿色荧光,D组未见荧光表达;Western blot示A组在相对分子质量为18×103处有阳性条带,B组在50×103处有阳性条带,C组在18×103、50×103处同时可见条带,D组未见目的条带表达。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示A、B、C组呈阳性,C组染色强于A、B组,D组染色呈阴性。结论成功构建含BMP-2和TGF-β3基因的重组腺病毒载体。Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3双基因联合转染滇南小耳猪BMSCs后目的基因和蛋白均可成功表达,并促进BMSCs成软骨分化,可作为组织工程软骨研究的改良种子细胞。
- 王鑫李彦林金耀峰陈建明王慧建何川曹树海赵沣凯
- 关键词：组织工程软骨腺病毒BMSCS基因转染BMP-2TGF-Β3
- AMD3100体内干预SDF-1/CXCR4信号通路对关节软骨组织退变的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)特异性拮抗剂AMD3100体内干预SDF-1/CXCR4信号通路对关节软骨组织退变的影响。方法:取6月龄雄性Hartley豚鼠36只随机分成3组,每组12只。A组(实验组):每只背部皮下植入Alzet微量泵,内含PBS液稀释过的AMD3100,每天以180μg/ml的浓度泵入;B组(实验对照组):每只皮下植入Alzet微量泵,内含PBS液;C组(空白对照组):不做任何处理。常规饲养至12周后处死Hartley豚鼠,取下双膝关节软骨,对膝关节软骨组织块行HE、番红染色,采用Mankin组织学评分,免疫组化检测软骨组织中IL-1、TNF-α的表达。结果:HE及番红染色结果:实验组比实验对照组和空白对照组的软骨退变程度轻,实验组Mankin组织学评分结果低,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测结果:实验组较实验对照组和空白对照组的IL-1、TNF-α表达量低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AMD3100可体内干预SDF-1/CXCR4信号通路,阻断SDF-1与软骨组织表面的CXCR4受体结合,减轻软骨组织的退变。
- 李建李彦林王鑫王国梁何川尤志敏黄赞
- 关键词：基质细胞衍生因子1趋化因子受体4信号通路
