河南省基础与前沿技术研究计划项目(122300410003)
- 作品数：5 被引量：16H指数：2
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- 相关机构：新乡学院新乡市动物疫病预防控制中心河南科技学院更多>>
- 发文基金：河南省基础与前沿技术研究计划项目国家自然科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化被引量：8
- 2016年
- 以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0μg/mL和1∶200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37℃1h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1∶10 000和37℃45min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。
- 冯春花朱艳平郭东光岳锋
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白间接ELISA抗体检测
- 猪瘟病毒E0蛋白的原核表达及鉴定被引量：5
- 2014年
- 为获得猪瘟病毒(CSFV)E0重组蛋白,建立CSFV抗体快速检测方法。本研究通过扩增CSFV C株E0基因,亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-2-E0,转化至宿主菌Rostta(DE3)后进行诱导表达。SDS-PAGE检测表明与目的蛋白大小一致,其分子质量大小为46ku。优化重组蛋白表达条件,最终获得诱导表达的最佳温度为37℃,最佳IPTG浓度为0.1mmol/L,并且目的蛋白以包涵体形式存在。Western blot表明,目的蛋白能与CSFV兔化高免血清反应,表明该融合蛋白具有良好的抗原性。本研究为CSFV抗体检测试剂盒的研究奠定了基础。
- 郭东光朱艳平孙国鹏岳峰贾文科王军李鹏王自浩王选年
- 关键词：猪瘟病毒蛋白
- 结构蛋白VP4、VP6和VP7对牛轮状病毒的致病作用被引量：1
- 2018年
- 牛轮状病毒是引发犊牛严重腹泻的重要病原体,其结构蛋白VP4、VP6与VP7三者的相互作用对病毒的组装与感染发挥着至关重要的作用。在病毒感染过程中,VP4可以影响VP7的抗原性,而VP7通过反向调节VP4又可以影响病毒体对宿主细胞的特异性吸附作用,此外,三者在结构上的特异性分布,不仅可以构成病毒框架和稳定VP4、VP7的空间结构,而且可以增强它们的免疫原性。所以,对结构蛋白VP4、VP6和VP7在结构上和生物学特性上的认识,对于今后在治疗和预防轮状病毒性疾病具有非常重要的生物学意义。
- 冯春花郭东光郭东光
- 关键词：轮状病毒
- 猪瘟病毒NS2-3抗原集中区基因的原核表达及鉴定
- 2013年
- 为获得猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)NS2-3抗原集中区蛋白,并建立CSFV抗体快速检测方法。本研究以CSFV全长基因组质粒为模板,PCR扩增NS2-3抗原表位集中区,利用扩增片段和克隆载体,构建重组表达质粒,命名为pET32a-NS2-3-1。重组表达质粒转化Rosetta(DE3)细胞,利用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定重组表达产物。结果表明,重组质粒pET32a-NS2-3-1在28℃诱导5h得到高效表达,重组蛋白能够与兔抗CSFV阳性血清发生反应。获得CSFVNS2-3抗原集中区蛋白,并且获得的重组蛋白具有抗原性,能够作为CSFV抗体检测的抗原。
- 刘卫朱艳平宁红梅银梅郭东光鲁毅王选年
- 关键词：猪瘟病毒抗原表位原核表达免疫印迹
- 猪瘟病毒E2蛋白抗原表位集中区的原核表达及鉴定被引量：2
- 2013年
- 为获得猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白抗原表位集中区原核重组目的蛋白,建立CSFV抗原和抗体快速检测方法。通过扩增CSFV E2蛋白抗原表位集中区基因,亚克隆至表达载pET-30a(+),构建重组原核表达载体pET-30a-E2-1,转化至宿主菌Rostta(DE3)后进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示,出现与目的蛋白大小一致的蛋白条带,分子质量大小为31ku。对重组蛋白表达条件进行优化,最终获得其诱导表达的最佳温度为18℃,最佳IPTG浓度为0.1mmol/L。目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白含量的46%。Western blot分析显示,目的蛋白不仅能与兔抗CSFV高免血清反应,还可以与载体特异性标签His单抗反应,表明融合蛋白具有良好的抗原性,为CSFV抗原和抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 郭东光朱艳平银梅宁红梅潘耀谦刘卫陈明艳王选年
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白抗原表位原核表达
