湖南省自然科学基金(12JJ2016)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：黎明姚芳玲黄玉梅李轩岸雷光华更多>>
- 相关机构：中南大学湖南航天医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- His标记STAT4(565-748氨基酸)肽段融合蛋白原核表达及纯化被引量：1
- 2018年
- 目的:构建His标记的人STAT4 C-端565-748氨基酸肽段原核表达载体,埃希氏菌中诱导表达,并纯化蛋白。方法:PCR扩增编码STAT4 C-端565-748氨基酸肽段的基因片段,克隆到pET-28a原核表达载体,转化感受态细菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,经包涵体变性、复性、树脂纯化、透析。免疫印迹鉴定纯化的融合蛋白。结果:PCR扩增获得目的片段,克隆到pET-28a,转化感受态细胞,IPTG诱导发现融合蛋白存在于包涵体。经变性、复性、树脂纯化和透析,免疫印迹实验发现融合蛋白表达、被纯化。结论:成功构建人STAT4(565-748aa)肽段原核表达质粒并获纯化融合蛋白。
- 贺美徐艳姚芳玲邹纯于颍黎明
- 关键词：STAT4蛋白表达
- 人STAT4基因真核表达载体构建和在HEK293细胞中表达
- 2013年
- 目的构建STAT4基因的真核表达载体,在人胚肾细胞系HEK293中表达。方法设计引物、采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获得STAT4的cDNA全长序列,在PCR产物两端加上SalI和BamHI限制性内切酶识别序列,将pEGFP-C1载体和PCR产物用SalI和BamHI进行双酶切,将STAT4 cD-NA定向克隆到pEGFP-C1中,从而构建了重组质粒pEGFP-STAT4;经酶切和测序鉴定正确后,将pEGFP-STAT4体外转染HEK293细胞,瞬时表达带有GFP标签的STAT4融合蛋白;采用荧光显微镜技术和免疫印迹技术检测融合蛋白的表达。结果 RT-PCR扩增了2 247 bp的STAT4 cDNA全长,经测序分析与GenBank中已知序列一致;重组质粒pEGFP-STAT4转染HEK293细胞中,可检测到瞬时表达的GFP-STAT4融合蛋白。结论成功构建重组质粒pEGFP-STAT4,在真核细胞HEK293中能被表达。
- 李轩岸黄玉梅姚芳玲范洁琳雷光华黎明
- 关键词：STAT4基因克隆真核表达
- 褐藻糖胶促进小鼠巨噬细胞免疫活性及机制初探
- 2018年
- 目的探讨褐藻糖胶(Fucoidan)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响及初步探讨作用机制。方法采用体外细胞培养方法,比色分析检测不同浓度Fucoidan(0、100、200、300、400、500μg/mL)作用下RAW264.7吞噬中性红的能力,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度Fucoidan(0、50、250、500μg/mL)作用下RAW264.7增殖,Western Blotting检测Fucoidan诱导的RAW264.7的MAPK/ERK1/2的磷酸化。结果Fucoidan剂量依赖性地促进RAW264.7吞噬功能和增殖功能。200μg/mL Fucoidan作用10 min即使ERK1/2发生磷酸化,30min时ERK1/2磷酸化达到最大值。结论 Fucoidan可提高小鼠巨噬细胞的吞噬活性和增殖能力,其机制可能与Fucoidan直接激活RAW264.7的MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。
- 范洁琳黎明
- 关键词：褐藻糖胶免疫活性巨噬细胞
