江苏省自然科学基金(BK2006220)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
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- 相关机构：江南大学南京师范大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 海栖热袍菌葡萄糖异构酶基因xylA的克隆、表达及酶学性质被引量：1
- 2008年
- 海栖热袍菌（Thermotoga maritima）是嗜极端高温的厌氧细菌，其产生的葡萄糖异构酶由于其出色的耐热性有着潜在的工业应用价值。由于海栖热袍菌苛刻的培养条件导致其葡萄糖异构酶产量较低。通过PCR方法克隆编码zmaritimaMSB8葡萄糖异构酶基因xylA，构建重组质粒pHsh—xylA，转入EscherichiacoliJMl09，通过热激诱导表达。通过热处理和离子交换层析纯化两步得到电泳纯的酶制品，纯化倍数和回收率分别为8．02和49．02。对酶学性质研究表明，该重组酶为金属离子激活性酶，Mg^2＋，Co^2＋对相对酶活有很强的激活作用，其最适pH为7．0，最适反应温度为95℃，且在pH6-8之间有着较好的稳定性，在95℃下半衰期长达5h以上。以葡萄糖为底物时的表观Km和Kmax、分别为105mmol／L和45．2mol／min·mg。
- 王一帆裴建军邵蔚蓝段作营李华钟
- 关键词：葡萄糖异构酶海栖热袍菌酶学性质
- 极耐热性阿拉伯糖苷酶在木糖制备中的应用被引量：7
- 2007年
- 阿拉伯糖苷酶作为木聚糖降解的限速酶之一,在植物残体的生物转化、食品加工、饲料工业以及纸浆漂白中具有广泛的应用潜力。实验中选择pET—28a作为表达载体,优化核糖体结合位点RBS与起始密码子ATG间距离,使来自海栖热袍菌(Thermotoga maritima)极耐热性阿拉伯糖苷酶得到高效表达,重组酶蛋白经一步热处理后纯度达到90%以上;木聚糖酶解试验结果表明,阿拉伯糖苷酶和木聚糖酶间存在协同作用;阿拉伯糖苷酶与木聚糖酶和β-木糖苷酶联合水解木聚糖能明显提高酶解产物中木糖含量,因此,开发极耐热性阿拉伯糖苷酶在酶法制备木糖中的应用具有重要的经济效益和社会效益。
- 薛业敏于瑾瑾戴军陈尚卫邵蔚蓝
- 关键词：木糖
- 海栖热袍菌α-葡萄糖苷酶基因aglA的克隆、表达及酶学性质
- 2011年
- 主要研究了在大肠杆菌中克隆和表达海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的一个α-葡萄糖苷酶(TM1834)。通过PCR方法克隆编码T.maritima的一个α-葡萄糖苷酶基因aglA,构建重组质粒pHsh-AglA,电击转化Escherichia coli JM109,通过热激诱导高效表达。SDS-PAGE检测出蛋白相对分子质量约55 000,经热处理,阴离子交换层析和疏水层析纯化后的α-葡萄糖苷酶最适反应温度为90℃,最适反应pH为7.5,在pH 6.5～8.5,温度65～100℃之间酶活仍达到50%以上。在辅助因子NAD+,Mn2+和还原剂DTT的存在条件下达到最高酶活。
- 王月宏段作营邵蔚蓝李华钟
- 关键词：Α-葡萄糖苷酶海栖热袍菌酶学性质
