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国家教育部博士点基金(20122325110019)

作品数：11 被引量：37H指数：4
相关作者：任晓峰任玉东李广兴李训良曹丽艳更多>>
相关机构：东北农业大学哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司更多>>
发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
相关领域：农业科学环境科学与工程生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 10篇农业科学
  • 1篇生物学
  • 1篇环境科学与工...
  • 1篇医药卫生

主题

  • 11篇病毒
  • 4篇猪传染性胃肠...
  • 4篇猪传染性胃肠...
  • 4篇胃肠炎
  • 4篇胃肠炎病毒
  • 4篇肠炎
  • 4篇肠炎病毒
  • 4篇传染
  • 4篇传染性
  • 4篇传染性胃肠炎
  • 4篇传染性胃肠炎...
  • 3篇蛋白
  • 3篇原核表达
  • 3篇猪流行性腹泻
  • 3篇猪流行性腹泻...
  • 3篇流行性
  • 3篇流行性腹泻
  • 3篇流行性腹泻病
  • 3篇流行性腹泻病...
  • 3篇抗体

机构

  • 11篇东北农业大学
  • 1篇哈尔滨动物生...

作者

  • 10篇任晓峰
  • 6篇李广兴
  • 6篇任玉东
  • 3篇曹丽艳
  • 3篇李训良
  • 2篇赵高伟
  • 2篇白云云
  • 2篇佟玲
  • 2篇孙雪娇
  • 2篇王婧婧
  • 1篇李鹏冲
  • 1篇王雪
  • 1篇邹昊
  • 1篇董博
  • 1篇张瑞莉
  • 1篇路义鑫
  • 1篇宋铭忻
  • 1篇段凤娟
  • 1篇贾文龙
  • 1篇吴宪

传媒

  • 6篇东北农业大学...
  • 4篇中国兽医科学
  • 1篇生命科学

年份

  • 2篇2016
  • 2篇2015
  • 3篇2014
  • 4篇2013
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
利用猪流行性腹泻病毒S基因真核表达质粒制备多克隆抗体被引量：1
2014年
将流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的真核表达质粒pVAX1-S作为抗原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。抗体经纯化后,利用间接ELISA、间接免疫荧光、Western Blot方法检测制备多克隆抗体的生物学活性。结果表明,用PEDV S基因真核表达质粒免疫制备的多抗血清抗体效价可达1??214,该多克隆抗体不仅可以很好地识别PEDV S蛋白,还可以特异性检测到PEDV抗原。研究为PEDV的诊断和S蛋白免疫学特性研究提供试验依据。
任晓峰王雪高睿泽董博李广兴
关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白真核表达质粒多克隆抗体
2006～2012年猪繁殖与呼吸综合征病毒东北毒株GP5和M基因变异分析被引量：4
2016年
分离鉴定三株中国东北地区PRRSV，对其主要结构蛋白GP5和M基因RT-PCR扩增和测序，同时对2006-2012年东北地区PRRSV毒株进行遗传变异分析。结果表明，三株东北地区PRRSV分离株均属于美洲型高致病性毒株，JilinTN2株和HH12株可能由JXA1变异而来，GP5基因变异较大，而M基因相对保守；一些氨基酸变异会改变GP5和M蛋白的二级结构；GP5蛋白中和表位Q40和L41的突变和诱骗表位P的新突变在2011和2012年黑龙江省PRRSV毒株中被发现，33～37aa处氨基酸的变异对潜在糖基化位点的数量和位置影响较大，可能会干扰中和抗体对紧随其后的中和表位识别，减少病毒中和抗体应答；GP5中PRRSV毒力关键位点的新突变在2012年分离株中被发现。文章揭示东北地区PRRSV流行毒株GP5基因的变异特征，PRRSV仍在不断发生变异，需针对GP5基因变异采取相应防控措施。
李广兴李沛然李鹏冲任玉东黄小丹张瑞莉吴宪
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因变异分子进化
猪轮状病毒DN30209株的驯化培养被引量：1
2013年
为获得一株猪轮状病毒弱毒疫苗的候选株,用恒河猴肾细胞(MA-104)培养之前分离的猪轮状病毒DN30209株(PRV DN30209),并对预处理病毒的胰酶的浓度及时间、维持液(DMEM)中胰酶浓度和时间等条件进行优化,在最佳培养条件下对病毒进行连续传代,检测各代次病毒的TCID50,达到最高且稳定时,用该代次的病毒免疫PRV阴性BALB/c小鼠,于免疫后不同时间检测血清特异性中和抗体效价。结果,经20μg/mL胰酶37℃孵育40min,吸附90min,在含2μg/mL胰酶的DMEM中,病毒能在MA-104稳定增殖。经60代培养病毒TCID50由最初的103.40/mL增至106.00/mL,传至第60～63代时病毒TCID50维持在106.00/mL左右,并趋于稳定。选第60代病毒免疫小鼠,2周后小鼠血清中和效价为1∶91,4周后达到1∶128。结果表明,PRV DN30209株通过传代驯化培养可以作为弱毒疫苗候选株。
赵高伟段凤娟任玉东佟玲王婧婧曹丽艳任晓峰
关键词：轮状病毒疫苗株
猪流行性腹泻病毒M蛋白亲和肽的筛选及其抗病毒作用被引量：3
2015年
把成功构建的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白的阳性重组质粒pET-32a(+)-M在大肠杆菌表达系统中进行诱导表达。以表达纯化的M蛋白作为靶蛋白,利用噬菌体展示技术对随机十二肽库进行筛选,4轮淘选后,挑选出了10个与PEDV及M蛋白特异性结合力高的噬菌体单克隆,序列测定后推导的氨基酸序列分别为AGWYCTEVLCV、AYCTRHVCYLDN,多肽被命名为M2、M9。就合成多肽体外抗病毒的效果而言,间接免疫荧光试验和实时荧光定量PCR试验证明,多肽M2、M9及多肽M2与M9联合使用均能够有效抑制病毒复制,且都呈剂量依赖性。其中多肽M2抑制病毒的作用比多肽M9的高,两种多肽联合抗病毒的作用最好。上述结果为进一步研究PEDV M蛋白功能性配体和研制防治PEDV的小分子治疗制剂提供了试验依据,奠定了理论基础。
高玉葛旭影曹丽艳李训良任玉东任晓峰李广兴
关键词：噬菌体展示猪流行性腹泻病毒M蛋白多肽抗病毒作用
猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其S基因分子生物学特征的分析被引量：7
2016年
为了解目前流行的猪传染性胃肠炎病毒（TG EV）的生物学特征及其遗传变异情况,从疑似感染TGEV的猪群中采集发病仔猪小肠,病料处理后在ST细胞上盲传,至第5代出现特征性细胞病变,通过PCR和间接免疫荧光验证,成功分离出2株TGEV,被命名为H E-1和HE-4。RT-PCR方法扩增测序其S基因,对14株TGEV S基因进化和变异情况进行分析。氨基酸比对发现,与TGEV经典毒株Purdue株相比,分离株在第562~564 aa处缺少N NT糖基化位点,与TS株相比在第375~377 aa处缺少ND T糖基化位点;同时,HE-4株在影响抗原位点D位点的第385 aa处发生突变。这种糖基化位点的缺失和抗原位点的突变,对TGEV生物学特性的影响有待进一步研究。
白云云葛旭影高睿泽李训良任玉东任晓峰李广兴宋铭忻
关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因分子生物学特征
猪繁殖与呼吸综合征病毒HH08株GP3蛋白的原核表达及其多抗血清的制备与检测
2013年
GP3蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒次要结构蛋白之一,是由ORF3基因编码一种高度糖基化糖蛋白,在病毒致病性、复制、装配、变异和保护性反应等方面具有重要意义。目前对GP3蛋白研究仍不透彻,在病毒感染细胞过程中所起作用也不清楚。试验扩增PRRSV-HH08株ORF3,连接至PGEX-6P-1载体,导入大肠杆菌内诱导表达,获得以包涵体存在GP3蛋白,纯化后作为抗原制备兔抗GP3多抗血清,Western-blotting结果表明,该蛋白与多抗血清有免疫反应,鉴于ORF3与ORF5基因保守度极低,可用于与其他蓝耳病毒株GP3或GP5蛋白为抗原制作多抗血清比较敏感性及特异性。
任晓峰刘和
关键词：PRRSV抗血清
猪流行性腹泻病毒S1蛋白截短表达及多抗制备被引量：6
2013年
文章旨在表达猪流行性腹泻病毒PEDV截短S1基因(rS1636-789),并制备特异性多克隆抗体。扩增PEDV rS1636-789基因克隆到原核表达载体PGEX-6P-1上,构建重组表达质粒PGEX-6P-1-rS1636-789,经IPTG诱导,获得以包含体形式表达重组蛋白。将重组蛋白作为免疫原制备兔抗rS1636-789抗体并进行效价测定及生物活性检测。结果表明,多抗效价达1:65 536,间接ELISA和Western blot说明此多抗可与rS1636-789重组蛋白发生很好抗原抗体反应。研究进一步定位PEDV S蛋白免疫优势区,为PEDV基因工程疫苗研究奠定基础。
任晓峰贾文龙
关键词：猪流行性腹泻病毒表位原核表达抗体制备
细胞质内模式识别受体及其抗病毒免疫研究被引量：3
2014年
先天性免疫监视机制的核心是通过模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别病毒分子诱导抗病毒防御,使宿主免受感染。PRRs表达在不同类型细胞的不同细胞区室,包括细胞膜、内体膜、溶酶体膜和胞质。病毒进入细胞区室后将被一个或多个模式识别受体所识别并激活机体的免疫反应。主要对细胞质内模式识别受体视黄酸诱导基因I样受体(retinoic acid-inducible gene I(RIG-I)-like receptors,RLRs)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体(nucleotide-binding oligomerization domain(NOD)-like receptors,NLRs)、DEXDc螺旋酶受体(DLRs)及最近发现的DNA模式识别分子——DAI(DNA-dependent activator of interferonregulatory factors)识别病毒核酸并诱导I型干扰素产生的分子机制作一综述。
曹丽艳李广兴王克雄任玉东任晓峰
关键词：先天性免疫抗病毒反应模式识别受体
猪传染性胃肠炎病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用被引量：8
2015年
根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因序列设计2对反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立针对TGEV N基因的RT-LAMP快速检测方法,并对该检测方法的特异性与灵敏性进行了评价。该方法在63℃恒温下作用50min,使TGEV N基因获得了高效率特异性扩增,与猪流行性腹泻病毒等其他猪易感病毒无交叉反应,具有很好的特异性;同时该方法具有极高的灵敏性,可检测到131.4fg/μL的目标病毒DNA,比普通PCR的灵敏度高3个数量级。反应结束后加入SYBR GreenⅠ在紫外灯下观察颜色变化,结果显示阳性扩增产物呈现绿色荧光。经47份临床样品RT-LAMP检测结果与已得到验证的RTPCR和ELISA结果进行比对,结果显示符合率为100%。
高睿泽白云云李训良任玉东任晓峰李广兴路义鑫
关键词：猪传染性胃肠炎病毒RT-LAMPRT-PCRELISA
猪传染性胃肠炎病毒M蛋白的表达与抗体制备被引量：3
2014年
文章表达猪传染性胃肠炎病毒TGEV M基因,制备抗M蛋白多克隆抗体。扩增的M基因经Bam H I和Eco R I双酶切后克隆到原核表达载体PGEX-6P-1上,构建重组表达质粒PGEX-6P-1-TGEV-M,经IPTG诱导,获得以包含体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白作为免疫原免疫大白兔制备兔抗TGEV-M抗体,进行效价测定及生物活性检测。结果表明,多抗效价达1:262 144;间接ELISA和间接免疫荧光试验说明,此多抗可与TGEV-M重组蛋白及TGEV发生抗原抗体反应。此多抗可作为鉴别诊断试剂将TGEV从众多猪源病毒中区分出来。
任晓峰邹昊孙雪娇
关键词：猪传染性胃肠炎病毒原核表达抗体制备
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