苏州市“科教兴卫工程”青年科技项目(SWKQ0811)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：申咏梅秦陈浩宋妙丽冯萍朱雪明更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第二医院苏州市立医院更多>>
- 发文基金：苏州市“科教兴卫工程”青年科技项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- bcl-2 RNAi表达载体的构建、鉴定及其对Raji细胞的干扰效果被引量：1
- 2009年
- 目的构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果。方法根据GenBank提供的bcl-2cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以酶切和DNA测序鉴定。脂质体介导重组质粒转染Raji细胞,采用RT-PCR法观察重组质粒对bcl-2mRNA表达的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果酶切及测序鉴定表明,成功构建bcl-2shRNA的质粒表达载体pGenesil-1-bcl-2-544和pGenesil-1-bcl-2-1009。转染Raji细胞48h后,RT-PCR结果显示Raji细胞中bcl-2mRNA表达分别下调了(31.95±3.02)%和(47.57±2.88)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Raji细胞凋亡率分别为(14.25±0.84)%和(11.96±0.79)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,它能有效沉默bcl-2基因在B细胞淋巴瘤中的表达并促进B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡。
- 秦陈浩申咏梅宋妙丽冯萍
- 关键词：RNAIBCL-2B细胞淋巴瘤RAJI细胞
- RNAi沉默生存素基因抑制Raji细胞增殖
- 2011年
- 目的生存素(survivin)短发夹RNA(shRNA)重组质粒转染B细胞淋巴瘤Raji细胞,体内、外观察对该基因表达的干扰作用及抑制细胞增殖的效果。方法实验分为空白对照(D)组、A组、B组和C组,分别用生存素干扰重组质粒A、B和阴性对照重组质粒转染Raji细胞,经G418筛选获得各重组质粒稳定转染细胞,RT-PCR比较各组生存素mRNA表达差异,FCM测定比较各组生存素蛋白的表达,通过细胞计数比较各组细胞增殖能力的差异。结果成功筛选出稳定转染的Raji细胞。与空白对照组相比,质粒A和质粒B对生存素mRNA的抑制率分别为70.01%和46.46%(P<0.05),对蛋白表达抑制率分别为64.15%和41.16%(P<0.05),两干扰组稳定转染细胞的增殖能力明显下降;质粒A对生存素基因的干扰作用较质粒B明显,抑制瘤细胞增殖的效果也更为明显。结论生存素干扰重组质粒A和B能干扰Raji细胞生存素基因表达,抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖。
- 秦陈浩申咏梅朱雪明杜鸿宋妙丽
- 关键词：RAJI细胞生存素
