国家自然科学基金(81001524)
- 作品数：7 被引量：45H指数：4
- 相关作者：丁治国陈晓珩高翔李乃卿何蓓更多>>
- 相关机构：北京中医药大学东直门医院北京中医药大学第三附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市中医管理局中医药科技项目更多>>
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- 人VEGF基因慢病毒介导RNA干扰有效靶点的设计及筛选被引量：4
- 2013年
- 目的:设计并筛选人血管内皮生长因子(VEGF)有效RNA干扰片段,构建VEGF慢病毒表达载体。方法:对人VEGF基因编码区分析,筛选序列3条,阴性对照序列l条,通过连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测干扰效果。结果:测序证实3个VEGF基因RNAi慢病毒载体质粒构建成功。慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度分别为3.23×109、3.30×109、3.73×109TU/mL。3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L后,VEGF基因在mRNA水平受到抑制,其中miR-200序列效果最佳,对VEGF基因表达的干扰效率可达72%。结论:成功构建并筛选了人VEGF基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究VEGF基因与抗肿瘤药物药效关系提供实验基础。
- 丁治国何蓓陈晓珩汪唐顺高翔李乃卿
- 关键词：慢病毒载体血管内皮生长因子基因RNA干扰
- VEGF干扰慢病毒载体的构建及其在MHCC97L细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的构建VEGF基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中表达。方法根据人VEGF基因序列,设计并合成包含靶序列的互补DNA链,连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测RNAi组(MHCC97-200)、阴性对照组(MHCC97-NEGA)和空白对照组(MHCC97-空白)中VEGF的表达情况,确定其干扰VEGF表达的有效性。结果测序证实慢VEGF基因RNAi病毒载体质粒构建成功。慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度为3.23×109TU/mL。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L 48 h后,VEGF基因在mRNA水平抑制了72.2%。结论 VEGF基因RNAi慢病毒载体构建成功,并实现在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。
- 丁治国何蓓陈晓珩汪唐顺高翔李乃卿
- 关键词：VEGF基因慢病毒载体RNA干扰
- STAT1干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应测定被引量：2
- 2015年
- 目的 :构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应。方法 :根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体p LKO-1-EGFP-puro-sh RNA,构建sh RNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-time PCR和Western Blot检测RNAi组(MHCC97L-stat1-sh RNA-1)和对照组(MHCC97L-stat1)中STAT1基因的表达情况,确定其干扰STAT1表达的有效性。结果:测序证实慢STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48 h后,STAT1基因在m RNA水平和蛋白质水平上表达明显降低。结论:STAT1基因RNAi慢病毒载体构建成功,能够在人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株中表达,并具有显著的基因沉默效果。
- 丁治国何蓓陈晓珩李会龙高翔张韬王鑫李乃卿
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰
- 参芪扶正注射液联合干扰素-α治疗中晚期原发性肝癌被引量：12
- 2014年
- 目的:探讨参芪扶正注射液联合干扰素-α治疗中晚期原发性肝癌的临床疗效及不良反应。方法:通过回顾性病例研究,选取已经失去了手术、放疗及化疗的中晚期原发性肝癌患者单独应用干扰素-α和联合应用干扰素-α及参芪扶正注射液患者的肿瘤缩小率、生存期、Karnofsky功能状态(KPS)评分、治疗期间体重变化及治疗过程中毒副反应进行对比研究。结果:联合用药组肿瘤缩小率在6个月时两组疗效差异无统计学意义;12,24个月时研究组总有效率优于对照组(P<0.05);联合用药组患者6,12,24个月生存率高于对照组(P<0.05);联合用药组患者KPS评分高于对照组(P<0.05);联合用药组患者体重下降情况低于对照组(P<0.05);联合用药组患者毒副反应低于对照组(P<0.05);联合用药组患者治疗后血清谷氨酰转肽酶(GGT)水平与对照组相比差异无统计学意义,而血清AST水平优于对照组(P<0.05)。结论:参芪扶正注射液联合干扰素-α在治疗中晚期原发性肝癌时起到增效作用,在延长患者生存期、改善患者的生活质量方面有独特疗效,而且毒副反应轻微,值得临床推广应用。
- 汪唐顺陈晓珩丁治国高翔冯雪李乃卿
- 关键词：中晚期原发性肝癌干扰素-Α参芪扶正注射液
- STAT1过表达慢病毒载体的构建及其在MHCC97L细胞中的表达被引量：4
- 2013年
- 目的:构建STAT1基因过表达慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。方法:根据人STAT1基因mRNA序列,全基因合成STAT1基因,构建至过表达载体并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用荧光定量PCR和Western blot检测原始细胞株(MHCC97L),稳转细胞株(MHCC97-stat1)中STAT1的表达情况,确定STAT1过表达的有效性。结果:测序证实STAT1基因过表达载体构建成功。过表达慢病毒包装成功。慢病毒转染人肝癌细胞MHCC97L 48 h后,STAT1基因在mRNA水平和蛋白质水平上表达显著增加。结论:STAT1基因过表达慢病毒载体构建成功,并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。
- 丁治国何蓓陈晓珩汪唐顺高翔李乃卿
- 关键词：慢病毒载体
- 针对人STAT1基因的RNA干扰有效靶点的设计与筛选被引量：1
- 2015年
- 目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-timePCR检测干扰效果。结果:测序证实3个STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48h后,STAT1基因在mRNA水平表达均受到抑制,其中MHCC9-L-stat1-shRNA-1序列效果最佳,对STAT1基因表达的干扰效率可达81.4%。结论:成功构建并筛选了人STAT1基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究STAT1基因与抗肿瘤药物药效关系奠定基础。
- 丁治国何蓓陈晓珩李会龙高翔张韬王鑫李乃卿
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰
- 参芪扶正注射液对化疗后免疫抑制的减毒作用被引量：28
- 2011年
- 目的:探讨参芪扶正注射液含药血清对化疗药物所造成免疫抑制的减毒作用。方法:选用Wistar雄性大鼠20只,随机分为含药血清组和空白血清组。含药血清组按40 g.kg-1.d-1的剂量尾静脉注射参芪扶正浓缩液,每日给药2次,连续给药5次。空白血清组给予生理盐水代替参芪扶正浓缩液,余相同。2组大鼠于末次给药后1 h后自腹主动脉采血,分离血清。研究设药物组和对照组。药物组分别用5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射液(50 mg.L-1)、顺铂注射液(6.25 mg.L-1)、参芪扶正注射液含药血清作用于小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞;对照组用空白血清作用于RAW264.7细胞。利用酶标仪对作用后的RAW264.7细胞进行检测,观察5-Fu注射液、顺铂注射液、含药血清对RAW264.7细胞增殖的影响。结果:单用参芪扶正注射液组与空白对照组相比能明显促进RAW264.7细胞增殖(P<0.01)。5-Fu、顺铂注射液联合含药血清后与单用5-Fu、顺铂注射液相比,对于RAW264.7细胞增殖的抑制明显降低,其差异皆有显著性(P<0.01)。结论:参芪扶正注射液在体外环境下可促进巨噬细胞的增殖,改善化疗药物所造成的免疫抑制,对不同化疗药物的减毒趋势相同而减毒强度不同。
- 史晓光丁治国张林
- 关键词：化疗参芪扶正注射液RAW264.7细胞
