国家科技重大专项(2008ZX08012-003)
- 作品数：11 被引量：39H指数：4
- 相关作者：王晶董莲华李亮隋志伟余笑波更多>>
- 相关机构：中国计量科学研究院中国计量学院中华人民共和国农业部科技发展中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：一般工业技术机械工程生物学农业科学更多>>
- 基于母离子排除的串联质谱数据采集方法的研究被引量：1
- 2010年
- 生物样本中的蛋白质复杂程度很高,尚无一种分析方法能够全面分析复杂生物样本中的所有蛋白质。实验证明:重复的质谱分析能增加蛋白质的鉴定数量,但鉴定到的蛋白质冗余度很高,高丰度肽段被反复检出。为了降低鉴定冗余度,提高鉴定效率,对线性离子阱-傅立叶变换离子回旋共振质谱仪的串联质谱采集方法进行了研究,建立了基于母离子排除的串联质谱采集方法。此方法能极大降低二级质谱采集的冗余度,提高蛋白质的鉴定效率。
- 米薇王晶应万涛贾伟蔡耘钱小红
- 关键词：液相色谱-串联质谱
- 转基因玉米TC1507基体标准物质协同实验及不确定度评定被引量：1
- 2011年
- 7家实验室共同采用实时荧光定量PCR方法，对转基因玉米TC1507基体标准物质A、B、c3种含量水平的量值，进行了协同实验研究，并对得到的参考值进行了不确定度分析。实时荧光定量PCR方法协同实验结果表明，转基因玉米TC1507基体标准物质转基因含量的参考值分别为0．41％±0．22％、1．1％±0．4％、4．5％±1．2％（k=2）。
- 臧超傅博强宋贵文孟亚男王晶董莲华余笑波隋志伟李亮杨立桃
- 关键词：计量学基体标准物质实时荧光定量PCR
- 转基因玉米MON810基体标准物质Q—PCR量值协同实验研究被引量：1
- 2011年
- 针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质，组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法进行了协同实验研究，并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析。经过加权平均，转基因玉米MONS10A、B、C3个水平的基体标准物质转基因含量的Q—PCR方法参考值分别为0．51％±0．10％、1．1％±0．2％、4．7％±0．7％（k=2）。
- 傅博强臧超宋贵文孟亚男王晶董莲华余笑波李亮隋志伟杨立桃
- 关键词：计量学转基因玉米基体标准物质实时荧光定量PCR
- 转基因玉米T25基体标准物质协同实验研究被引量：1
- 2014年
- 对转基因玉米125转化体特异性荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，选择了7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米125基体标准物质进行协同实验研究。通过比较分析各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数，进一步证明该方法室间重复性好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度，因此计算各实验室的总平均值做为标准物质的标准值。3个水平的基体标准物质的标准值和扩展不确定度（k=2）分另Ⅱ为1．17％±0．22％、2．17％±0．38％和9．81％±2．30％。
- 董莲华李亮周云龙曹应龙沈平卢长明王晶刘张岚
- 关键词：计量学转基因玉米基体标准物质实时荧光定量PCR
- 转基因玉米NK603基体标准物质协同定值实验被引量：2
- 2012年
- 对转基因玉米NK603基体标准物质荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，结果表明该方法适合于标准物质量值协同实验。选择7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米NK603基体标准物质量值进行了协同实验，通过分析比较各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数，进一步证明该方法室间重复性较好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度，3个水平基体标准物质的量值和扩展不确定度分别为0．57％±0．11％、1．21％±0．30％和4．92％±1．80％（k=2）。
- 董莲华隋志伟余笑波李亮王晶
- 关键词：计量学转基因玉米基体标准物质实时荧光定量PCR
- 螯合稀土金属标记蛋白质技术的建立与优化被引量：1
- 2010年
- 建立了一种基于螯合稀土金属标记蛋白质的技术,优化了影响标记效率的各种条件。在50mmol/LTEAB缓冲体系(pH7.5),DTPA与肽段摩尔比为100∶1,常温反应30min的条件下,DTPA标记完全;在100mmol/L乙酸铵缓冲液(pH6.0),稀土金属与DTPA摩尔比为4∶1,37℃反应1h的条件下,稀土金属螯合反应完全。考察了不同稀土金属的螯合效率,发现离子半径最小的Lu螯合效率最高。本方法被成功应用于肽混合物标记。
- 米薇王晶应万涛蔡耘钱小红
- 关键词：质谱
- 基于电感耦合等离子体质谱的蛋白质定量技术研究进展被引量：6
- 2010年
- 综述了ICP-MS法应用于蛋白质定量技术方面的研究进展.蛋白质定量研究已成为蛋白质组学研究领域的热点,它是解析生物体蛋白质功能的重要途径.基于同位素标记和生物质谱分析技术是蛋白质定量最常用的方法之一,近年来,随着质谱技术的发展,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术成为元素测量的重要手段,这使其在蛋白质定量中具一定的应用前景.
- 米薇王晶
- 关键词：电感耦合等离子体质谱蛋白质组学
- 基于共价色谱分离的含半胱氨酸肽段富集策略被引量：2
- 2010年
- 多维色谱分离、串联质谱分析技术已在蛋白质组研究中得到广泛应用。然而生物样品的蛋白质以及全酶切肽段具有高度的复杂性,这严重干扰了蛋白质高通量、规模化的分析。通过标签肽段富集进行样品预分离可以降低体系的复杂程度。本文建立了一种基于共价色谱技术选择性分离富集含半胱氨酸肽的方法,从而降低了样品体系的复杂程度。首先以牛血清白蛋白(BSA)的酶切肽段为模型,对富集条件进行了优化和考察,并在此基础上通过5种蛋白质酶切肽段混合物的富集对该方法进行了验证。结果证明此方法的重现性好,富集效率高,富集特异性好,能有效地富集鉴定含半胱氨酸肽段。所建立的方法在复杂体系的蛋白质组研究中具有广泛的应用前景,为复杂样品的蛋白质高通量、自动化、规模化鉴定和定量研究提供了实用技术。
- 米薇王晶应万涛贾伟蔡耘钱小红
- 关键词：液相色谱-串联质谱蛋白质组
- 转基因玉米pUC57-BT11质粒标准分子的构建与适用性研究被引量：5
- 2011年
- 构建了含有转化体特异性片段（BT11-93bp）和玉米的内标准基因片段（zSSIIb-151bp）的质粒分子pUC57-BT11，经酶切和测序验证后，对其特异性进行检查。采用测序和荧光定量PCR法对该质粒分子进行定值，结果为1．01±0．叭（k=2）。通过质粒分子和基因组DNA产生的内源和外源基因比较，发现两者标准曲线斜率无显著差异，线性相关系数均〉10．99。利用pUC57-BT11质粒分子对已知含量的转基因基体标准物质进行转基因含量测定，结果发现采用pUC57．BT11质粒分子对标准物质的测定结果与其标准值-致，表明pUC57-BT11质粒分子可作为转基因玉米BT11转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。
- 董莲华李亮王晶赵正宜臧超
- 关键词：计量学转基因玉米标准物质
