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甘氨酸抑制脂多糖介导的鼠枯否细胞激活的时相选择及机制探讨被引量：9: 2006年; 目的探讨甘氨酸抑制脂多糖介导的鼠枯否细胞激活效应相关机制和甘氨酸的最佳用药时机。方法将40只BALB/c小鼠分为内毒素组、预防组、早期治疗组和后期治疗组,每组10只。分离培养枯否细胞后,内毒素组加入脂多糖(10mg/L),预防组、早期治疗组和后期治疗组分别在加入脂多糖前24h、加入后0和4h加入甘氨酸(1mmol/L),分别在加入脂多糖后0、1、2、6和12h,采用逆转录聚合酶链反应及蛋白印迹法测定枯否细胞的白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)mRNA和蛋白表达水平,用酶联免疫吸附法检测枯否细胞的核因子κB(NFκB)活性和培养上清液的肿瘤坏死因子α(TNFα)含量。结果脂多糖刺激后,预防组的IRAK4mRNA和蛋白表达、NFκB活性的相对峰值分别为3.64±1.13、34.54±10.31、0.47±0.10,TNFα峰值为(1780.70±210.17)pg/ml,与早期治疗组比较,差异均无统计学意义,但与内毒素组和后期治疗组比较,各峰值均明显降低,差异有统计学意义。结论提前或者在脂多糖刺激的同时应用甘氨酸,能有效抑制脂多糖介导的枯否细胞激活效应,其作用机制之一可能为抑制IRAK4的表达。; 刘作金游海波李旭宏陈先锋刘海忠彭勇刘长安龚建平; 关键词：枯否氏细胞甘氨酸内毒素类

白细胞介素-1受体相关激酶-4短发夹RNA阻断库普弗细胞激活效应的实验研究被引量：4: 2005年; 目的探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)特异性短发夹RNA(shRNA)阻断内毒素诱导的库普弗细胞(KCs)激活效应的可行性。方法构建两对表达IRAK-4-shRNA的阳性载体质粒(pSⅡRAK-4-A,pSⅡRAK-4-B)及一对阴性载体质粒(pSⅡRAK-4-C)。分离培养小鼠KCs,分为正常对照组,RNA干扰(RNAi)对照组(转染pSⅡRAK一4 C)与RNAi抑制组(转染pSⅡRAK-4-A, pSⅡRAK-4-B)。质粒转染后24 h,加入0.1 μg/ml脂多糖(LPS)。6 h后,蛋白免疫印迹法及逆转录-聚合酶链反应测定IRAK-4蛋白和mRNA表达水平;酶联免疫吸附法检测0、1、3、6、12 h后KCs的核因子- κB(NF-κB)活性及培养上清液中肿瘤坏死因子α含量。结果RNAi抑制组IRAK-4表达水平,以及LPS刺激后NF-κB活性、肿瘤坏死因子α峰值均明显低于正常对照组和RNAi对照组,t值分别为22.50, 4.18及958.49,P<0.01;尤其是pSⅡRAK-4-A组,抑制效果明显优于pSⅡRAK-4-B,t值分别为12.60, 3.36及256.39,P<0.01。结论以IRAK-4为靶点的shRNA能有效的阻断内毒素诱导的KCs激活效应。; 刘作金李生伟刘长安游海波彭勇李旭宏陈先锋龚建平; 关键词：库普弗细胞白细胞介素-1受体短发夹RNA 细胞激活相关激酶阻断

IRAK-4活性在脂多糖预处理减轻肝脏缺血再灌注损害中作用的实验研究: 2006年; 目的:观察脂多糖(LPS)预处理后白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)表达水平在大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)早期的变化,探讨LPS预处理减轻肝脏缺血再灌注损害(I/R I)的相关机制。方法:雄性SD大鼠,随机分为正常对照组,缺血再灌注组(I/R组)和LPS预处理组(LPS组)。正常对照组未予任何处理;LPS组第1 d经尾静脉给予脂多糖0.1mg.kg-1,第2、3、4、5 d给予0.5 mg.kg-1;I/R组给予等体积0.5 mL无菌PBS液。第8 d,建立肝脏缺血再灌注模型。再灌注后0 m in、60 m in及180 m in,蛋白免疫印记法及逆转录-聚合酶链式反应测定肝组织的IRAK-4蛋白和mRNA表达水平;酶连免疫吸附法检测肝组织NF-κB活性及血清TNF-α含量。结果:再灌注0 m in,IRAK-4蛋白与mRNA表达水平依次为LPS组>I/R组>正常对照组(P<0.01),NF-κB活性以及TNF-α含量LPS组与I/R组差异无显著(P>0.05),但均高于正常对照组(P<0.01);再灌注后60 m in及180m in,LPS组的IRAK-4蛋白与mRNA表达水平,NF-κB活性以及TNF-α含量却明显低于I/R组(P<0.01)。结论:抑制IRAK-4表达是LPS预处理减轻肝脏I/R I的重要机制之一。; 刘作金刘长安游海波陈先锋李旭宏龚建平; 关键词：再灌注损伤脂多糖类

阻断内毒素胞内信号转导通路对大鼠移植肝脏再灌注损伤的影响被引量：3: 2006年; 目的探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)为靶点,阻断内毒素胞内信号转导后对大鼠移植肝脏再灌注损伤(I/RI)的影响并探索肝移植时可行的RNA干扰(RNAi)治疗途径。方法两袖套法建立SD大鼠同种异体原位肝移植模型,随机分为冷缺血转染组、活体转染组及对照组。冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带IRAK-4-shRNA的质粒pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入pSIIRAK-4;对照组不予任何处理。按门静脉血流恢复后第0min、60min及180min分为三个亚组,RT-PCR及Western-blot测定肝组织的IRAK-4mRNA和蛋白表达水平;ELISA法测定受体血清TNF-α含量。采用TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化。结果再灌注后冷缺血转染组的IRAK-4表达明显低于同时点的活体转染组及对照组(P<0.01);同时,肝细胞凋亡指数、血清TNF-α含量及肝细胞、血窦内皮细胞损伤程度也明显低于后者。结论以IRAK-4为靶点的冷缺血期shRNAs转染途径能有效阻断内毒素胞内信号转导,进而减轻肝移植时的I/RI程度。; 刘作金李生伟李旭宏彭勇游海波李寿柏龚建平; 关键词：缺血再灌注损伤内毒素

脂多糖预处理对大鼠肝移植再灌注期肝脏的保护作用及机制被引量：2: 2006年; 目的探讨脂多糖LPS预处理对大鼠肝移植再灌注期肝脏的保护作用及机制。方法90只雄性SD大鼠,分为假手术组(Sham组)、原位肝移植组(OLT组)和原位肝移植+LPS预处理组(LPS组)。Sham组只开腹分离肝十二指肠韧带,OLT组和LPS组按两袖套法进行肝移植。Sham组于分离肝十二指肠韧带后0、60、180 m in,OLT组和LPS组于门静脉血流恢复后0、60、180 m in分别测定各时相点血清TNF-α、ALT、AST水平及肝组织NF-κB活性,并取肝组织行光镜、电镜检查。结果再灌注后0、60、180 m in,OLT组与LPS组的NF-κB活性、TNF-α含量均高于Sham组(P<0.01);再灌注后60、180 m in,OLT组的NF-κB活性以及TNF-α含量均明显高于LPS组(P<0.01),且OLT组的ALT、AST水平明显高于LPS组(P<0.01),光镜及电镜下观察OLT组肝组织损害较LPS组重。结论肝移植再灌注期内毒素信号转导通路的NF-κB活性增强,产生炎性介质对移植肝造成损害;LPS预处理可降低肝移植再灌注期肝脏NF-κB活性和炎性介质的产生,从而减轻肝脏的损害。; 李洋刘作金龚建平; 关键词：肝移植再灌注损伤脂多糖

活体/离体门静脉灌注转染IRAK-4-shRNA对大鼠移植肝脏再灌注损伤的影响被引量：1: 2006年; 目的通过观察活体或冷保存期离体门静脉灌注供肝转染白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)特异短发夹 RNA(shRNA)对再灌注后受体 TNF-α产生的影响,判断以 IRAK-4为肝移植缺血再灌注损害(I/RI)治疗靶点的可行性并探索可行的 shRNA 治疗途径。方法雄性 SD 大鼠,随机分为冷缺血转染组、活体转染组、对照组,以两袖套法建立同种异体肝移植模型。冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带染 IRAK-4-shRNA 的转染质粒 pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入 pSIIRAK-4;对照组不予任何处理。按门静脉血流恢复后第0 min、60 min 及180 min 分为三个亚组,逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的染IRAK-4 mRNA 和蛋白表达水平;酶连免疫吸附法检测肝组织 NF-κ B 活性及血清 TNF-α含量。结果再灌注后活体转染组、对照组的 IRAK-4蛋白与 mRNA 表达水平、NF-κB活性以及 TNF-α含量均高于冷缺血转染组(P<0.01);冷缺血转染组的 IRAK-4表达明显抑制,再灌注后各时点差异无显著性(P>0.05)。结论以 IRAK-4为靶点的冷缺血 shRNAs 转染途径能有效减轻肝移植时的 I/RI,但能否以 IRAK-4作为预防其他器官的 I/RI 的治疗靶点尚需深入研究。; 刘作金李旭宏彭勇游海波李寿柏龚建平

甘氨酸对内毒素性肝损害保护作用的实验研究被引量：6: 2006年; 目的探讨甘氨酸(Gly)对内毒素(LPS)性肝损害的保护机制。方法BABL／c小鼠随机分为两组,LPS组经腹腔注射10 mg／kg的LPS,Gly组在注射相同剂量LPS前3 d开始喂饲含5％Gly的饲料。光镜观察组织病理学改变、免疫组织化学法检测Toll样受体4(TLR4)表达水平；酶联免疫吸附法检测血浆肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素10(IL-10)浓度及逆转录聚合酶链反应检测肝组织中TNFα、IL-10及TLR4的mRNA表达水平。结果Gly能明显提高小鼠存活率,肝脏病理损害程度减轻；Gly组TNFα水平显著低于LPS组,差异有统计学意义[(1852.80±126.64)pg／ml对(708.83±51.29)pg／ml,P＜0.05]；Gly组IL-10增加且高峰前移,与LPS组比较差异有统计学意义[(418.64±38.86)pg／ml对(344.09±31.70)pg／ml,P＜0.05]；Gly组肝组织中TNFα及TLR4表达也明显减弱,IL-10表达明显增强,与LPS组比较差异均有统计学意义[分别为TNFα：A值1.59±0.14对0.91±0.11；TLR4：A值0.97±0.12对0.53±0.11；IL-10：A值0.62±0.08对1.06±0.15；P值均＜0.05]。结论Gly能明显减轻LPS所致的肝损害,其机制可能与其下调肝脏各种细胞的TLR4表达,同时上调IL-10的水平有关。; 游海波王强李旭宏陈先锋刘作金龚建平; 关键词：甘氨酸脂多糖类肝疾病 TOLL样受体4

内毒素预处理诱导大鼠供肝缺血再灌注交叉耐受机制的研究被引量：11: 2005年; 目的探讨以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对缺血再灌注损害(I/RI)交叉耐受的相关机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、缺血再灌注组(I/R组)和内毒素耐受组(ET组)。以未经任何处理的大鼠肝脏为正常对照;ET组供体第1天经尾静脉给予脂多糖0.1 mg/kg体重,第2、3、4、5天给予0.5 mg/kg体重;I/R组供体给予等体积0.5 ml无菌PBS液。第8天,切取供体,以未经任何处理的大鼠为受体,两袖套法建立大鼠原位肝移植模型。按门静脉血流恢复后第06、0及180 min分为3个亚组。逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)mRNA和蛋白表达水平;酶连免疫吸附法检测肝组织核因子-κB(NF-κB)活性及血清TNF-α含量。结果再灌注后06、0及180 min,I/R组与ET组的IRAK-4蛋白与mR-NA表达水平,NF-κB活性以及TNF-α含量均高于正常对照组(P<0.01);再灌注后0 min,I/R组与ET组的NF-κB活性以及TNF-α含量差异无统计学意义(P>0.05),但IRAK-4蛋白与mRNA表达水平高于ET组(P<0.01);再灌注60 min及180 min,I/R组的上述各指标均明显高于后者(P<0.01)。结论抑制IRAK-4表达是以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对I/RI交叉耐受的相关原因,但能否以IRAK-4为减轻I/RI基因治疗的理想靶点尚有待进一步的研究。; 刘作金李生伟游海波彭勇龚建平; 关键词：内毒素肝缺血再灌注诱导大鼠内毒素预处理耐受机制白细胞介素-1受体逆转录-聚合酶链式反应

肝缺血再灌注对肠道损伤及细菌移位的研究进展被引量：6: 2006年; 肝缺血再灌注损伤除了对肝脏损伤外,还可因肠组织缺血缺氧、再灌注损伤、内毒素血症、免疫屏障受损等引起肠黏膜上皮细胞脱落、坏死,增加小肠通透性,促发肠道细菌和内毒素移位,诱发MODS,并且肝脏损伤和肠道损伤相互形成恶性循环。因此,在肝缺血再灌注过程中,有效的保护肠黏膜屏障,防止细菌和内毒素移位,将减少肝切除、肝移植等手术的并发症,提高其存活率。; 李洋刘作金龚建平; 关键词：缺血再灌注肠黏膜细菌移位内毒素

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重庆市自然科学基金(2005BB5242)

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