河北省自然科学基金(C2013204130)
- 作品数：12 被引量：16H指数：2
- 相关作者：仲飞张建楼张永红李秀锦霍珊珊更多>>
- 相关机构：河北农业大学燕山大学河北大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 重组鸡白细胞介素-7在HEK293T细胞中的表达及其条件分析被引量：1
- 2016年
- 为提高重组鸡白细胞介素-7(chIL-7)在真核细胞中的表达水平,本试验分析了影响基因表达的一些因素,包括转染方法、质粒用量、转染时间及表达时间等,对重组chIL-7表达水平的影响,并通过正交试验设计方法确定了利用HEK293T细胞表达重组chIL-7的最适表达条件。结果表明,在T75细胞瓶中,由脂质体介导使用30μg质粒,转染4h,表达48h和由磷酸钙介导使用40μg质粒,转染6h,表达60h可以获得较高的表达效率,表达水平分别为(124±9)和(94.3±8)μg/106个细胞。本结果为进一步研究chIL-7的功能提供有利条件。
- 霍珊珊王利月张永红张建楼徐建崔丹仲飞李秀锦
- 关键词：正交试验
- 猪CD163 cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立被引量：1
- 2016年
- 猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一。为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系。首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163cDNA,然后通过KpnI和XhoI将其插入到pcDNA3.1A质粒中,构建成真核表达载体。将表达载体转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出在细胞膜上稳定表达猪CD163的细胞系。结果显示,扩增出的猪CD163基因与基因库的序列基本一致,个别碱基的突变没有引起编码氨基酸的改变。通过转染表达载体和G418筛选,成功构建了稳定表达猪全长CD163基因的CHO-K1细胞系。经流式细胞仪检测证实,重组猪CD163可在CHO-K1细胞膜上进行表达,这为进一步研究PRRSV与CD163受体相互作用提供了必要条件。
- 徐建霍珊珊张建楼张永红崔丹仲飞李秀锦
- 关键词：CHO-K1细胞流式细胞术
- 人可溶性CD83在体外抑制PBMC分化为树突状细胞的研究
- <正>CD83属于Ⅰ型免疫球蛋白超家族(IgSF)糖蛋白,表达于成熟的树突细胞(DC),被认为是人类和小鼠成熟DC的一个特定的标志物。然而CD83具有多种免疫调节作用。研究发现CD83有两种形式,细胞膜结合CD83和由膜...
- 林洪羽徐建能昌爱王利月仲飞李秀锦
- 文献传递
- IL-2与IL-7基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用
- <正>试验目的:探讨犬白细胞介素-2(cIL-2)与犬IL-7(cIL-7)基因对犬细小病毒(CPV)VP2蛋白DNA疫苗免疫增强的协同作用。【方法】利用含内部核蛋白体进入位点(IRES)的真核表达载体构建cIL-2和c...
- 陈慧慧王利月林洪羽王永红张考李文艳温洁霞仲飞李秀锦
- 文献传递
- IL-15基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用被引量：1
- 2016年
- 为弄清犬白介素-15(cIL-15)能否增强犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究首先通过RT-PCR方法从犬脾脏淋巴细胞中扩增全长cIL-15cDNA基因,并构建其与Myc-His-tag融合和非融合的表达载体:pcDNA-cIL-15/MH和pcDNA-cIL-15。将pcDNA-cIL-15/MH载体转染HEK293T细胞,确定构建的表达载体能否介导cIL-15进行分泌表达。利用过去构建的VP2表达载体和pcDNA-cIL-15载体共免疫小鼠,用ELISA检测免疫后小鼠血清中的抗体滴度,并用MTT检测小鼠淋巴细胞的增殖活性和用ELISA测定淋巴细胞干扰素-γ和IL-4的表达。结果显示,构建的cIL-15表达载体能够介导cIL-15在真核细胞中的分泌表达。用VP2和cIL-15表达载体共免疫小鼠,抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P<0.01)。当免疫35d时,共免疫组淋巴细胞的刺激指数、干扰素-γ和IL-4的表达水平均明显高于VP2载体单免疫组(P<0.05)。结果表明,cIL-15可明显增强VP2DNA疫苗的免疫原性。
- 霍珊珊李楠吴峰洋崔丹张建楼张永红徐建仲飞
- 关键词：免疫佐剂犬细小病毒
- 密码子优化提高猪IL-7在HEK293T细胞表达的研究被引量：4
- 2017年
- 为提高重组猪白细胞介素-7(pIL-7)在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达,依据人偏爱的密码子对pIL-7基因进行了优化修饰,然后用pcDNA3.1A质粒构建其与Myc/His-标签融合的真核表达载体。将此表达载体和过去构建的野生型pIL-7表达载体分别转染HEK293T细胞进行表达,利用镍-琼脂糖凝胶颗粒从培养基中纯化表达的重组pIL-7,比较二者的表达水平。结果显示,密码子优化后pIL-7基因在HEK293T细胞中的表达水平为(45±3.2)μg/T25细胞瓶,比野生型pIL-7基因的表达水平(21±1.8)μg/T25细胞瓶,提高了2倍多,可见密码子优化可明显提高重组pIL-7在HEK293T细胞中的表达。这为猪IL-7的生物学功能的研究提供了必要条件。
- 崔丹温洁霞霍珊珊张建楼左玉柱仲飞
- 关键词：密码子优化真核细胞
- 单增李斯特菌对小鼠巨噬细胞炎性体的激活及其对滋养层细胞的免疫调节作用
- 试验目的:研究单增李斯特菌(LM)激活小鼠巨噬细胞的分子机制及其对小鼠滋养层细胞的免疫调节作用。试验方法:用野生型LM和溶血素(LLO)基因敲除的LM(LLO-/--LM)分别感染小鼠巨噬细胞系B6细胞和NLRP3-/-...
- 李文艳王利月林洪羽温洁霞张永红张建楼李秀锦黄河玲仲飞
- 重组单增李斯特菌溶血素O在HEK293T细胞中的分泌表达及活性分析被引量：2
- 2015年
- 为研究单增李斯特菌分泌的溶血素O(LLO)的免疫佐剂作用,需要构建其真核表达载体,使其在动物体内进行分泌表达,从而发挥其生物佐剂活性。为此,本试验通过PCR方法从LM基因组DNA中扩增了LLO基因,并将其插入到带有CD5信号肽的质粒pcDNA3.1ACD5sp的信号肽下游构建成真核表达载体,然后转染人胚肾细胞HEK293T细胞使其分泌表达,用Ni-NTA琼脂糖凝胶层析法从培养基中分离纯化重组LLO蛋白,通过Western-blot对其进行鉴定,并用溶血试验鉴定其生物活性。结果表明,扩增的LLO基因序列与GenBank中的基因序列完全一致,在HEK293T细胞中表达的重组LLO在CD5信号肽介导下能被分泌到细胞外,并具有较强的溶血活性,这为进一步研究LLO的功能提供了必要的条件。
- 常玉梅李文艳张永红张建楼温洁霞王利月仲飞
- 关键词：单增李斯特菌溶血活性
- 重组单增李斯特菌溶血素O在大肠杆菌中的分泌表达及活性分析被引量：2
- 2014年
- 单增李斯特菌是食源性致病菌,常引起人和动物的生殖障碍,由此菌分泌的溶血素O(LLO)是重要的致病因子。为研究LLO对细胞的毒性作用及对动物体生殖免疫的调节作用,需要制备大量重组LLO。为此本试验依据LLO基因序列(JN703918)通过PCR方法从单增李斯特菌菌株基因组中扩增无信号肽的LLO编码基因,然后将其插入到pET-20b(+)质粒中,使其5′端与载体中的pelB信号肽序列融合,3′端与His-标签融合,构建成LLO分泌性原核表达载体pET-20b-LLO/H。将载体分别转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,在IPTG的诱导下进行表达,利用Ni-NTA琼脂糖凝胶从细菌周质释放液中提取和纯化重组LLO蛋白,并通过SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。利用溶血试验检测重组蛋白的生物活性。结果表明,本试验扩增的LLO基因序列与GenBank中的LLO基因序列完全一致。采用分泌性表达策略实现了重组LLO在大肠杆菌中的分泌表达,并且表达的重组LLO具有明显的溶血活性。
- 李文艳张永红林洪羽李秀锦仲飞
- 关键词：单增李斯特菌大肠杆菌分泌表达
- PRRSV囊膜GP5/M双基因表达载体的构建
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业发展最严重的传染病之一,目前由于缺乏有效的疫苗未能得到有效控制。已知PRRS病毒(PRRSV)主要感染猪的肺泡巨噬细胞(PAM),我们在研究猪天然防御活性物质时发现,肺泡表面活性...
- 陈慧慧王利月林洪羽王永红张考李文艳温洁霞仲飞李秀锦
