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家蚕P450基因CYP18A1的克隆、序列分析及转录活性被引量：13: 2008年; 蜕皮激素对昆虫生长、发育和繁殖有重要调控作用,尤其对蜕皮和变态过程。利用GenBank上登录的蜕皮激素C26羟基化酶候选基因CYP18A1的氨基酸序列对家蚕Bombyx mori全基因组数据库进行BLASTP比对,发现了家蚕直向同源基因(ortholog),其完全编码序列经RT-PCR检测和克隆、测序验证后,再以此为信息探针检索家蚕表达序列标签(expressed sequence tags,EST)数据库进行拼接延伸,获得了一条包括5′非翻译区在内的长度为1737bp的cDNA序列,验证结果也表明与电子克隆序列完全一致(GenBank登录号为EF421988,P450命名委员会将其命名为CYP18A1)。该基因的开放阅读框为1623bp,编码541个氨基酸,含有包括P450s特征结构域在内的所有昆虫P450基因的5个保守结构域,其推定的分子量为61.67kD,等电点为8.54。将该基因cDNA序列与家蚕基因组序列进行比对,结果表明该基因具有6个外显子,5个内含子,外显子/内含子边界符合经典的GT-AG规则。同源性分析也发现家蚕CYP18A1与其他昆虫的直向同源基因具有较高相似性。用RT-PCR方法对家蚕主要发育变态时期与组织进行检测,显示出该基因的转录表达不仅具有时空特异性,而且在表达时期上与已报道的蚕体内蜕皮激素含量变化有紧密的一致性。该研究进一步证实了CYP18A1基因与昆虫体内蜕皮激素代谢平衡相关联。; 艾均文王根洪李艳红余泉友张学松朱勇向仲怀; 关键词：家蚕细胞色素氧化酶克隆转录活性

家蚕生殖细胞相关基因nanos的克隆表达及在胚胎发育中的表达模式被引量：2: 2007年; 【目的】探讨nanos基因在家蚕Bombyxmori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础。【方法】根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684bp的编码片段,对该片段进行了克隆和表达,亲和纯化表达的蛋白并免疫新西兰大白兔制备抗体。Western blot检测家蚕早期胚胎nanos的表达情况,荧光定量PCR检测nanos在整个家蚕胚胎发育中的表达情况。【结果】克隆并表达了一条长684bp的编码片段,得到了分子量约33kD的融合蛋白。用制备的抗血清对家蚕早期胚胎蛋白的Western blot检测表明,nanos在此阶段基本是恒定表达。荧光定量PCR结果显示刚产的卵中nanos的表达量最大,第2天开始急剧下降,此后到第10天表达量几乎没有变化。【结论】本实验克隆的nanos是家蚕中的一个同源物,该基因在家蚕胚胎发育中的表达模式与蜜蜂等有很大的不同,反映了昆虫生殖细胞形成机制的多样性。; 赵国力陈克平姚勤郭忠建; 关键词：家蚕 NANOS 胚胎发育原始生殖细胞 BLOT

家蚕高密度AFLP连锁图谱的构建被引量：10: 2008年; 为了进行家蚕Bombyx mori数量性状的QTL定位研究,以白色茧系品种C100（♀）和近交系大造（P50）（♂）杂交得到F1,用F1（♂）与双隐性标记的C100（♀）回交,得到回交一代（BC1）,用改进的AFLP分子标记方法,经96组选择性扩增引物扩增,获得分离比为1∶1（P≤0.05）的1744个AFLP位点。用Map Manager QTXb19（Version0.29）连锁图谱构建软件,构建了具有814个标记,36个连锁群的家蚕高密度AFLP分子标记连锁图谱。该连锁图谱覆盖的家蚕基因组长度为13005cM,连锁群长度变化范围为109.0～1573.7cM,连锁群的平均长度为361.25cM,其标记间平均图距15.98cM,最小图距2.3cM,最大图距47.7cM,标记间大于30cM的gap共有39个。该连锁图平均每个连锁群23个标记,最多一个连锁群有92个标记,最少8个标记。该连锁图谱确定了与经典实验遗传图谱第15连锁群和W染色体连锁群相对应的两个连锁群。; 张烈钱敏代方银赵爱春鲁成; 关键词：家蚕分子标记 AFLP

家蚕体节极性基因(Bmdpp)的克隆与表达研究: 2009年; 体节极性基因dpp是昆虫发育过程中的关键基因。采用生物信息学的方法,利用家蚕EST数据获得了家蚕dpp基因（Bmdpp）cDNA序列。该cDNA序列全长1 206 bp,ORF1 146 bp,编码381个氨基酸,预测蛋白分子质量38.6 kD,等电点9.18。将克隆的Bmdpp基因完整CDS序列亚克隆到pET-28a（＋）表达载体,转化、诱导后经SDS-PAGE电泳检测到约40 kD与预测分子质量相符的目的蛋白条带。对Bmdpp在家蚕胚胎不同发育时期的表达分析发现,该基因在受精614 h的表达量很低,甚至没有表达。这一表达模式和果蝇dpp基因在胚胎发育过程中的表达模式相似,推测Bmdpp在家蚕早期胚胎发育的背-腹轴分化中起作用。; 钱平吴阳春柴春利代方银鲁成; 关键词：家蚕胚胎发育基因克隆

基于mtDNA ND1基因的家蚕进化分析被引量：3: 2009年; 对中国青州野桑蚕mtDNA中ND1基因进行了克隆和序列分析。结果显示,野桑蚕ND1基因全长为933bp,编码310个氨基酸残基,A+T含量较高,达78.7%;同源性分析显示,不同来源的家蚕和野蚕ND1基因在核苷酸水平和氨基酸水平具有很高的相似性;以ND1基因的核苷酸序列及氨基酸残基序列进行了家蚕及野桑蚕的分子进化分析,进一步证明家蚕起源于中国野桑蚕。用mtDNA的ND1基因的核苷酸序列Blast家蚕的基因组序列,发现家蚕基因组中存在与ND1基因部分区域同源的序列,表明家蚕基因组中存在起源于线粒体的假基因。; 赵越胡小龙曹广力薛仁宇贡成良; 关键词：假基因分子进化

柞蚕核型多角体病毒ptp-2基因克隆及表达: 2007年; 为研究柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)ptp-2基因特性,根据ApNPV PstⅠ-C片段核酸序列,设计引物克隆了ApNPV ptp-2基因;将ptp-2基因亚克隆至原核表达载体pQE-30,构建重组质粒pQE-ptp-2,并在大肠杆菌M15中进行诱导表达,表达量达菌体总蛋白的38.7%,经His标签杂交鉴定证明表达产物为His融合蛋白.以原核表达的His-PTP-2蛋白作为抗原,制作兔多克隆抗血清,Western blot分析表明PTP-2蛋白不参与ApNPV包涵体的结构组成.; 石生林潘敏慧鲁成; 关键词：核型多角体病毒基因表达基因克隆柞蚕

Bmpkci is highly expressed in resistant silkworm strain:implication of its role in resistance to BmDNV-Z: Using fluorescent differential display technique,a special band named Bm541 was identified by screening for ge...; Ke-Ping Chen,Hui-Qing Chen, Xu-Dong Tang, Qin Yao,Lin-Ling Wang,Xu Hang (Institute of Life Sciences,Jiangsu University , 301# Xuefu Road,Zhenjiang 212013, P. R. China; 关键词：FDD; 文献传递

一种新的家蚕信息素相关蛋白基因BmP218的生物信息学分析及功能预测: 2009年; 在进行抑制性减法杂交实验中,我们获得一条差异基因片段,EST拼接终获得了这一个654bp ORF阅读框, NCBI数据库检索未发现同源基因。但在家蚕数据库检索有同源基因存在为一种信息素相关的结合蛋白,PCR实验结果表明该基因确实在家蚕多种组织中存在转录,证明是一种新的基因,暂命名为BmP218。进一步生物信息学分析表明该定位在家蚕的第23号染色体上,有7个外显子。其同源物物有8个,虽然基因结构不同,但结构域非常相似。蛋白质分析中发现蛋白结构中包含有6个α螺旋,12个不规则卷曲,在氨基酸序列中存在有一段与昆虫细小病毒衣壳蛋白类似的区域(100-183)。; 杨哲高路陈慧卿陈克平; 关键词：家蚕幼虫蜕皮激素结合蛋白

家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因BmGSTz1的克隆、序列分析及组织表达特征被引量：7: 2010年; 谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)是一个功能广泛的超基因家族,其中Zeta家族在动物、植物和细菌中均有分布。在哺乳动物中,Zeta GSTs具有马来酰乙酰乙酸异构酶(MAAI)活性,参与苯丙氨酸/酪氨酸的代谢过程。本研究对家蚕Bombyxmori基因组中预测的GST基因(BmGSTz1)进行了表达序列标签的搜索,经拼接后获得一条含有3′和5′非翻译区在内的长度为1239bp的cDNA序列,其3′端含有AATAAA加尾信号。BmGSTz1基因含有4个内含子,外显子/内含子边界均符合GT-AG规则。经TA克隆证实,BmGSTz1基因编码区序列全长648bp,共编码215个氨基酸。BmGSTz1推定的分子量为24.8kD,等电点pI为8.06。BmGSTz1与其他昆虫和哺乳动物GSTz1的氨基酸序列高度保守,进化分析表明家蚕BmGSTz1与黑腹果蝇Drosophila melanogaster、冈比亚按蚊Anopheles gambiae、意大利蜜蜂Apismellifera和赤拟谷盗Tribolium castaneum的GSTz1形成1∶1∶1∶1∶1的直系同源关系。RT-PCR和基因芯片数据表明BmGSTz1在家蚕5龄第3天幼虫各组织中都有表达。序列和组织表达特征分析结果提示家蚕BmGSTz1可能具有MAAI活性,这将为进一步深入研究BmGSTz1基因的功能提供参考。; 余泉友房守敏左伟东张泽鲁成; 关键词：家蚕谷胱甘肽-S-转移酶 CDNA克隆

IL-28A在家蚕BmN细胞及蛹体中的表达: 目的探讨IL-28A基因通过Bac-to-Bac家蚕杆状病毒表达系统在家蚕BmN细胞及蛹中进行表达。方法应用PCR、基因克隆及共转染等技术将IL-28A插入到家蚕杆状病毒多角体启动子的下游,构建重组病毒;并在家蚕细胞及家...; 陆叶张孝林郑小坚薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕 BAC-TO-BAC 细胞; 文献传递

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国家重点基础研究发展计划(2005CB121000)

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