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线粒体型蛋白frataxin在家蚕微孢子虫中的鉴定与分析被引量：2: 2008年; 【目的】Frataxin是铁硫簇相关蛋白,在线粒体代谢中起着重要作用。分析家蚕微孢子中该蛋白的结构特征,系统进化关系以及在孢子体内的转录翻译活性。【方法】基于家蚕微孢子全基因组序列,同源序列搜索获得该基因序列。进行蛋白二级结构比较,近缘物种共线性特征分析及系统进化树构建。此外构建pGEX-4T-1-Nbfra原核重组表达载体,转化E.coliBL21(DE3)进行目的蛋白表达纯化,以此为抗原免疫小鼠,制备抗体,并与家蚕微孢子总蛋白进行Western免疫杂交。【结果】Nbfra蛋白缺乏进入线粒体的信号序列,功能区缺乏部分α-螺旋;frataxin基因在不同微孢子基因组中的分布具有共线性特征,表明其在基因组进化中非常保守。系统进化分析显示微孢子形成独立进化支,并且与高等真核生物近缘,说明微孢子在进化地位上比其它原虫更加高等,支持了微孢子虫是真菌的姊妹枝的进化地位假说。【结论】免疫杂交结果表明Nbfra基因家蚕微孢子虫中能正常表达与翻译。本研究为微孢子的分类地位及线体假说提供了重要的补充依据。; 胡军华潘国庆许金山芦琨党晓群吴正理李艳红周泽扬; 关键词：FRATAXIN 共线性家蚕微孢子虫微孢子

蛋白质糖基化修饰研究进展被引量：32: 2009年; 蛋白质翻译后修饰是蛋白质组学的一个组成部分,而蛋白质糖基化是生命体中最重要的一种蛋白质翻译后修饰之一。糖基化在细胞免疫、信号传导、蛋白翻译调控、蛋白降解等诸多生物过程中起着重要作用。随着蛋白质组学技术的不断发展,糖基化研究也越来越受到广泛的关注。本文综述了糖基化的分类、在生命体中的作用、最新的研究技术及进展。; 李军杜鑫Hosseini Moghaddam S.H.陈玉银; 关键词：蛋白质糖基化免疫质谱

Analysis of Protein Expression Patterns of Silkworm Jinqiu and Its Cross Parents: 2009年; The differences of protein expression between the improved cross breeding race Jinqiu and its parents were analyzed to discuss the gene construction, and to form a base for illuminating the molecular mechanisms of successful cross breeding in silkworm. Protein samples from silk gland, hemolymph, and midgut were separated by 2-dimensional gel electrophoresis （2-DE）. In the three tissues the matched protein spots between Jinqiu and its cross parents were approximately 70% with approximately 30% specific protein spots. In the matched protein spots, 9-24% was differentially expressed representing up- and down-regulated expression. These specific protein spots might be either the newly appeared, which were produced from the genic interaction of cross parents＇ genes in cross breeding, or posttranscriptionally modified, which were produced from the different modifications on the same original proteins. These results indicate that it is important for a new successful breed, by cross breeding, relying on the actions of some newly produced functional proteins from genic interaction, in addition to marshaling excellent genes of cross parents.; YU FangYANG Hui-juanLI Jian-yingDING NongZHOU Zhong-huaYE JianZHANG Jin-weiDUAN Jia-longZHONG Bo-xiong; 关键词：SILKWORM PROTEOME HEMOLYMPH MIDGUT

家蚕五龄第1天与第4天后部丝腺蛋白质双向电泳图谱比较被引量：11: 2006年; 【目的】家蚕后部丝腺是合成分泌占蚕丝总量75%～80%丝素蛋白的器官,通过后部丝腺蛋白的研究,有利于阐明家蚕分泌丝素蛋白及蚕茧优质、高产的机理。【方法】采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,研究了家蚕不同品种五龄第1天和第4天后部丝腺细胞的蛋白质组成变化。【结果】发现各个品种五龄第1天和第4天后部丝腺细胞的蛋白质组成存在差异,但蛋白质水平的差异,远远小于从EST分析得出的基因表达水平的差异;不同家蚕品种,从五龄第1天到第4天,后部丝腺细胞的蛋白质组成的变化规律各不相同。【结论】暗示了家蚕丝素分泌的过程可能受到多种蛋白的调控,不同的品种,在调控位点及调控蛋白上存在着一定的差异,从而导致了不同品种家蚕后部丝腺细胞在分泌丝素能力上的差异。; 吴卫成叶键鲁华云李建营陈金娥孟智启倪春霄钟伯雄; 关键词：家蚕丝腺蛋白质双向电泳

家蚕hsp70启动子的克隆及功能研究被引量：6: 2011年; 该研究通过PCR的方法克隆得到家蚕热激蛋白70基因(Bombyx mori hsp70)的5'侧翼的两个长度分别为538 bp和305 bp的序列hsp70-538和hsp70-305。生物信息分析结果表明这两段序列在TATA序列的上游存在保守的热激元件HSE(heat shock element)CTnGAAnnTTCnAG。采用双荧光报告基因技术研究表明这两段序列在BmN细胞中都表现出热激活性,转基因家蚕实验证明hsp70-305在家蚕个体中也具有热激活性,可以认为这两个片段具有hsp70热激启动子特性。; 庄兰芳危浩林健荣钟伯雄; 关键词：热激家蚕

BmNPV抗性差异蚕品种感染病毒后的中肠蛋白质组变化分析被引量：3: 2009年; 为了了解家蚕受BmNPV侵染后中肠蛋白质组变化规律,探讨家蚕抗BmNPV的基因。经过对秋丰、白玉等9个不同系统的家蚕品种抗性比较试验,筛选获得BmNPV感染发病率相差72个百分点的抗性品种P50和感性品种306。采用蛋白质双向电泳技术分析比较了P50和306两品种经口接种BmNPV当天(5龄第1天)的家蚕与第4天(5龄第4天)家蚕的中肠组织蛋白质变化图谱,结果发现这两个品种感染病毒当天各有10个互不相同的特异蛋白斑点,感染第4天后306品种发现33个特异蛋白斑点,P50发现14个特异蛋白斑点,两品种的特异蛋白斑点也各不相同。这些蛋白斑点可能分别与抗性品种的抗性和感性品种的易感性有关。; 兰天云陈金娥张金卫杨惠娟李建营丁农钟伯雄段家龙; 关键词：BMNPV 中肠蛋白质组

重度感染家蚕微孢子虫的家蚕丝腺cDNA文库构建及EST测序分析被引量：4: 2009年; 用家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)感染家蚕品种大造的3龄幼虫,于感染后第10天选择有Nb重度感染特征的家蚕丝腺组织无菌操作提取RNA,构建Nb和家蚕丝腺混合样品cDNA文库(文库滴度≥1.6×106PFU/mL)。对文库进行测序,获得EST序列5 026条,其中家蚕丝腺EST3 901条、家蚕微孢子虫EST970条。拼接后,分别获得家蚕丝腺和Nb的单一EST(unique EST)563和383条。对EST和unique EST进行分析发现,感染后第10天家蚕丝腺中Nb的组蛋白、细胞分裂激酶等与孢子分裂增殖相关的基因表达水平较高,一些可能与Nb侵染或寄生适应相关的基因,如Nb孢壁蛋白、极丝蛋白、转运体蛋白等基因亦在此时期较高水平表达,尤其是此期间有相对高水平的组蛋白脱乙酰基酶基因表达,说明Nb基因的表达受到组蛋白去乙酰化方式的调控。对家蚕微孢子虫uniqueEST的序列特征分析发现,Nb mRNA UTR的长度和GC含量与其它微孢子虫差异较小,但ORF区的AT含量较高,即家蚕微孢子虫基因ORF序列较其它微孢子虫发生了高AT变化。Nb unique EST的功能注释及分类结果表明感染后第10天家蚕丝腺中的Nb孢子仍处于多形期,还未完全成熟化。; 李田潘国庆党晓群周泽扬; 关键词：家蚕微孢子虫家蚕丝腺 CDNA文库 EST

家蚕微孢子虫孢壁蛋白SWP25、SWP30、SWP32的表达谱分析被引量：4: 2009年; 研究家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的孢壁蛋白对于揭示家蚕微孢子虫感染宿主的分子机制具有重要意义。对已完成精细定位的家蚕微孢子虫孢壁蛋白SWP25、SWP30、SWP32在家蚕中肠组织中的表达谱进行了分析。RT-PCR结果表明,SWP32在感染后24 h就可以检测到其转录本,SWP25、SWP30的转录本在感染后36 h可检测到,提示SWP32可能在孢子裂殖体阶段就需要发挥作用;3种孢壁蛋白在感染3 d后其转录本均达到较高水平,并在感染过程中持续保持,在感染后第10天仍能明显检出。3种孢壁蛋白在感染3 d后转录本量明显增加的现象与家蚕微孢子虫的生活史相符合,即:孢子母细胞在此阶段迅速增加并向成熟孢子转化,成熟孢子的孢壁在这一时期形成。3种孢壁蛋白的表达能在感染早期阶段的家蚕中肠组织中被检出,为进一步探讨3种蛋白的功能提供了线索,也为开发基于这3种蛋白的分子生物学及免疫学特异性的家蚕微粒子病早期诊断技术提供了理论依据。; 潘国庆谭小辉党晓群李田郭广清周泽扬; 关键词：家蚕微孢子虫孢壁蛋白中肠组织表达谱

家蚕品种金秋及其杂交亲本的蛋白质表达谱分析被引量：3: 2008年; 【目的】探讨家蚕杂交育成品种及其亲本蛋白水平的差异,从蛋白水平分析育成品种的基因结构,为阐明杂交育种成败的分子机理创造条件。【方法】采用蛋白质组研究技术,分析杂交亲本及其育成品种的丝腺、血淋巴和中肠的蛋白质表达谱。【结果】3种组织器官中育成品种金秋与两个亲本的匹配蛋白斑点比例只达到70%左右,剩余30%左右是各个品种的特异蛋白斑点;在匹配蛋白斑点中,还有9%～24%的蛋白表现上调和下调。这些特异蛋白可能是两个亲本的基因在杂交育成品种中产生了互作而形成的新蛋白,也可能是对相同的蛋白进行了不同的修饰而获得的修饰蛋白。【结论】新品种的育成,除了汇集亲本的优良基因外,还有赖于基因互作产生的新功能蛋白的作用。; 余芳杨惠娟李建营丁农周仲华叶键张金卫段家龙钟伯雄; 关键词：家蚕丝腺血淋巴中肠

piggyBac转座子介导的转基因家蚕丝腺生物反应器研究进展被引量：5: 2011年; 综述了基于piggyBac转座子的转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的3个关键环节:(1)外源目的基因高效插入家蚕基因组;(2)转基因家蚕的高效、快捷的检测;(3)具有生物活性的外源目的蛋白的高效表达和纯化。同时介绍了有关转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的研究进展,为更好地利用转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白提供了参考。; 钟伯雄危浩庄兰芳; 关键词：家蚕 PIGGYBAC 转基因

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国家重点基础研究发展计划(2005CB121003)

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