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深圳市科技计划项目(TH200507131038A)
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双自杀基因重组腺病毒对胰腺癌细胞特异性杀伤作用
2008年
目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK融合基因系统(AdKDRCDTK)对胰腺癌细胞Capan-2特异性的杀伤作用。方法 重组腺病毒体外感染表达KDR的Capan-2细胞株,用不表达KDR的肝癌细胞HepG2做对照,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测转基因细胞CDTK的表达,然后给予不同浓度的前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV)和5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC),MTT法观察该体系对Capan-2和HepG2细胞生长增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞的病变;流式细胞仪检测细胞周期的变化和DNA含量的变化。建立Capatv-2裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射Ad-KDR-CD/TK,腹腔注射前药GCV(50mg·kg^-1·d^-1)和5-FC(500mg·kg^-1·d^-1)14d,观察肿瘤生长抑制效应。结果 腺病毒对两种细胞株的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-KDR-CDTK的Capan-2细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2生长,而不表达KDR的肝癌细胞HepG2对前药不敏感,且观察到该体系对Capan-2明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1,期比率增多,G2-M及S期细胞减少。在Capan-2裸鼠移植瘤模型中,该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的生长。结论 KDR启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2,诱导胰腺癌细胞凋亡,并可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。
闫振宇
陈旭
孔恒
黄宗海
俞金龙
厉周
关键词:
胰腺癌
自杀基因治疗
腺病毒
KDR启动子
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