江苏省自然科学基金(BK2006016)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李新宇郑家润徐兰芳宋莎莎高纪伟更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带HPV11型基因组细胞三维培养模型的建立及其衣壳蛋白L1的表达被引量：5
- 2010年
- 目的用携带人乳头瘤病毒11型(HPV11)基因组的角质形成细胞(HPV11.HaCaT细胞),在体外建立皮肤类似培养物三维模型,观察HPV11衣壳蛋白L1是否表达,为进一步建立体外病毒复制系统和药效筛选模型奠定基础。方法用人成纤维细胞和I型鼠尾胶原制备真皮类似物凝胶,接种HPV11.HaCaT细胞进行三维培养。同时以正常HaCaT细胞作对照。15天时取皮肤类似物进行冰冻切片,HE染色进行组织结构检查,免疫组化法检查角蛋白10、泛角蛋白以及HPV11L1蛋白表达。结果HE染色显示,HPV11.HaCaT细胞和正常HaCaT细胞的层数明显增多。免疫组化显示,两种细胞的皮肤类似物角蛋白10、泛角蛋白表达全部阳性。HPV11.HaCaT细胞表达L1蛋白阳性,而正常HaCaT表达L1蛋白阴性。结论三维培养方式可诱导HPV11.HaCaT细胞分化,皮肤类似培养物出现细胞分化标志,并且表达HPV11型衣壳蛋白L1。
- 王永芳李新宇宋莎莎徐兰芳高纪伟
- 关键词：人乳头瘤病毒角质形成细胞衣壳蛋白
- 人乳头瘤病毒11型基因组DNA在HaCaT株中的转染被引量：3
- 2009年
- 目的探讨转染与筛选技术获取稳定携带有HPV11基因组DNA的细胞的可能性。方法对含有pBR322.HPV11质粒的大肠杆菌培养扩增，然后进行质粒的提取与纯化，并用限制性内切酶BamHI切割下HPV11全长基因。低熔点琼脂糖回收后，用T4DNA连接酶进行线状DNA的自身环化，再与plK—neo质粒、用Lipofectamine试剂共转染HacaT细胞。通过G418筛选阳性细胞克隆，将阳性克隆细胞合并与培养扩增后，用FQ—PCR技术检测细胞内HPV11DNA的存在，用巢式RT—PCR技术检测HPV11E1^E4mRNA的表达。结果HPV11型基因组DNA转染至HaCaT细胞后，经G418筛选约2周，培养皿内即可见对G418抵抗的阳性细胞克隆出现，其形态与普通HacaT细胞相似。用FQ—PCR在筛选后的HaCaT细胞中检测到HPV11DNA的存在，平均病毒DNA载量为（15．9±16．8）拷贝／细胞。传代3次后细胞内病毒DNA无丢失，载量为（23．9±1．1）拷贝／细胞。与未传代细胞相比，二者间差异无统计学意义（t=-0.822，P〉0．05）。巢式RT—PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后检测到HPV11E1^E4mRNA表达的特异性628bp条带。结论HPV11基因组DNA可通过脂质体转染法成功导入HaCaT细胞内，通过筛选可获得阳性细胞，且经3次传代后HPV11DNA仍然存在。
- 吴剑波李新宇郑家润
- 关键词：基因转染
- 器官型筏式培养及其在HPV研究中的应用
- 2008年
- 人乳头瘤病毒是一类感染上皮细胞的小DNA病毒，其生活周期与上皮细胞的分化紧密联系，因此，绝大部分型别人乳头瘤病毒在体外单层细胞培养中不能产生病毒颗粒。器官型筏式培养能使上皮细胞模拟体内的鳞状分化，故作为人乳头瘤病毒研究的关键技术之一，应用于体外研究人乳头瘤病毒的自然感染史、生活周期，及评价潜在的抗病毒制剂的活性，推动人乳头瘤病毒的研究进程。
- 杨竹生李新宇林麟郑家润
- 关键词：人乳头瘤病毒细胞培养技术上皮细胞细胞分化
