国家高技术研究发展计划(2004AA217071)
- 作品数：8 被引量：40H指数：4
- 相关作者：杨安钢王成济贾林涛鲍炜马龙洋更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学唐都医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 针对尿激酶型纤溶酶原激活剂的siRNA的载体构建与表达
- 2005年
- 目的:构建针对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)mRNA的siRNA的表达载体,并观察其对转染细胞中的uPA表达的抑制作用.方法:化学合成用于产生针对uPA的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSU PER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序.把构建的载体转染乳腺癌细胞系MDA MB231,观察其对uPA的干扰作用.结果:限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对uPA的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA能够有效的下调uPA的表达.结论:成功的构建了针对uPA的发卡状RNA表达载体,为进一步研究uPA的功能和肿瘤的基因治疗打下基础.
- 黄红艳孙强刘家云李庆霞鲍炜贾林涛王成济杨安钢
- 关键词：SIRNARNA干扰尿激酶型纤溶酶原激活剂
- 重组抗HER2 ScFv／tBid基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用
- 2006年
- 目的:构建重组抗HER2 ScFv／tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。方法:将重组抗HER2 ScFv／tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT- PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。结果:转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv／tBid表达后有促凋亡作用。结论:重组抗HER2 ScFv／tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。
- 王芳王立锋裘秀春许彦鸣鲍炜孟艳玲王成济范清宇杨安钢
- 靶向X区的siRNA抑制乙型肝炎病毒基因的表达和复制被引量：4
- 2006年
- 目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因的siRNA表达载体,观察其对HBV基因表达和复制的影响。方法设计并合成针对HBVX区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG22·2·15细胞,潮霉素抗性筛选获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶基因mRNA的抑制效果,荧光定量PCR检测HBVDNA。结果成功构建了针对HBVX基因的siRNA表达载体pSUPER-X1和pSUPER-X2,两种siRNA均能明显抑制HepG22·2·15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为97%和88%,RT-PCR结果显示HBV的mRNA表达降低,荧光定量PCR结果证实siRNA能降低HBVDNA拷贝数2个数量级。结论载体产生的针对HBVX基因的siRNA能高效、特异地抑制HBV基因的表达和复制。
- 刘家云郝晓柯李庆霞黄红艳马龙洋温伟红贾林涛杨安钢
- 关键词：肝炎病毒乙型小分子干扰转染聚合酶链反应
- HER2分子与肿瘤靶向治疗被引量：19
- 2006年
- HER2分子是表皮生长因子受体家族的第二位成员,对细胞的生长、分化及存活有着重要的调节作用,在乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、肾细胞癌中其过表达与否是患者预后的重要指标。研究表明它与表皮生长因子受体家族其他3位成员形成异二聚体,通过多种信号转导途径促进肿瘤的增殖、转移、耐药性的产生,是肿瘤基因治疗的重要靶位点。
- 鲍炜裘秀春贾林涛张立红王成济杨安钢
- 关键词：表皮生长因子受体基因治疗
- hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用被引量：7
- 2005年
- 目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况.结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢.结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.
- 赵英任君琳孟艳玲张瑞马龙洋鲍炜王成济杨安钢
- 关键词：RNA干涉端粒酶HELA细胞
- 针对增强型绿色荧光蛋白RNA干扰表达载体的构建和鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的: 构建针对增强型(EGFP)的pSUPERsiRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并在哺乳动物细胞COS 7细胞中观察其干扰效果.方法: 设计针对EGFP编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BglⅡ和HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSUPER中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.通过脂质体介导,将重组干扰质粒与pIRESE2 EG FP瞬时共转染COS 7细胞, 48h后荧光显微镜下观察干扰效果.结果: 经酶切鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中已插入了目的基因片段.瞬时共转染后荧光显微镜观察结果显示: 只转染pIRES2 EGFP及共转染pIRES2 EGFP和空载体pSUPER的COS 7细胞中有大量的EGFP表达.而共转染pIRES2 EGFP和pSUPER R237、pSUPER R304、pSUPER R447的COS 7细胞中发出荧光的细胞数量明显减少,荧光强度也明显降低.结论: 成功构建了针对EGFP的RNA干扰表达载体pSUPER R237,pSUPER R304和pSUPER R447,并与pIR ESE2 EGFP瞬时共转染COS 7细胞,有效地抑制了EGFP在哺乳动物细胞中的表达.
- 马龙洋刘家云许彦鸣贾林涛王成济杨安钢
- 关键词：RNA干扰增强型绿色荧光蛋白
- 针对uPA的siRNA对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用被引量：1
- 2005年
- 目的:通过RNA干涉的方法抑制乳腺癌细胞中uPA的表达,观察uPA的表达抑制后对肿瘤细胞的体外侵袭能力的影响。方法:(1)构建可以表达针对uPA的siRNA的干涉载体,转染高侵袭性人乳腺癌细胞系MDA-MB 231,G418抗性筛选,挑选单克隆株;(2)分别通过RT-PCR和Western Blot的方法检测uPA的表达;(3)平板克隆形成试验检测转染前后肿瘤细胞的克隆形成能力;4Bovden chamber Assay检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果:(1)可以稳定表达针对uPA的siRNA的单克隆株,uPA的表达水平显著下降;(2)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株的克隆形成能力降低;(3)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株体外侵袭能力与原代细胞MDA-MB 231相比明显受到抑制。结论:uPA在人乳腺癌侵袭行为中发挥重要的作用,针对uPA的siRNA可以显著降低uPA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭,可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段。
- 黄红艳孙强李庆霞刘家云王凯鲍炜贾林涛王成济杨安钢
- 关键词：人乳腺癌细胞RNA干涉UPA体外侵袭能力肿瘤侵袭
- 人截短型凋亡诱导因子AIF△ 1-480的表达对HeLa细胞的促凋亡作用被引量：4
- 2005年
- 目的: 观察人截短型AIF(AIF△1 480 )基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用. 方法: 在人截短型AIF(AIF△1 120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1 480位氨基酸 )编码序列的人截短型AIF(AIF△1 480)基因.将其克隆入pIRES2 EGFP绿色荧光蛋白 (EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达以及对转染细胞形态的影响.结果: 成功构建了人截短型AIF(AIF△1 480)基因的真核表达载体.转染细胞后,可检测到人截短型AIF(AIF△1 480)分子的表达.转染后 48h,可观察到表达人截短型AIF(AIF△1 480 )分子的细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF(AIF△1 480)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.
- 刘湘丽于翠娟许彦鸣赵晶王成济杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子HELA细胞细胞凋亡
